P-糖蛋白的免疫斑点定量分析

目的：建立改良的斑点酶联免疫吸附分析，用于膜表达抗原P—gP的血清学鉴定。方法：常规筛选mdr-1稳定表达的K562细胞系；免疫组化和阿霉索抗性鉴定。细胞固相化于圆形硝纤膜纸片，BSA和H2O2封闭。纸片置入ELISA测量井；按照ABC—ELISA程序测定mdr-1基因疫苗免疫小鼠血清抗P—gP的滴度。结果：免疫组化显示稳定表达mdr-1的K562细胞系膜P—gP阳性率近100％，阿霉素IC50较之对照细胞提高100％。斑点酶联免疫吸附分析中，全部对照血清OD450〈0．1（1：2000）；而mdr-1基因疫苗免疫的血清（1：2000）OD450均〉0．496；平行样的变异系数微小。结论：改良的免疫斑点方法可作为测量细胞表达抗原之快速、敏感的测量方法，用于特异性抗体的大样本筛选。     

反义血管内皮生长因子对乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的　构建表达反义血管内皮生长因子165(VEGF165)的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法　应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果　成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞增殖能力降低。结论　VEGF165反义RNA能够明显减少人乳腺癌细胞株MCF- 7内VEGF165的表达,抑制乳腺癌细胞的增殖,证明了反义基因干预治疗的有效性,为乳腺癌的基因治疗进行了有益探索。     

紫草萘醌色素微乳液抑制肝癌细胞增殖的实验研究

目的观察紫草萘醌醇提物对肝癌细胞体内外增殖的影响。方法紫草萘醌醇提取物制备成微乳液(LE);加入人肝癌细胞系、人胚肾细胞系和小鼠成纤维细胞系的体外培养,MTT法检测细胞增殖;小鼠皮下接种肝癌细胞制作荷瘤模型,分别应用LE或5-FU,观察其生活状态、生存时间以及瘤重等指标。结果体外共育48~72h,LE抑制人肝癌细胞系的增殖;这种作用具有浓度依赖特点,而且相同浓度下不影响正常传代细胞的生长。体内应用可明显抑制移植小鼠肝癌的生长,延长荷瘤小鼠生存期;有效剂量2.5~10mg·kg-1·d-1。应用LE还可提高受者小鼠的生活质量。结论无论在体外或体内,LE对肿瘤细胞的增殖都表现量-效依赖的抑制作用。     

人肝细胞癌抗原HCA661 DNA疫苗的构建

目的：构建人肝细胞癌特异性抗原HCA661的DNA疫苗。方法：通过PCR从SMMC7721中获得编码肝细胞癌特异抗原HCA661的基因组DNA序列,插入pGEM-T easy载体后测序,并将目的基因定向亚克隆进入真核表达载体pCI-neo,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pCI-neo-HCA661。结果：PCR产物为 1 040 bp,测序结果与Gene Bank登记完全相同;PCR和酶切结果表明,构建的重组真核表达质粒中含有正确编码的目的基因片段。结论：成功地构建了含有HCA661基因的DNA疫苗。     

流式细胞术检测CIK的免疫表型和体外杀伤活性

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer,CIK）的免疫表型和体外杀伤活性。 方法:从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFNγ、CD3McAb、IL-2诱导并培养,获得大量的CIK。采用流式细胞术检测CIK的表型;以CFSE标记靶细胞来区分效应细胞,再以ＰＩ染色,用FACS检测靶细胞的死亡率。 结果:CIK于第22天达到增殖高峰,并高度表达CD3、CD11a、CD54和HLA-DR;中度表达CD3/CD56、CD25、CD28、CD69和FasL;CD16表达不增加。CIK对肿瘤细胞K562、 HL-60、Hela、SMMC7721和A375均表现出杀伤活性,其中对K562、HL-60、Hela 3种细胞的杀伤作用较强;而对SMMC7721、A375的作用不明显。 结论:细胞因子IFNγ、CD3McAb和IL-2体外诱导的单个核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性。     

人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

目的：构建人肌红蛋白（Mb）原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白pQE。方法：根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱 导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果：序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378) 中已报道的Mb核苷酸序列有98.50 %同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE 电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16 700,并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni²⁺-NTA agarose 纯化获得SDS-PAGE 电泳下单一条带。结论：在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。     

超声心动图参数及HSP70基因多态性与老年慢性心力衰竭预后的相关性分析

目的:分析超声心动图参数、热休克蛋白70(HSP70)基因多态性与老年慢性心力衰竭患者预后的相关性。方法:选取2019年10月至2021年10月于我院治疗的老年慢性心力衰竭患者142例作为研究对象，对其进行1年随访观察，用是否发生心血管事件评估其预后情况，将其分为预后不良组(32例)、预后良好组(110例)。收集患者出院前超声心动图检测参数，采用聚合酶链反应(PCR)结合限制性内切酶分析检测HSP70-1基因+190G/C、HSP70-2基因+1267A/C、HSP70-hom基因+2437T/C多态性，结合患者临床人口学与病理资料，分析两组患者超声心动图参数及HSP70基因多态性差异。采用二元Logistic回归分析老年慢性心力衰竭预后与超声心动图参数及HSP70基因多态性的相关性，建立ROC曲线评估超声心动图参数及HSP70基因多态性预测预后不良的价值。结果:与预后良好组患者相比，预后不良组患者超声心动图参数左心室舒张末期直径(LVEDD)、左心室收缩末期直径(LVESD)均更高(P<0.05),左心室射血分数(LVEF)更低(P<0.05)。与预后良好组患者相比，预后...     

荧光定量RT-PCR检测Rac1 mRNA基因及其与胃癌转移的关系

Objective To investigate the relationship between tumor metastasis-related Rac1 mRNA expression levels and gastric carcinomas metastasis, and to investigate the significance of Rac1 as a tumor marker for the evaluation of gastric carcinomas metastasis and distinguish between benign and malignant lesions. Methods This experiment used fluorescence quantitative RT-PCR TaqMan probe technology, chose Rac1 target gene fragment, which was cloned into the pET-20b (+) vector, constructed recombinant plasmid, and established the Rac1 mRNA fluorescence quantitative RT-PCR standard curve. And then the Rac1 mRNA levels were detected in 52 cases of gastric carcinoma tissues,52 cases of para-carcinoma tissues and 12 cases of benign gastric disease tissues. Its association with the metastasis of gastric carcinomas was analyzed. Results The positive rates and levels (median, P25-P75) of Rac1 mRNA were 100. 0% ,7.41 ×105 (3. 50 × 105-4. 36 × 106) copies/μl in gastric carcinomas, 46. 2% ,0(0-1.73 × 104) copies/μl in parscarcinoma tissues, 33. 3%, 0(0-3.55 × 103) copies/μl in benign tissues. The positive rates and leves(x2 =43.16,x2Xk-w = 64. 19, P ＜0. 01)among the three groups were significantly different. When the critical value of Rac1 mRNA level was 1.73 × 104 copies/μl determined by ROC, the sensitivity and specificity were 88. 5% and 100% respectively. When the critical value of Rac1 level was 7.49 × 105 copies/μl, the sensitivity and specificity were 57.9% and 78. 6% respectively. ConclusionThe Rac1 mRNA level detected with fluorescence quantitative RT-PCR has reference value to distinguish between benign and malignant lesions and evaluate gastric carcinoma metastasis.     

胎儿泌尿系统畸形尸检1例讨论

对我院收治的胎儿泌尿系统畸形1例分析如下。