适应现代医学改革，优化病理教学创新

随着时代的进步、知识的更新，医学病理学的教学理念需要适应当代学生需求的新变化，不断改革教学方案，优化教学结构。本文从以下几个方面谈谈病理教学改革与创新的几点意见。     

去氢表雄酮通过Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡和细胞周期阻滞

目的 研究去氢表雄酮（DHEA）及其代谢物去氢表雄酮硫酸酯（DHEAs）对HepG2和HT-29细胞抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期阻滞的作用。方法 应用MTT比色法检测不同浓度（1、10、50、100、200μmol／L）的DHEA或DHEAs与HepG2和HT-29细胞孵育8、24、48、72 h对两种细胞系的生长抑制作用;应用流式细胞术检测不同浓度的DHEA或DHEAs对细胞凋亡及细胞周期的变化;采用Western blot检测细胞内磷酸化Akt（Ser473,Thr308）蛋白的水平。结果 （1）不同浓度DHEA作用细胞24h时,HepG2的存活率24h时分别为92．7％±0．9%、84．7％±1．2％、62．4％±0．8％、49．5％±0．8％和50．7％±0．3％,HT-29细胞的存活率分别为92．5％±0.4％、89．5％±0．7％、80．5％±1．1％、67.5％±1.5％和70．6％±0．6％,与对照组相比,DHEA明显抑制HepG2和HT-29两种细胞的生长。在浓度为100μmol／L作用24 h时作用明显,而DHEAs对HepG2及HT-29细胞的增殖无明显影响。（2）100μmol／L的DHEA显著抑制两种细胞周期进程, HepG2细胞G0／G1期细胞比例显著升高,可以达到68．4％±2．0％,而对照组为48．6％±1．2％。HT-29细胞在100μmol／L时的G0／G1期的比率为90．3％±2．7％,而对照组仅为59．0％±1．2％,S及G2／M期细胞明显减少。（3）100μmol／L DHEA作用24 h时能显著诱导HepG2细胞凋亡（凋亡率为18．6％±2．2％）,而DHEAs却无此作用。（4）HepG2细胞在100μmol／L和200μmol／L DHEA作用24 h后,磷酸化Akt（Thr^308）、磷酸化Akt（Set^473）蛋白表达显著降低,这种作用在应用PI3K抑制剂和PI3K激活剂后分别被增强和消除。结论 DHEA对HepG2和HT-29两种肿瘤细胞系均具有较强的抗增殖作用。而对于不同的肿瘤细胞系,DHEA可能通过调节Akt的信号通路来诱导细胞凋亡,还可能通过阻滞细胞周期,使其阻滞在G0／G1期。DHEAs对细胞的生长没有明显的作用。     

羧基荧光素琥珀酰亚胺酯标记肿瘤细胞及其在细胞毒检测中的价值

目的探讨化学染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE）标记肿瘤细胞的最佳条件及其在细胞毒检测中的价值。方法用不同浓度的CFDA-SE标记K562（人红白血病细胞）、YAC-1（小鼠淋巴瘤细胞）、A375（人乳腺癌细胞）、MCF-7（人黑色素瘤细胞）不同肿瘤细胞系，并检测其0—24h的荧光强度，观察荧光强度变化的时间动力学，选择CFDA-SE标记细胞的最佳浓度；CFDA-SE标记细胞后孵育时间为1—6h，再用DNA染料碘化丙啶（PI）标记，流式细胞仪分析CFDA-SE和PI双标记细胞，并计算细胞死亡率，研究CFDA-SE对细胞的毒性。CFDA-SE标记时间分别为5、6、7、8、10、15min，测定标记不同时间的荧光强度和细胞的死亡率，选择最佳标记时间；用CFSE在最佳条件下标记靶细胞进行细胞毒检测实验。结果对于不同肿瘤细胞系，CFDA-SE标记的最佳浓度不同；CFDA-SE对细胞没有毒性，死亡率低于5％；最佳标记时间为8min。人外周血单个核细胞和BALB／c鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞K562、YAC-1均表现出杀伤活性，杀伤百分率随效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为50：1—25：1，共孵育时间为2—4h。结论CFDA-SE具有标记细胞稳定，能用于细胞培养时间较长的研究，不影响细胞功能，适用于流式细胞仪检测细胞毒实验的优点，是一种很好的标记细胞的荧光素染料。     

新疆紫草素抗肝癌的研究

新疆紫草素是一种从新疆紫草根中提取出来的萘醌类化合物，对多种肿瘤起抑制作用。蒋英丽的研究表明，新疆紫草素能有效诱导人大肠癌细胞发生程序性细胞死亡。路桂荣等的研究也证明紫草素对人胃癌细胞（BGC823）和人食道癌细胞（Ega109）具有明显的抑制作用。但紫草素对肝癌细胞的抑制作用的研究还鲜见报道。本研究采用H22小鼠肝癌，通过测定抑瘤率、NK细胞杀伤率、淋巴细胞转化指数等指标，探讨新疆紫草素对肝癌细胞增殖抑制及对机体的免疫调控作用。     

Unlicensed NK细胞的免疫效应

NK细胞(Natural killer cells,NK cells)在控制某些病毒感染与抗肿瘤中发挥着重要作用[1].无需抗原预先刺激与活化,NK细胞即可发挥细胞毒效应,并可分泌多种细胞因子与趋化因子.此种天然免疫细胞表达多样化活化性受体和抑制性受体.在NK细胞的激活与功能调控过程中,活化性和抑制性受体均发挥十分重要的作用[2].大多数活化性受体缺乏细胞内信号区域,而是以非共价方式结合含有免疫受体酪氨酸相关活化基序(ITAM)的衔接蛋白(Adaptor),如DAP12、CD3ζ或FcεRIγ;或者与包含Tyr-Ile-Asn-Met基序的衔接蛋白DAP10结合.衔接蛋白通过一系列下游信号激发细胞骨架重排,诱导细胞增殖与分泌可溶颗粒和细胞因子.     

手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及临床意义

目的:探讨手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测80例卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及CD4+CD25+调节性T细胞水平。结果:与对照组相比,卵巢癌患者外周血中CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05);随着疾病进展Ⅲ期+Ⅳ期与Ⅰ期+Ⅱ期比较CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05)。卵巢癌患者外周血CD4+CD25+细胞比例高于正常对照组(P0.05);手术后卵巢癌患者T细胞亚群比例与术前比较并未明显恢复(P0.05),但CD4+CD25+调节性T细胞水平有所恢复(P0.05)。结论:卵巢癌患者免疫功能低下,术后短期并不能恢复,CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,术后明显恢复,提示其在免疫耐受中起重要作用。     

DHEA抑制大鼠转移性Morris肝癌的实验研究

目的：探讨去氢表雄酮（DHEA）的体内抗癌作用及其机制。 方法：Buffalo大鼠21只随机分为空白对照组(n=5);肿瘤对照组（把Morris肝细胞瘤移植到大鼠的两肋皮下,建立Morris 肝细胞瘤移植的Buffalo大鼠的体内模型）,喂养基础饲料(n=6)、DHEA肿瘤组（建立Morris肝细胞瘤移植模型后,在喂养的基础饲料中添加DHEA）(n=6)和去氢表雄酮硫酸酯（DHEA-s）肿瘤组（建立Morris肝细胞瘤移植模型后,在喂养的基础饲料中添加DHEA-s）(n=4)。分别喂养4周后,应用流式细胞术检测大鼠的免疫功能,应用磁场型高分解能质量分析仪（GC/MS）方法测定大鼠体内类固醇的含量,采用免疫组化方法染色检测磷酸化的磷酸酶和张力蛋白同源物基因（PTEN）蛋白表达,同时测定其对大鼠的毒副作用。 结果：DHEA肿瘤组的瘤重量［(8.31±0.61)g］较肿瘤对照组［(14.57±0.56)g］显著减小,抑制率达到43%。免疫组织化学染色显示DHEA肿瘤组的磷酸化PTEN蛋白表达量增加,同时提高了CD3、CD4阳性细胞百分率及CD4+/CD8+比值,与肿瘤对照组相比差异有显著性（P<0.05）。DHEA肿瘤组的胆固醇、甘油三脂及高密度脂蛋白的含量与空白对照组相比差异无显著性,未见其有毒副作用。 结论：DHEA对肿瘤具有明显的抑制作用,此作用是通过提高PTEN的蛋白表达和免疫功能来完成的。     

抗大肠癌siRNA载体上报告基因的构建与鉴定

目的：在siRNA载体上构建带绿色荧光蛋白（GFP）的报告基因,此重组质粒用于抗大肠癌的进一步研究。方法：用分子克隆技术构建绿色荧光蛋白基因与真核细胞表达载体pSilencer3.1-H1的重组体（pSilencer3.1-H1/GFP）,并用脂质体介导的转染技术,将其导入人大肠癌细胞。结果：GFP基因的PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳,可见目的片段大小与预期一致。重组pGEM-GFP克隆插入序列经测序鉴定结果与GenBank报道一致。重组质粒pSilenc er3.1-H1/GFP用NruⅠ和PstⅠ双酶切后可见2条电泳带, 3 500 bp为pSilencer3.1-H1 质粒片 段,700 bp左右为GFP片段,以PCR分析此插入序列也获得约700 bp的泳带,与预期一致。此重组质粒转染大肠癌细胞后,在倒置荧光显微镜下可见视野内发绿色荧光的细胞。结论：成功构建了含报告基因的重组质粒pSilencer3.1-H1/GFP,此重组质粒可进一步用于抗大肠癌的研究,方便转染效率的直观观察,有利于流式细胞仪的检测。     

奥曲肽治疗肠梗阻的疗效分析

目的：探讨奥曲肽治疗肠梗阻的临床疗效。方法：回顾性分析2007年2月-2010年12月期间笔者所在医院收治的80例肠梗阻患者，将所有患者随机分为治疗组与对照组，每组各40例。治疗组在常规治疗基础上给予奥曲肽治疗，对照组给予常规治疗，密切观察两组患者的临床疗效。结果：奥曲肽治疗组总有效率高于对照组，且奥曲肽治疗组肛门排气时间明显短于对照组。结论：奥曲肽治疗肠梗阻具有较好的疗效。     

奥曲肽治疗肠梗阻的疗效分析

目的:探讨奥曲肽治疗肠梗阻的临床疗效。方法:回顾性分析2007年2月-2010年12月期间笔者所在医院收治的80例肠梗阻患者,将所有患者随机分为治疗组与对照组,每组各40例。治疗组在常规治疗基础上给予奥曲肽治疗,对照组给予常规治疗,密切观察两组患者的临床疗效。结果:奥曲肽治疗组总有效率高于对照组,且奥曲肽治疗组肛门排气时间明显短于对照组。结论:奥曲肽治疗肠梗阻具有较好的疗效。