胰岛素样生长因子Ⅱ对体外培养成骨细胞辐射效应的影响

目的：检测不同浓度胰岛素样生长因子Ⅱ(Insulin-like growth factorⅡ，IGF-Ⅱ)对电离辐射后成骨细胞增殖、功能和分化方面的影响，探讨不同剂量辐射后IGF-Ⅱ对成骨细胞的效应。方法：成骨细胞通过酶消化法从SD大鼠颅骨中获取传代；将第3代细胞分别进行0、100、400、600和900cGy的γ线辐射，辐射后的细胞在含有不同浓度IGF-Ⅱ的培养液中培养6d，观察及检测成骨细胞的增殖、功能及分化等情况。结果：经电离辐射后，细胞的增殖、碱性磷酸酶活性及骨钙素含量均受到抑制。IGF-Ⅱ可有效降低100cGy辐射对增殖的抑制效应，1，10，和100μg／L的IGF-Ⅱ都改变了400cGy时的辐射效应，其中以10μg／L的浓度时最明显。结论：IGF-Ⅱ能有效促进成骨细胞辐射损伤的恢复，而这种作用有浓度依赖性，并取决于辐射损伤的程度。     

骨保护素和碱性成纤维生长因子pIRES载体的构建及初步鉴定

目的构建pIRES-opg-fgf2真核分泌表达穿梭载体,为进一步构建双表达重组腺病毒载体,并应用基因工程技术联合组织工程技术治疗牙周病的研究打下基础。方法将具有抑制破骨细胞功能的opg基因和促进细胞增殖分化和趋化粘附的作用的fgf2基因重组到pIRES载体中。结果编码opg基因片段和fgf2基因片段重组到pIRES载体,重组质粒经酶切、PCR鉴定,电泳显示均能得到与预期大小相符的片段。结论本研究成功构建了pIRES-opg-fgf2表达穿梭载体。     

染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究

目的研究染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响，以阐明其对骨形成的作用机制。方法酶消化和组织块相结合培养获得原代成骨细胞，并以成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞作对照，加入不同浓度的染料木黄酮后，流式细胞仪和噻唑蓝比色法(MTT)检测成骨细胞细胞周期比例的改变以及凋亡情况；生化法检测细胞内碱性磷酸酶含量的改变。结果流式细胞分析和MT观测结果表明：染料木黄酮促进了原代成骨细胞由G0(G1)期向S期、G2期和M期的移行过渡，从而促进了原代成骨细胞的增殖。染料木黄酮对成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞周期无影响，但可诱导UMR-106细胞凋亡。碱性磷酸酶检测结果表明：染料木黄酮可促进原代成骨细胞的分化。结论染料木黄酮可在一定程度上促进成骨细胞的增殖和分化，诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

Smad7反义寡核苷酸对TGF-β1调控人牙髓细胞生长和分化的影响

目的 :观察Smad7反义寡核苷酸对转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor -β ,TGF -β1)调控人牙髓细胞生长和分化的影响。方法 :细胞培养 ,细胞转染 ,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :Smad7反义寡核苷酸促进TGF -β1对人牙髓细胞增殖的诱导作用和对碱性磷酸酶活性的抑制作用。 结论 :Smad7参与介导TGF -β1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的调控 ,提示TGF -β1调控人牙髓细胞生长和分化可能是通过Smad信号途径发生的     

张应力下成骨性转录因子在骨髓间充质干细胞中的表达

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对单一周期的机械力刺激的反应以及Ets-1、Cbfa1和ALP的基因表达.方法:密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓MSCs;应用四点弯曲加力系统对细胞施加40 min、2 000μ8的机械牵张力,检测MSCs细胞增殖及ALP活性,并采用实时荧光定量RT-PCR检测Ets-1、Cbfa1和ALP的基因表达.结果:机械力刺激下,MSCs的增殖活力、ALP活性以及Ets-1、Cbfa1和ALP的基因表达均显著增高.Ets-1表达较早,加力后0.5 h达到最高峰;而Cbfa1表达较晚,加力后6 h达到最高峰;ALP的表达与Cbfa1相似.3个基因表达增高均在6～12 h后恢复到正常水平.结论:单一周期的张应力可诱导Ets-1、Cbfa1和ALP在MSCs中呈时间依赖性表达,并促使MSCs短暂性骨向分化.机械力刺激是MSCs骨向分化的关键驱动因子,对牵张成骨骨痂形成具有重要的作用.     

定量缓释基因重组碱性成纤维细胞生长因子／聚乳酸-聚羟基乙酸植入片的制备及体外释药研究

目的制备基因重组碱性成纤维细胞生长因子／聚乳酸-聚羟基乙酸（rbFGF／PLGA）定量缓释植入片，观察其一般性质、体外释药特性和rbFGF生物活性维持情况。方法溶剂挥发法制备rbFGF／PLGA植入片，用ELISA双抗体夹心法测定植入片中rbFGF含量，进行体外释药试验，检测rbFGF释放速度和含量，并将植入片植入兔下颌牵张成骨区局部缓慢释放观察rbFGF活性。结果rbFGF／PLGA植入片表面光滑平整，质地均匀，rbFGF含量为3.613μg／片。标准曲线方程为C=1280，54A-99.21（n=7，r^2=0.9952），线性范围15.6，1000pg／ml。植入片体外第1天释放rbFGF 10.70％，第9天累积释放51％，第20天释放达到80％以上。兔下颌牵张成骨实验结果显示植入组新骨形成速度和质量均优于对照组。结论rbFGF／PLGA植入片制备工艺良好，植入片中rbFGF生物活性保存良好，具有定量缓释作用并能促进牵张成骨中新骨形成的速度和质量。     

过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠切牙碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）表达的影响，从分子水平探讨氟牙症的发病机制。方法将20只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为两组：对照组（饮用蒸馏水）和实验组（饮用100mg／L氟化水），复制氟牙症动物模型，8周末处死动物，获取切牙标本，免疫组化染色观察bFGF在大鼠切牙的表达定位及其在对照组与实验组切牙表达的变化。结果bFGF在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞中均呈阳性表达。实验组bFGF的表达明显弱于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论过量氟可抑制bFGF的表达，从而影响上皮与间充质之间的相互介导作用，导致釉质发育障碍。     

快速扩弓前后龈沟液天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶水平的变化

目的：研究快速扩弓前后龈沟液天冬氨酸转氨酶（AST）与碱性磷酸酶（ALP）水平的变化,以及其与快速扩弓牙周组织改建的关系.方法：选择38例快速扩弓的患者（10.5～12.8岁）,随机分为对照组（18例）和加力组（20例）.利用全自动化生化分析仪检测快速扩弓前,快速扩弓24h、7d,及保持7d、14d、28d的龈沟液AST、ALP水平的变化,结果以酶总量/牙表示.采用SAS（r）Proprietary Software Version 9.00对数据进行配对t和两样本t检验.结果：加力组AST水平在快速扩弓24h后开始升高（P＜0.05）,对照组在快速扩弓7d后开始升高（P＜0.01）,2组AST水平至保持28d时一直维持在较高水平（P＜0.01）;扩弓24h至保持28d,加力组与对照组AST水平存在显著差异（P＜0.05）.加力组和对照组ALP水平在快速扩弓7d后开始升高,至保持28d时一直维持在较高水平（P＜0.01）;从扩弓7d至保持28d,加力组与对照组ALP水平存在显著差异（P＜0.01）.结论：龈沟液AST、ALP水平可以在一定程度上反映快速扩弓后牙周组织的改建.     

中药双黄补对人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和超微结构的影响

目的：探讨中药双黄补对人牙周膜细胞向成骨方向转化的作用。方法：采用组织块法体外培养人牙周膜细胞，取第5代培养细胞随机分为实验组和对照组，实验组加不同浓度的双黄补，对照组只加含10mL／LFBS的DMEM培养液。通过PNPP法测定牙周膜细胞裂解液中的碱性磷酸酶活性，透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果：不同浓度的中药双黄补对人牙周膜细胞的碱性磷酸酶活性均有提高作用，其中以100μg／mL效果最佳。透射电镜下可见牙周膜细胞内质网池普遍扩张，细胞内基质膜泡和髓鞘样结构明显增加，细胞间广泛分布胶原纤维。结论：中药双黄补有诱导人牙周膜细胞向成骨样细胞转化的作用，可使细胞合成胶原的功能增强。     

三维培养模型中胰岛素样生长因子-I对人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的 了解胰岛素样生长因子-I(IGF-I)在三维培养条件下对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响.方法 通过组织块法分离培养hPDLCs.采用旋转细胞培养系统(RCCS)建立三维培养环境.将细胞分为4组,分别为阴性对照组、阳性对照组(三维培养组、IGF-I组)、实验组(三维培养加IGF-I...