人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

目的：构建人肌红蛋白（Mb）原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白pQE。方法：根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱 导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果：序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378) 中已报道的Mb核苷酸序列有98.50 %同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE 电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16 700,并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni²⁺-NTA agarose 纯化获得SDS-PAGE 电泳下单一条带。结论：在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。     

急性淋巴细胞性白血病DNA含量与细胞增殖活性的临床意义

目的　探讨DNA检测对急性淋巴细胞性白血病 (ALL)诊断和治疗的临床意义。方法　应用流式细胞术检测了 35例急性淋巴细胞性白血病患者骨髓细胞DNA含量 (DI)、倍体和细胞增殖活性 (PI)。结果　ALL异倍体检出率为 5 1 4 % ( 18 35 ) ,其中亚二倍体 8例 ,超二倍体 10例 ;ALL组骨髓细胞G0 G1%高于对照组 (P <0 0 5 ) ,而S %、PI值明显低于对照组 (P <0 0 5 )。结论　DNA含量检测和倍体分析对急性淋巴细胞性白血病的诊断、治疗是很有价值的临床生物学指标 ,有助于白血病的准确、客观诊断和判断预后     

螺旋断层放疗治疗成人脑干胶质瘤近期疗效观察

目的 观察螺旋断层放疗治疗成人脑干胶质瘤的近期疗效.方法 对3例成人脑干胶质瘤采用螺旋断层放疗,肿瘤靶区（GTV）处方剂量50～ 54 Gy/25次,5次/周,治疗期间预防性给予脱水、降颅压等治疗.结果 3例顺利完成放疗,症状均有不同程度减轻,治疗期间未出现严重骨髓抑制及急性脑干放射损伤症状.结论 螺旋断层放疗治疗成人脑干胶质瘤可明显改善症状,无严重并发症,近期效果满意.     

Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定

目的：获得人Flt3配体(FL) cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法：提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层 析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果：经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol•L^-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25 000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25 000处可见特异性着色带。结论：构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。     

1280例肺癌纤维支气管镜下改变及诊断分析

１９９０～１９９７年８年间经纤维支气管镜（纤支镜）检查８４８０例,其中确诊肺癌１４２６例,取其中经病理学明确诊断、形态描述清晰的１２８０例做为研究对象,现报告如下：１　临床资料１．１　一般资料本组男１０２４例,女２５６例,男：女为４：１,年龄１６～８３岁,平均５４．５岁,以４８～６９岁最多,共７２９例,占５７％。１．２　临床表现咳嗽、咳痰９０９例（７１％）,痰中带血或咳血５２５例（４１％）,胸痛６５例（５．１％）,声嘶１５例（１．１７％）,发热呼吸困难５９例（４．６％）。１．３　Ｘ表现胸片呈肿块…     

血卟啉单甲醚介导的光动力作用后人类乳腺癌Beap-37细胞白细胞介素-2和白细胞介素-6的检测分析

目的观察乳腺肿瘤细胞经血卟啉单甲醚介导的光动力学疗法（HMME—PDT）作用后白细胞介素（IL）-2和IL-6的变化。方法常规传代培养乳腺癌Bcap-37细胞,取对数生长期的细胞,按空白对照组、实验组（激光照射组、光敏剂组、综合组）进行HMME-PDT作用,采用放射免疫法检测不同时间点细胞IL-2、IL-6的含量变化。结果在HMME-PDT作用后,IL-2含量随时间延长增加,综合组在12、24和48h与对照组、激光照射组、光敏剂组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。IL-6的含量随时间延长降低,在12、24h变化最明显,综合组与对照组、激光照射组和光敏剂组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HMME-PDT可能通过改变IL-2、IL-6的活性对乳腺肿瘤细胞产生杀伤作用,为临床患者调节免疫功能和辅助诊断提供客观指标。     

术后高剂量少分次放疗对胰腺癌患者的影响

目的:探讨高剂量少分次放疗模式在胰腺癌术后患者中的应用效果及对患者生存期的影响。方法:选择2015年2月—2018年2月我院收治的胰腺癌患者78例,随机分为对照组(n=39例)和观察组(n=39例)。两组均行手术治疗,对照组术后采用常规化疗方案治疗,观察组在对照组基础上同步高剂量少分次放疗模式治疗,3个疗程后对患者效果进行评估,两组治疗后均完成24个月随访,比较两组近期疗效、生活质量、不良反应发生率及生存率。结果:观察组的有效率为66.67%,高于对照组41.03%,差异有统计学意义(χ2=6.734、P=0.026);观察组治疗后体重减轻(42.41±3.59)、疲倦(31.54±3.26)分、疼痛(19.77±3.61)分、腹胀(35.34±4.11)分、腹泻(13.49±3.13)分及食欲下降评分(28.48±3.59)分均低于对照组[体重减轻(55.79±4.22)、疲倦(45.69±4.12)分、疼痛(32.14±4.03)分、腹胀(43.15±4.25)分、腹泻(18.53±3.69)分及食欲下降评分(38.51±4.31)分],差异有统计学意义(t=6.392、5.416、7.498、6.121、5.983、7.335,P=0.032、0.036、0.022、0.030、0.044、0.023);观察组与对照组治疗过程中白细胞降低、放射性肠炎、放射性皮炎、血小板降低及肝肾功能异常发生率无统计学意义(33.33%vs 38.46%,χ2=1.215,P=0.592);观察组1年生存率69.23%、2年生存率41.03%、PFS(12.59±2.31)月、OS(7.83±1.15)月均长于对照组[1年生存率53.85%、2年生存率30.77%、PFS(6.43±1.04)月、OS(4.36±0.85)月],差异有统计学意义(χ2=6.317、4.926,t=5.637、7.112,P=0.034、0.041、0.029、0.011)。结论:高剂量少分次放疗模式能提高胰腺癌患者术后生活质量,提高患者远期生存率,未增加不良反应发生率,值得推广应用。     

MAGE-1基因疫苗的构建及其免疫学活性的研究

目的：制备MAGE-1基因疫苗，观察该疫苗诱导小鼠脾脏的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞C几活性及产生特异性抗体的影响。方法：应用基因重组技术，构建基因疫苗pcMAGE-1；转染HEK293细胞；RT-PCR及Western blot检测MAGE-1 mRNA及蛋白的表达；pcMAGE-1免疫3次BALB／c小鼠，末次免疫后7日收集血清及脾细胞。流式细胞术检测血清中抗MAGE-1多抗的产生，MTT法检测小鼠CIL杀伤活性。结果：构建的pcMAGE-1转染瑚：K293细胞，RT-PCR表明在MRNA水平有MAGE-1的表达；western blot显示表达产物46kD，与预期一致。基因疫苗免疫组小鼠血清MAGE-1抗体的产生增加，与SMMG7721结合率显著高于对照组（P〈0．05）。杀伤实验结果显示，免疫组小鼠脾细胞对SMMC-7721的杀伤率明显高于两个对照组（P〈0．05）。结论：成功地构建了MAGE-1基因疫苗，该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答。