脑梗死及多梗死性痴呆患者血清神经元特异性烯醇化酶的测定

目的研究脑梗死(CI)及多梗死性痴呆(MID)患者血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的变化及意思。方法对72例CI患者及55例MID患者血清中NSE浓度进行测定。智能水平采用简易智能量表(MMSE)测定,并参考DSM-Ⅳ诊断标准及Hachinski缺血评分。结果MID急性发作组及CI急性期组患者血清NSE浓度明显高于对照组(P<0.01);MID稳定期组患者血清NSE浓度低于对照组(P<0.05);CI恢复期组患者血清NSE的浓度与对照组无显著性差异。血清NSE的浓度与MMSE评分无显著相关(P>0.05)。结论血清NSE的含量变化可动态反应MID患者的脑组织功能状态。但是NSE并不是一种智能因子,并不能直接反应MID患者的智能状态。     

大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化及神经蛋白的动态表达

背景:现阶段骨髓间充质干细胞定向诱导分化为神经元样细胞的方法并不统一.目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经样细胞诱导分化的条件,及其定向分化过程中神经蛋白的动态表达.设计、时间及地点:细胞形态学观察及蛋白分子水平检测,于2006-09/2007-01在苏州大学生命科学学院完成.材料:清洁级SD大鼠2只.胎牛血清为杭州四季青产品,成纤维生长因子、丁羟基茴香醚为Sigma公司产品,二甲基亚砜为Amresco产品. 方法:Percoll法体外分离培养、扩增纯化大鼠骨髓间充质干细胞,调整细胞密度为5×107 L-1.设立2组,诱导组用含10%胎牛血清和10 μg/L成纤维生长因子的L-DMEM培养基预诱导24 h后,再以含2%二甲基亚砜和200 μmol/L丁羟基茴香醚的L-DMEM无血清培养基诱导1,3,5 h.对照组始终用含10%胎牛血清的L-DMEM进行培养.主要观察指标:细胞形态学变化,免疫荧光染色鉴定神经细胞表型.结果:预诱导24 h,胞体由原来的长梭形变成多角形或不规则形,伸出多个短棒状突起,可见2～3个核仁,细胞间漩涡状生长趋势消失,排列无规律;诱导1～3 h,细胞逐渐变圆,胞质收缩明显,折光性增强,双级或多极的突起互相连接呈网状;诱导5 h,突起出现一、二级分支.诱导1 h后部分细胞表达神经前体细胞表面抗原巢蛋白;3 h后巢蛋白达高峰,同时表达成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白;5 h后巢蛋白表达下降,神经元特异性烯醇化酶和微管蛋白达高峰.对照组细胞形态无明显变化,巢蛋白表达为阴性.结论:在添加化学诱导剂之前先使用成纤维生长因子进行预诱导,能促进骨髓间充质干细胞向神经前体细胞和神经元转化,且在诱导分化过程中神经蛋白分子的表达顺序与神经细胞发育过程一致.     

帕金森病大鼠模型的行为学及神经元形态学评价

背景：由于黑质致密部体积狭小，应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(Nigral dopaminergic neuron，NDN)制作帕金森病大鼠模型的成功率较低，一般仅为30％～40％左右。目的：探讨帕金森病大鼠模型建立后的行为学及神经元形态学改变。设计：完全随机的实验研究。地点和材料：安徽省药物研究所，SD大鼠，6-OHDA，阿朴吗啡，兔抗TH血清，SR-6N大鼠脑立体定向仪等。干预：将6-OHDA立体定向注射于90只SD大鼠的左侧黑质区及黑质纹状体通路，观察大鼠行为及多巴胺神经元形态学变化。主要观察指标：旋转行为，震颇及其他异常行为，免疫组织化学观察，电镜观察。结果：经阿朴吗啡诱导共筛选出64只成功大鼠模型(占71％)；免疫组化观察发现注射侧黑质区NDN较对侧明显减少，电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论：本方法是建立帕金森病大鼠模型的有效方法，在行为学和神经元形态学等方面同帕金森病人有许多相似之处。     

术中应用携氧液对高血压脑出血患者血清髓鞘碱性蛋白的影响

背景：在高血压脑出血的治疗中，目前临床上应用多种方式改善机体缺氧，术中应用携氧液是否对高血压脑出血患者神经细胞有保护作用?目的：研究高血压脑出血术中应用携氧液对患者神经元特异性烯醇化酶的影响及脑保护作用。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：研究地点为南京医科大学脑科医院临床麻醉研究室，对象为1999／2001年南京脑科医院收治的高血压脑出血手术患者。选择头颅CT示出血量40～60mL，美国麻醉协会(ASA)分级为Ⅰ～ⅡI级，其中男26例，女14例，平均62岁。随机分为携氧液组和对照组。方法：两组术中分别采用输注携氧液和平衡液。主要观察指标：分别观察两组患者术前和术后12h的血清髓鞘碱性蛋白的浓度，术前和术后第7天的格拉斯格评分以及手术各阶段的颅内压力。结果：两组颅内压在手术前和诱导后无差别，在清除血肿至术毕，携氧液组颅内压[(1．87&;#177;0．24，1．73&;#177;0．18)kPa]明显低于对照组[(2．10&;#177;0．38，1．92&;#177;0．22)kPa][(t=2．37，P&;lt;0．05；t=3．06，P&;lt;0．01)]；术后12h，携氧液组血清髓鞘碱性蛋白[(4．1&;#177;1．35)μg／L]明显低于对照组[(5．2&;#177;1．42)μg／L](t=2．58，P&;lt;0．05)。术后第7天，携氧液组格拉斯哥评分(13．6&;#177;0．88)明显高于对照组(12．7&;#177;1．22)(t=2．74，P&;lt;0．05)。结论：在高血压脑出血术中早期输入携氧液对血肿脑周围组织提供早期干预，有效减轻脑水肿，改善脑组织缺血缺氧，挽救血肿周围可逆性损伤的神经元是一项有效的措施，有利于高血压脑出血患者的脑保护。     

川芎嗪对大鼠癫痫放电时神经元超微结构变化的研究

目的：研究川芎嚓(TMP)对大鼠癫痫放电时其大脑神经元超微结构的变化。方法：使用青霉素致癫大鼠模型。采用BL-410生物机能实验系统记录腹腔注射不同剂量川芎嗪对双侧大脑皮层癫痫放电，观察川芎嗪对癫痫放电频率及振幅的影响。并用透射电镜观察大脑皮层神经元超微结构的变化。结果：与生理盐水对照组比较，川芎嗪可使大鼠癫痫放电频率减慢，振幅降低。并且随着频率的减慢和振幅的降低。大脑皮层神经元超微结构形态也恢复正常。结论：川芎嗪能明显抑制大鼠癫痫放电。并使神经元内的细胞器结构恢复正常。     

川芎嗪对原代培养大鼠海马神经元L型钙通道电流和胞浆内钙浓度的影响

目的研究川芎嗪(TMP)对海马神经元细胞膜L型钙通道电流(Ica.L)作用和对神经细胞内钙([Ca2 ]i)的影响.方法取新生24h内大鼠进行原代海马神经元培养,使用全细胞膜片钳技术联合激光扫描共聚焦显微镜观察TMP对神经元Ica.L和[Ca2 ]i的影响.结果①膜片钳证实, 10、30、100 μmol/L的TMP组能显著抑制Ica.L峰值,分别与对照组的(454.2±31.4)pA比较降至(276.4± 17.1、209.3±14.2和(135.8±16.0 pA,P＜0.05),使I-V曲线上移,且具有浓度依赖性,但对最大激活电位无明显影响.②激光扫描共聚焦显微镜测量发现,细胞外液有钙液时,10、30和100μmol/L TMP组能显著抑制60 mmol/L的KCL引起的细胞内钙荧光峰值(Fi)增加,与对照组的(1749.4±61.0)比较降至(1227.1±36.2、998.2±23.9和745.9±20.6,P＜0.05);在细胞外液无钙时,30 μmol/L TMP组也能显著抑制60 mmol/L KCL引起的[Ca2 ]i)库释放,与对照组(965.3±82.5)比较降至(789.6±75.6,P＜0.05).结论TMP具有对海马神经元钙通道Ica.L和[Ca2 ]i库释放的双重抑制作用,使[Ca2 ]i水平降低,这可能是其神经保护机制原因之一.     

人胎脑神经干细胞在年幼大鼠脑内的成神经元分化

目的:脑组织中不同部位的的神经元因功能不同具有特定的细胞形态,移植的神经干细胞能不能在相应部位分化成其相应的神经元还不明确.实验拟观察人胎脑神经干细胞植入年幼大鼠脑后的成神经元分化的作用,探讨神经干细胞替代治疗小儿脑病的可行性.方法:实验于2007-04/07在海军总医院细胞实验室内完成.①实验材料:16周孕龄的人胎脑组织由海军医院妇产科提供,实验经孕妇及家属知情同意,并经医院伦理委员会批准.14只出生后10d的同窝年幼SD大鼠,雌雄不分,由北京大学医学部实验动物中心提供,为二级清洁动物,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:自孕16周的人胎脑组织分离培养神经干细胞球,在脑脊液中培养诱导分化实验以证明其分化潜能.将培养14 d的神经干细胞球移植于10 d龄大鼠侧脑室内,于移植后第4,7,14天行人神经丝特异性标志的免疫荧光分析,显示神经元的分布和细胞形态.结果:①培养获得典犁神经干细胞球,呈漂浮生长,在小儿脑脊液中能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.②采用抗人神经丝混合单抗检测移植物的成神经元分化,移植后第4天,观察到阳性反应细胞在颗粒层表现为颗粒性细胞,锥体细胞层则出现长突起的锥体细胞,还有连接神经元样中间神经元,小脑内有单层排列的浦肯野细胞.对比各时间点的观察结果,阳性细胞分布位置未变,随着移植后天数的后延,阳性细胞数量呈减少趋势,但锥体细胞的突起明显加长.结论:体外培养获得的人神经干细胞经脑室途径移植于年幼大鼠,在脑内发生迁移,并分化成形态上与其所在位置的宿主细胞一致的神经元.提示宿主脑组织微环境在引导移植物分化成神经元中发挥了重要作用,该结果对细胞替代治疗小儿脑病有重要启示意义.     

低氧状态下海马神经元细胞信号转录因子和活化子3，5的基因表达状况

目的：探讨STAT3，5基因在缺氧性海马神经元细胞损伤中的可能作用。方法：分离新生Wistar大鼠双侧海马进行体外培养，采用Tripure试剂提取海马神经元细胞的总：RNA，自行设计大鼠STAT3，STAT5和阳性对照HPRT的PCR引物序列，通过半定量的逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)技术检测常氧组、低氧2，6，12h组海马神经元细胞的STAT3和STAT5基因的表达水平；采用PCR产物纯化试剂盒纯化PCR产物，而后用四色荧光法直接测序。结果：图像分析结果显示低氧培养2h组海马神经元细胞中STAT3，5mRNA表达水平升高，目的片段与HPRT的光密度比值分别为0.57&;#177;0.1l和0.64&;#177;0.09，在低氧6h组(0.85&;#177;0.14和0.86&;#177;0.11)达最高，与正常组(0.34&;#177;0.12和0.40&;#177;0.08)比较差别均有显著性意义(T=24.59～-7.37，P&;lt;0.01)。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组(P&;lt;0.01)。测序显示，PCR扩增的产物STAT3，STAT5与大鼠Genbank中的序列完全一致。结论：低氧增强海马神经元细胞中STAT3，5基因的表达，在低氧所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

神经生长因子对脑出血血肿灶周神经元和神经胶质细胞的影响

目的 探讨神经生长因子（NGF）对脑出血血肿灶周神经元和神经胶质细胞的影响。方法 健康家犬28只．随机分为两组：NGF组（n=20）：注血后0．5h，将NGF 2000 AU立体定向导入血肿灶周区；脑出血（ICH）组（n=8）：只注血，不注药。在ICH后1、3、10、28d四个时间点进行以下检测：①采用Purdy评分观察临床神经功能恢复情况。②采用免疫组化SP法，检测外源性NGF在血肿灶周脑组织中的有效表达。③激光共聚焦显微镜检测血肿灶周神经元烯醇化酶（NSE）、神经纤维酸性蛋白（GFAP）荧光单标阳性细胞的数目。结果 ①1～3d Purdy评分两组比较无显著性差异（P〉0．05），但10～28d评分NGF组显著好于ICH组（P〈0．05）。②NGF组血肿灶周免疫阳性细胞3d时大量出现，染色较深。持续10d，而ICH组表达量少且持续时间短（P〈0．05）。③NGF组激光共聚焦显微镜下NSE、GFAP单标阳性细胞数均明显多于ICH组（P〈0，05）。结论 外源性NGF立体定向导入血肿灶周区，早期能够通过保护神经元提高存活率；晚期能够通过促进胶质细胞适度增生、神经纤维生长来促进血肿灶周神经功能的修复。     

运动训练对小鼠脑局灶缺血后脑源性神经营养因子mRNA表达水平的影响

脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factbr，BDNF）在脑内分布广泛，大脑皮层、海马及基底前脑是其主要分布区，在基底前脑的胆碱能神经元及其末梢发现了BDNF的受体”。运动促进脑损伤后胆碱能神经元轴突的出芽再生，可能与BDNF的增多有重要关系。本研究旨在探讨运动训练是否可使小鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）后BDNF mRNA表达水平发生改变。