应用PEG 6000探讨滑膜组织外泌体的提取与鉴定

目的:应用PEG 6000提取滑膜组织中外泌体并进行鉴定。方法:收集于北京中医药大学第三附属医院骨科行膝关节镜或关节置换手术过程中废弃的滑膜组织,用8%PEG 6000溶液对滑膜组织分泌的外泌体进行富集、提取,应用透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)、Western Blot对外泌体的形态、粒径大小以及标志蛋白CD9、CD63和Flotillin-1进行检测。结果:应用PEG 6000溶液可成功提取出富集类圆形、盘状囊泡的提取物,NTA鉴定显示粒径为(98.6±10.8)nm,Western Blot显示外泌体标志蛋白CD9、CD63和Flotillin-1均呈阳性高表达。结论:通过对提取物的形态、粒径大小以及标志蛋白分析证实PEG 6000从滑膜组织提取到的物质为外泌体,为以后研究滑膜组织外泌体的功能和机制提供了方法学基础。     

分娩时局部和全身应用阿片类药物镇痛的系统评价

目的运用Cochrane系统评价的方法，评价分娩时局部和全身应用阿片类药物镇痛的有效性与安全性。方法计算机检索PubMed（1966-2008．1）、EMbase（1980-2008．1）、Cochrane图书馆（2008年第1期）、CBM（1978-2008．1）、CNKI（1979-2008．1），同时筛选纳入研究的参考文献，收集有关比较局部和全身应用阿片类药物镇痛的随机对照试验，由两名评价员独立评价文献质量，并采用RevMan4．2．10软件对纳入研究结果进行Meta分析：结果共纳入12个研究，5909例产妇。Meta分析结果显示，局部和全身应用阿片类药比较进行分晚镇痛．母亲对局部应用阿片类药分娩镇痛疼痛缓解更满意[RR=I．63，95％CI（1．27，2．09）]，两组5min新生儿Apgar评分〈7，差异无统计学意义：RR=0．63，95％CI（0.40，1．01）]：结论现有证据显示，与局部用药比较，全身心用阿片类药物镇痛的母亲对分娩疼痛缓解更满意。但两组均存在对母亲和新生儿的不良影响。因此，要证明哪种途径应用阿片类药进行分娩镇痛更加有效和安全，尚需开展更多高质量的随机对照研究。     

等速肌力训练对全髋关节置换术后患者表面肌电的影响

2007年3月42007年5月在我院骨科行单侧全髋关节置换术患者16例，男9例，女7例；年龄56～73岁，平均63．4岁；病程1d～7年；股骨颈骨折5例，骨关节炎3例，髋关节发育不良2例，髋关节强直1例。16例患者术式相同，假体类型均为骨水泥，术中出血量300～500ml，平均385ml。术后14d开始患者均采用BIODEX多关节功能测试与训练系统进行等速肌力训练。患者取坐位，臀下垫枕，保持术侧髋关节屈曲80。，固定装置于髋、大腿和胸部阻止任何额外运动，运动时旋转轴与股骨外髁相并列，杠杆力臂软垫位于踝骨近端，选用60、90、120、90、605种运动速度，每种运动速度间相隔30°／s，每种运动时尽力做伸及屈膝10次，共50次为1个训练单元，根据肌肉功能适应情况，逐渐增加运动次数到2～3个训练单元，每日1次。     

杭州市重症手足口病患儿的临床症状及脑脊液检查

目的研究杭州市重症手足口病(HFMD)流行特征,比较不同肠道病毒感染后的差异,寻求早期预判重症HFMD关键指标。方法对2014年杭州市儿童医院收治的498例重症HFMD患儿进行统计分析。采集重症患儿的脑脊液进行常规检测,并比较不同病原体感染后临床症状的差别。结果 498例重症HFMD患儿中,男女患儿比例为1.6∶1,1岁~3岁患儿占76.7%。重症组患儿平均年龄为(2.6±1.2)岁,重症HFMD患儿以EV71感染为主,占76.5%(381/498)。EV71感染的患儿肢体抖动和呕吐的发生率高于其他肠道病毒感染(P0.05)。EV71感染脑脊液有核细胞计数和蛋白质定量明显高于其他肠道病毒感染(P0.05)。结论年龄小、EV71感染、脑脊液有核细胞计数和蛋白质含量增高,出现肢体抖动和呕吐等临床症状,是预判重症发展为危重症HFMD的重要因素。     

4种中药制剂微生物限度检查方法的验证研究

目的 建立菌毒清颗粒、土牛膝清咽合剂、清肺合剂、固泉液4种中药制剂微生物限度检查方法.方法 采用《中国药典》2010年版一部附录微生物限度检查法项下方法进行验证.结果 薄膜过滤法的回收率高于平皿法.菌毒清颗粒、土牛膝清咽合剂、固泉液的细菌、霉菌及酵母菌检查可用平皿法,清肺合剂的细菌、霉菌及酵母菌检查可用薄膜过滤法.控制菌用常规法检出.结论 建立了4种中药制剂微生物限度检查方法,可有效控制其质量.     

脂联素介导 APPL1／AMPK 信号通路对小鼠肾脏缺血再灌注损伤后期纤维化的影响

目的：研究脂联素（APN）介导 APPL1／AMPK 信号通路对小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤后期纤维化的影响。方法雄性 C57BL／6小鼠48只,随机分为假手术组（Sham 组）、肾脏急性缺血再灌注组（IRI 组）、肾脏急性缺血再灌注＋APN 组（APN／IRI 组）和肾脏急性缺血再灌注＋生理盐水组（NS／IRI 组）,每组各12只。 APN／IRI 组在术前15 min、术后每24 h 分别经腹腔注射 APN 蛋白球状片段5μg／g,共3次;NS／IRI 组在相应时点经腹腔注射等量生理盐水。 IRI 组均行双侧夹闭肾蒂30 min 后开放肾灌注,Sham 组分离肾蒂但不夹闭。各组大鼠分别在术后2 d 随机各取6只小鼠,留取血液及肾组织标本。 PAS 染色观察肾组织病理变化;全自动生化分析仪检测血尿素氮（BUN）及血肌酐（Scr）含量;Western blot 检测肾脏组织 APPL1蛋白表达和 AMPK 磷酸化水平。术后14 d 每组取剩余6只小鼠肾脏标本,天狼星红苦味酸（Sirus red）染色观察肾组织病理变化,real time PCR 检测α平滑肌肌动蛋白（α－SMA）和转化生长因子β1（TGF －β1）的 mRNA 表达。结果术后2 d,与 Sham 组相比,IRI组、APN／IRI 组和 NS／IRI 组小鼠肾组织小管间质损害加重,血 BUN、Scr 升高（P ＜0．05）,APPL1蛋白表达和AMPK 磷酸化水平明显增高（P ＜0．05）;与 IRI 组相比,APN／IRI 组小鼠肾小管损害明显减轻,血 BUN、Scr 明显降低（P ＜0．05）,APPL1蛋白表达和 AMPK 磷酸化水平明显增高（P ＜0．05）。术后14 d,与 Sham 组相比,IRI 组、APN／IRI 组和 NS／IRI 组小鼠肾组织纤维化程度明显增高,α－SMA 和 TGF －β1的 mRNA 的表达明显增多（P ＜0．05）;与 IRI 组相比,APN／IRI 组小鼠肾组织纤维化程度明显降低,α－SMA 和 TGF －β1的 mRNA 的表达量明显减少（P ＜0．05）。结论APN 介导 APPL1／AMPK 信号通路减轻小鼠肾脏急性缺血再灌注损伤后期纤维化。     

类风湿关节炎合并2型糖尿病的危险因素研究

目的探讨类风湿关节炎(RA)合并2型糖尿病(T2DM)的发病情况和危险因素。方法回顾性分析2016年1月至2019年12月宿迁市第一人民医院确诊为RA的232例患者的病历资料,根据是否合并T2DM分为2组:观察组(合并T2DM)48例,对照组(未合并T2DM)184例,记录2组的一般资料及T2DM的相关因素。比较本研究组与本地区成年人的糖尿病患病率,比较2组一般资料,应用二分类非条件Logistic回归分析RA患者发生T2DM的危险因素。结果本研究中RA患者T2DM的患病率为20.7%(48/232),显著高于本地区成年人的糖尿病患病率[6.6%(3304/50321)](χ2=74.41,P<0.01);不同年龄段、不同性别RA患者T2DM的患病率均高于一般人群(P<0.05)。与对照组比较,观察组在年龄[(61.0±7.97)岁vs(53.97±12.34)岁,Z=-3.78,P<0.01]、RA病程[(12.21±11.26)]年vs(8.68±9.90)年,Z=-2.03,P<0.05]和BMI[(24.22±3.92)vs(22.96±3.65)kg·m-2,Z=-1.97,P<0.05]等方面差异有统计学意义。从实验室检查结果看,观察组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著高于对照组[(3.29±0.76)mmol·L-1 vs(2.81±0.78)mmol·L-1,Z=-3.94,P<0.01];观察组疾病活动评分红细胞沉降率(DAS28-ESR)[(5.95±1.50)vs(5.49±1.89),Z=-3.10,P<0.01]、C反应蛋白(DAS28-CRP)[(5.13±1.28)vs(4.66±1.60),Z=-2.82,P<0.01)]、简化的疾病活动指数(SDAI)[(36.64±15.75)vs(29.65±15.62),Z=-10.64,P<0.01)]及临床疾病活动性指数(CDAI)[(31.13±13.52)vs(25.19±13.28),Z=-4.77,P<0.01)]均显著高于对照组(均P<0.01)。在治疗上,观察组糖皮质激素使用率显著高于对照组(68.8%vs 44.6%,χ2=9.73,P<0.01)、硫酸羟氯喹(HCQ)的使用率显著低于对照组(41.7%vs 60.3%,χ2=5.39,P<0.05)。二分类非条件Logistic回归分析显示,DAS28-CRP[OR=2.234(95%CI 1.122~4.448)]和糖皮质激素使用[OR=2.265(95%CI 1.110~4.624)]是RA患者发生T2DM的独立危险因素。结论类风湿关节炎患者2型糖尿病的发生率较高,受到多种因素的影响。DAS28-CRP评分高和糖皮质激素的使用可能是其独立危险因素。RA合并T2DM是免疫调节紊乱基础上多种因子的共同结果。     

兜唇石斛的酚类化学成分研究

目的研究石斛属植物兜唇石斛Dendrobium aphyllum茎的化学成分。方法采用硅胶、凝胶、MCI、中压制备色谱(MPLC)和高效液相半制备色谱(semi-HPLC)等方法进行分离纯化,根据理化性质、核磁共振谱及质谱等方法鉴定化合物结构。结果从兜唇石斛的90%乙醇提取物中分离得到10个化合物,分别鉴定为4,7-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲(1)、2,4-二羟基-7-甲氧基-9,10-二氢菲(2)、2,5,7,9-四羟基-4-甲氧基-9,10-二氢菲(3)、4,7,9-三羟基-5-甲氧基-9,10-二氢菲(4)、松脂醇(5)、丁香酚-β-D-葡萄糖苷(6)、反式阿魏酸(7)、正十二烷醇(8)、β-谷甾醇(9)、β-胡萝卜苷(10)。结论化合物1~2、5~8为首次从该属植物中分离得到,化合物1~10均为首次在该植物中分离得到。     

粉尘螨变应原点刺液在皮肤点刺试验中的应用价值

摘要：目的 评估北京协和医院（ＰＵＭＣＨ）粉尘螨变应原点刺液在使用皮肤点刺试验（ＳＰＴ）方法诊断粉尘螨过敏症中的准确 性和安全性。 方法 连续纳入 ２０１５ 年 ８ 月 １０ 日至 ２０１７ 年 ８ 月 ３０ 日在 ＰＵＭＣＨ 变态（过敏）反应科门诊确诊变应性疾病的 ９１０ 例受试者。 使用 ＰＵＭＣＨ 粉尘螨变应原点刺液对所有受试者进行 ＳＰＴ，用荧光酶联免疫方法检测血清粉尘螨特异性免疫 球蛋白 Ｅ（ｓＩｇＥ）。 通过受试者工作特征曲线（ＲＯＣ 曲线）分析诊断准确性，诊断金标准为 ｓＩｇＥ 阳性。 同时对不同诊断切点的 准确性进行分析。 该点刺液的安全性通过记录患者不良反应实现。 结果 本研究无脱落病例。 全分析集（ＦＡＳ）、符合方案集 （ＰＰＳ）、安全集（ＳＳ）分别为 ８７１ 例、６７０ 例和 ９１０ 例。 ＲＯＣ 曲线下面积分别为 ０．９０２（ＦＡＳ）和 ０．９１５（ＰＰＳ）。 在 ＰＰＳ 中，使用点 刺液诊断粉尘螨过敏的最佳诊断切点为平均风团直径 ３．２５ ｍｍ，敏感性为 ８５．７７％（９５％置信区间：８２．７１％ ～ ８８．８４％），特异性 为 ８６．５５％（９５％置信区间：８１．４４％ ～ ９１．６６％）。 ９５％特异性的诊断切点为平均风团直径 ４．２５ ｍｍ。 ＳＳ 中未有不良反应事件发 生。 结论 ＰＵＭＣＨ 粉尘螨变应原点刺液在 ＳＰＴ 中具有较高的敏感性和特异性，且安全性高，对粉尘螨过敏症的诊断具有较 高的应用价值。     

生殖道衣原体感染与宫颈上皮内瘤样病变

目的:探讨沙眼衣原体及解脲支原体感染与宫颈上皮内瘤样病变(CIN)发病机制的关系。方法:采用聚合酶链反应法对161例CIN患者和78例正常对照者的宫颈分泌物进行沙眼衣原体及解脲支原体DNA检测。结果:161例CIN宫颈分泌物检测沙眼衣原体感染率明显升高,与对照组相比差异显著(P<0.05);沙眼衣原体及解脲支原体混合感染率升高,与对照组相比差异显著(P<0.05);而解脲支原体感染2组差异无显著性(P>0.05);CIN各级感染率无明显差异。结论:沙眼衣原体感染与CIN的发生可能密切相关。