SOCS1基因与肝细胞癌的关系研究进展

SOCS1基因位于16p12-p13.1,它编码蛋白SOCS1并属于SOCS蛋白家族,通过抑制JAK—STAT信号转导通路发挥作用,其失活机制主要是甲基化和杂合性缺失。SOCS1在肝细胞癌中广泛甲基化和表达明显降低,提示SOCS1可能是抑癌基因,在肝细胞癌的发生发展中起十分重要的作用。     

乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的表达

目的探讨CD4^＋T细胞Notch1蛋白在乙型肝炎病人发病机制中的作用。方法采用流式细胞仪检测23例慢性乙型肝炎患者、8例急性乙型肝炎患者和10例健康对照者的外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白表达水平,并应用荧光定量PCR方法测定上述研究对象血中HBV-DNA滴度。结果慢性乙型肝炎组外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的平均百分率为（3.17±0.65）%,与急性乙型肝炎组（1.85±0.46）%和健康对照组（2.18±0.57）%比较都有极其显著差异（P〈0.001）;急性乙型肝炎组外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的百分率与健康对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋T细胞Notch1蛋白的百分率与HBV-DNA滴度呈正相关。结论Notch1蛋白在慢性乙型肝炎患者外周血中表达增高,说明其可能参与乙型肝炎病情的发展及病毒的清除。     

乙肝病毒感染肝细胞后细胞免疫损害的分子机制

乙肝病毒感染肝细胞后细胞免疫损害的分子机制余永胜侯英勇陈有华随着相关学科特别是免疫学发展，免疫效应细胞尤其是细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）在识别靶抗原的同时，不仅受ＭＨＣ分子限制，而且需要其它共刺激信号，粘附分子特别是细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ１）参与了此...     

瘦素及瘦素受体与肝纤维化的关系

目的探讨血清瘦素(Lp)及其受体(LpR)与肝纤维化的关系。方法125例肝炎患者根据2000年西安会议修订的病毒性肝炎防治方案中肝炎诊断标准分为急性肝炎组、慢性肝炎轻度组、慢性肝炎中度组、慢性肝炎重度组和肝硬化组,采用酶联免疫吸附试验测定血清Lp、LpR、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)水平,采用放射免疫吸附法测定血清层粘连蛋白(LN)和透明质酸(HA)水平。15名健康者作为正常对照组。结果各组间血清Lp和LN水平的差异无统计学意义(F=1.120、1.502,P=0.353、0.194),血清LpR、HA、PC-Ⅲ和CⅣ水平差异有统计学意义(F=2.791、12.982、2.616、16.684,P=0.020、0.000、0.028、0.000)。正常对照、急性肝炎、慢性肝炎轻度、慢性肝炎中度、慢性肝炎重度和肝硬化组的血清LpR水平分别为(58.21±26.88)、(80.14±26.35)、(58.72±20.95)、(63.29±21.92)、(87.35±21.70)和(80.03±29.50)μg/L,急性肝炎和慢性肝炎重度组明显高于正常对照组(P值均<0.05),慢性肝炎轻度组明显低于慢性肝炎重度和肝硬化组(P值均<0.05),慢性肝炎中度组明显低于慢性肝炎重度组(P<0.05)。血清LpR水平与HA水平呈正相关(r=0.217,P=0.012),但与PC-Ⅲ及CⅣ水平不相关(P值均>0.05)。结论不同程度肝炎间血清Lp水平无明显差异。血清LpR水平随着肝功能受损程度的增加而升高;急性肝炎由于肝功能明显异常,故LpR水平亦明显升高。可联合检测血清LpR、HA、PC-Ⅲ及CⅣ水平用于肝纤维化的诊断,其中LpR与HA具有较好的相关性。     

黄芪多糖对小鼠树突状细胞分化及成熟的影响

目的探讨黄芪多糖(APS)是否具有诱导小鼠髓源性树突状细胞(DC)分化和成熟的作用,以阐释APS药理作用的机制。方法APS分别取25(APS25组)、50(APS50组)、75(APS75组)、100 mg／L(APS100组)4种浓度,分别体外诱导小鼠髓源性DC前体和未成熟DC,采用倒置显微镜观察细胞生长状态,电子显微镜检测细胞形态,流式细胞仪检测CD11C、主要组织相容性复合物(MHC)-Ⅱ类分子及协同刺激分子CD80、CD86表达水平。结果APS、APS 白介素(IL)-4及空白对照组诱导的DC前体细胞,培养结束时大部分细胞已经死亡。粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-csF) IL-4诱导小鼠髓源性DC,在APS刺激36 h后,流式细胞检测结果显示APS100、APS75、APS50组的CD80、CD86、CD11c、MHC-Ⅱ类分子表达水平均明显高于空白对照组(P值均< 0．05),与内毒素(LPS)组类似;空白对照组与APS25组的差异无显著性(P>0．05)。结论APS不能诱导小鼠髓源性DC前体分化为DC,但可能有促进DC成熟的作用。     

HBV感染患者外周血T淋巴细胞CD25的表达及意义

目的 观察乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞CD25表达,探讨CD25在慢性乙型肝炎发病中的意义.方法 采用流式细胞检测技术,检测慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞CD25表达,观察CD25在慢性乙型肝炎患者的表达状况,同时观察了慢性重症肝炎、急性乙型肝炎患者、病毒携带者CD25表达情况.结果 乙型肝炎患者T细胞存在不同程度CD25表达,CD3 T及CD4 T表达为明显,CD8 T CD25表达较低;慢性乙型肝炎患者外周血CD3 T淋巴细胞CD2;表达占外周血单个核细胞(2.92±0.13)%,急性乙型肝炎患者(0.51±0.36)%,慢性重症肝炎(1.60±0.07)%,病毒携带者(0.95±0.23)%;慢性乙型肝炎患者外周血CD4 T淋巴细胞CD25表达(2.58±0.50)%,急性乙型肝炎患者(0.34±0.07)%,慢性重症肝炎(1.45±0.02)%,病毒携带者检出率(0.83±0.13)%;慢性乙型肝炎患者、慢性重症肝炎较病毒携带者、急性乙型肝炎患者相比,CD3 T及CD4 T CD25表达明显增加(P＜0.05),慢性乙型肝炎患者较慢性重症肝炎相比,CD3 T及CD4 T CD25表达明显增加(P＜0.05).结论 乙型肝炎患者外周血T细胞CD25主要在CD4 T细胞表达,慢性乙型肝炎患者CD4 CD25 T细胞较急性肝炎增多,提示乙型肝炎免疫耐受与CD25可能有关.     

转录因子KLF6在肝细胞癌、肝硬化组织中的表达及其意义

[目的]探讨转录因子KLF6蛋白在人类肝细胞癌（HCC）、肝硬化中发生发展的作用机制。[方法]用免疫组化方法对51例HCC组织、51例癌旁组织、15例肝硬化组织以及10例因良性病变而切除的正常肝组织中的转录因子KLF6进行蛋白检测。[结果]KLF6蛋白阳性表达率在HCC组织、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织分别为86．3％（44，51）、68．6％（35／51）、26．7％（4／15）、0。KLF6蛋白随着肝病恶化程度的增高而表达增多。KLF6蛋白表达在HCC组织高于癌旁组织（P〈0．05），癌旁组织高于肝硬化组织（P〈0．01），HCC组织与癌旁组织均显著高于正常肝组织（P〈0．01）。KLF6蛋白阳性表达与肝癌分化程度相关（P〈0．05）。[结论]KLF6过表达在HCC与肝硬化的发生发展中起重要作用，其作用机制值得进一步研究。     

强制泛素化乙肝病毒核心抗原融合基因表达质粒的构建

目的 构建强制泛素化乙肝病毒核心抗原(HBcAg)融合基因真核表达质粒.方法 以HBV adr亚型全基因质粒pADR.为模板,PCR扩增HBcAg基因片段;无茵操作下分离Balb/C小鼠肝脏,提取mRNA,RTPCR扩增小鼠泛素基因片段.PCR产物经测序鉴定后双酶切,插入真核表达质粒pcDNA 3.1(-),构建重组真核表达质粒ub-HBcAg-pcDNA 3.1(-)酶切鉴定和基因测序.结果 扩增的泛素基因片段和HBcAg基因片段经测序证实序列正确;将上述基因双酶切后插入质粒pcDNA 3.1(-)中,构建强制泛素化rmcAg融合基因表达质粒ub-HBcAg-pcDNA3.1(-);融合基因真核表达质粒ub-HBcAG-pcDNA 3.1(-)经酶切、基因测序等鉴定证实目的基因序列和插入方向正确,与预期结果一致.结论 成功构建了强制泛素化乙肝病毒核心抗原融合基因真核表达质粒,为进一步研究强制泛素化HBcAg诱导HBV特异性CTL奠定了实验基础.     

乙肝病毒核心抗原强制泛素化DNA疫苗的构建

目的构建乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）强制泛素（Ub）化的DNA疫苗表达质粒。方法以BALB/c小鼠肝脏mRNA为模板,RT-PCR扩增Ub单体基因片段,并将其羧基端第76位氨基酸突变为丙氨酸;以HBVpADR为模板,PCR扩增HBcAg基因片段,并根据N末端法则将其第1位氨基酸突变为精氨酸;利用重组PCR技术拼接Ub-HBcAg融合基因,纯化后连接pUCm-T载体,酶切鉴定正确后将Ub-HBcAg片段插入真核表达质粒pcDNA3.1（-）,构建重组真核表达质粒Ub-HBcAg-pcDNA3.1（-）,并行酶切鉴定和基因测序。结果构建的HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗经基因测序证实目的基因插入方向正确,突变与预期相符;其余基因序列与GenBank发布序列完全一致。结论成功构建了HBcAg强制Ub化融合基因DNA疫苗。