细胞因子调节人肝癌细胞ICAM-1分子的表达及其对CD3AK杀伤功能的影响

应用基因重组人干扰素α（IFN-α）、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子（TNF）体外处理人肝癌细胞系H-7402,ABC-CELISA法检测各处理组和对照组细胞表面细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达水平,用 LDH释放法观察CD3单克隆抗体活化的杀伤细胞（CD3AK）对各处理条件下H-7402细胞的杀伤活性。结果表明:经TNF,IFN-α处理的肿瘤细胞ICAM-1表达水平较对照组显著增高,同时对CD3AK细胞的杀伤敏感性亦显著增强,IFN-γ虽能够提高靶细胞ICAM-1分子的表达,但CD3AK的杀伤活性并未因此增强。抗ICAM-1和抗白细胞功能相关抗原LFA-1单抗能够有效地降低CD3AK对靶细胞的杀伤作用,并且能够阻断IFN-α、TNF对CD3AK细胞杀伤效应的促进作用。提示ICAM-1/LFA-1参与了CD3AK粘附杀伤肿瘤细胞过程,TNF、IFN-α的促杀伤效应与肿瘤细胞表面ICAM-1分子的表达水平升高有关。     

信号转导子与转录激活子3与肝细胞癌

信号转导子与转录激活子3(STAT3)既是一种重要的核转录因子,也是一种信号转导因子,参与细胞生长、恶性转化、凋亡等生理功能的调控,STAT3的持续激活与多种恶性肿瘤发生发展密切地相关。目前STAT3与肝细胞癌的研究已经取得初步成果,STAT3可能是治疗肝细胞癌的一个关键靶点。     

不同来源的抗乙肝免疫核糖核酸对慢性乙型肝炎患者的免疫调节作用

目的 探讨HBV感染后乙肝保护抗体抗－HBs产生机体外周淋巴细胞iRNA(h-iRNA)对慢性乙型肝炎的免疫调节作用,并与目前单用HBsAg免疫动物来源的抗乙肝iRNA(a-iRNA)相比较。方法 利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察h-iRNA对慢性乙肝患外周淋巴细胞HBV抗原特增殖反应的影响。结果 在HBsAg刺激组中,h-iRNA,a-iRNA对慢性乙肝患外周HB－sAg特异淋巴细胞增殖反应皆有一定程度的增强作用;但HBcAg刺激组中,h-iRNA对慢性乙肝患HBc-Ag特异淋巴细胞增殖反应具有增强作用,与a-iRNA相比,差异有显性意义。结论 HBV抗原的特异增殖反应,对主要靶抗原HBcAg特异淋巴细胞增殖反应的增强作用,有利于清除肝内HBV。目前单用HBsAg免疫动物的抗乙肝iRNA,不具有对HBV其它抗原的免疫信息,尤其是不能对免疫细胞识别肝细胞内HBV的主要靶抗原HBcAg产生有效免疫作用,可能是影响其疗效的重要原因。     

结核分枝杆菌抗原Ag85B优势诱导活动性结核患者Th1型细胞免疫反应研究

目的 观察Ag85B抗原在诱导活动性结核患者细胞免疫应答中的作用.方法 选取60例活动性结核患者,分离其外周血单个核淋巴细胞(PBMC),加Ag85B抗原刺激培养72h,ELISA法检测上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10细胞因子浓度,流式细胞术(FCM)检测CD4⁺T淋巴细胞内的细胞因子IFN-γ水平,定量PCR及Western blot法检测PBMC细胞转录因子T-bet、GATA-3的表达.结果 检测活动性结核患者外周血单个核淋巴细胞(PBMC)培养上清液,Ag85B蛋白实验组Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2浓度明显高于结核菌素(PPD)组(P<0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平与PPD组相比,差异无统计学意义(P>0.05),以上两组细胞因子水平均明显高于空白对照组(P<0.05).流式细胞法检测CD4⁺T胞内细胞因子IFN-γ水平,Ag85B蛋白实验组高于PPD组及空白对照组(P<0.05).定量PCR及Western blot法检测,T-bet水平Ag85B组高于PPD组(P<0.05),而GATA-3水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 结核杆菌抗原Ag85B可以通过上调Th1型转录因子T-bet诱导优势Th1型免疫反应,为结核病的预防及治疗提供理论基础.     

c-Myb、VEGFR2、EGFR蛋白在肝硬化、肝细胞癌组织中的表达

目的研究c-Myb蛋白在肝硬化、肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其与VEGFR2、EGFR在HCC组织中表达的关系,探讨c-Myb基因在肝硬化、HCC的发生、发展中的作用机制。方法应用免疫组织化学法检测63例HCC组织、59例癌旁组织、12例肝硬化组织和11例正常肝组织中c-Myb蛋白表达情况,VEGFR2、EGFR分别在29、45例HCC组织中的表达情况。结果肝硬化组织和HCC组织相对于正常肝组织,癌旁组织相对于肝硬化组织,c-Myb蛋白的表达明显增高（P=0.000）;在HCC组织中,c-Myb蛋白的表达与VEGFR2和EGFR的表达无显著相关性。结论c-Myb过表达是HCC发病中的早期事件,在肝硬化、HCC的发生、发展中可能起重要作用,其作用机制值得进一步研究。     

Runx3过表达对慢性乙型肝炎患者Th1、Th2型细胞因子表达的影响

目的：探讨 Runx3过表达对 CHB 患者 Th1、Th2型细胞因子表达水平的影响。方法重组慢病毒载体pGC-FU-Runx3与阴性对照慢病毒载体 pGC-FU 分别转染29例 CHB 患者外周血 CD4＋ T 细胞,收集培养3 d、5 d 和7 d的细胞培养上清液,应用 ELISA 检测 Th1型细胞因子 IFN-γ、IL-2和 Th2型细胞因子 IL-4、IL-10的表达水平。结果与pGC-FU 转染组比较,pGC-FU-Runx3转染组 Th1型细胞因子 IFN-γ的表达水平在3 d（P ＜0．05）、5 d（P ＜0．01）和7 d （P ＜0．01）时均明显升高;IL-2的表达水平在3 d 时差异无统计学意义（P ＞0．05）,但在5 d（P ＜0．05）和7 d（P ＜0．01）时均明显升高。与 pGC-FU 转染组比较,pGC-FU-Runx3转染组 Th2型细胞因子 IL-4的表达水平在3 d 时差异无统计学意义（P ＞0．05）,但在5 d（P ＜0．01）和7 d（P ＜0．05）时均明显降低;IL-10的表达水平在3 d 时差异无统计学意义（P ＞0．05）,但在5 d（P ＜0．05）和7 d（P ＜0．05）时均明显降低。与 pGC-FU 转染组比较,pGC-FU-Runx3转染组 IFN-γ／IL-4比值在3 d（P ＜0．01）、5 d（P ＜0．01）和7 d（P ＜0．01）时均明显增大。结论 Runx3过表达可以促进 CHB 患者 Th1型细胞因子的分泌,抑制 Th2型细胞因子的分泌,使其 Th1／Th2失平衡得到改善。     

Sp1在肝脏疾病中的作用

近年来转录因子SP1在临床中的应用得到了快速发展,SP1作为细胞内的重要转录因子,其信号转导通路的活化参与细胞癌变、增殖、凋亡及新生物的分化等多种生物学效应。1 Sp1的结构与功能Sp1是Sp/SKLF(specificityprotein/Krüppel-like factor)转录因子家族中最早被克隆的因子,由三个保守的Cys2H is2锌指特异结合而成,三个锌指形成转录因子的DNA连接区域。通常认为Sp1是通过GC或GT盒调节而控制所有基因的转录,可调控某些启动子中富含GC序列的细胞和病毒基因的转录过程。Sp1可通过D结构域形成多聚体而拉近相离甚远的DNA序列,使DNA形…     

乙型肝炎肝组织细胞粘附分子-1表达的免疫组化研究

目的 探讨细胞粘附分子-1(ICAM-1)在乙型肝炎肝组织内的表达与肝细胞损伤的关系。 方法 用免疫组织化学技术,标记的链菌素亲生物蛋白法检测113例急、慢性乙型肝炎,10例正常肝组织标本内ICAM-1抗原表达情况。 结果 中、重度CAH、活动性肝硬变肝细胞ICAM-1表达较急性肝炎、轻度CAH显著增强(P<0.01);急性肝炎、轻度CAH较CPH、ASC、正常肝组织显著增强(P<0.01)。HBV低复制组(HBeAg-,HBeAb )中,肝细胞表达ICAM-1阳性率(92.7％),高于HBeAg ,HBeAb-组(75.7％,P<0.05)。 结论 ICAM-1肝细胞膜表达与乙型肝炎肝细胞损伤有关,在HBV清除过程中可能起着重要作用。     

非复制型腺病毒介导抗-HBc单链抗体的细胞内表达

目的探讨非复制型腺病毒介导抗-HBc单链抗体(ScFv)细胞内表达效率,并确定是否具有特异性抗原结合活性。方法将经细菌内同源重组并在293细胞中包装产生的携带抗HBc ScFv基因的非复制型重组腺病毒,按感染复数为10体外转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达；取培养上清液和细胞裂解上清液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot法检测HBc ScFv表达。结果重组腺病毒Ad-ScFv感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到HepG2细胞中绿色荧光蛋白；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳显示培养上清液和细胞裂解物中可见2.7×10~4左右的蛋白条带；Western blot显示有乙型肝炎核心抗原特异性结合活性阳性反应条带出现。结论携带抗-HBc ScFv基因的非复制型重组腺病毒能在真核细胞中有效表达抗-HBc ScFv,并具有特异性抗原结合活性。     

CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合表达载体的构建及其表达和纯化

目的构建CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合基因表达质粒并分离、纯化融合蛋白。方法以质粒pCMV-SPORT6中Tapasin基因为模板,设计一对引物,上游引物带有融合基因CTP-HBcAg18-27序列,进行PCR反应;PCR产物回收纯化克隆到质粒pREST-B中,双酶切及测序鉴定;将鉴定正确的质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达;镍柱亲和层析法纯化融合蛋白;Western blotting鉴定融合蛋白。结果由质粒pCMV-SPORT6 PCR扩增得到1 480 bp大小的条带,为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合序列;将其克隆到表达质粒pREST-B后经酶切、测序结果正确;表达质粒转化DE3后成功表达,经纯化得到52.3 KD的蛋白;Western blotting鉴定为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白。结论成功构建了CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合表达质粒,并成功表达,为进一步研究此融合蛋白的功能提供了实验基础。