HSP90β干扰和过表达慢病毒载体的构建及其在骨肉瘤细胞Saos-2中的表达

目的:获得热休克蛋白90β(HSP90β)基因干扰和过表达慢病毒表达系统，并检测其在人骨肉瘤细胞株Saos-2中的表达水平。方法:设计合成shRNA，以慢病毒表达质粒构建HSP90β干扰和过表达载体，酶切电泳、测序技术鉴定载体构建是否成功。重组病毒转染H1299细胞，以嘌呤霉素筛选稳定转染的Saos-2细胞，通过荧光显微镜观察计数获得转染效率。将感染好的细胞分为干扰NC组（NEG-shRNA）、干扰组（shRNA-HSP90β）、过表达NC对照组（NEG-pEZ）及过表达组（pEZ-HSP90β）。通过qRT-PCR 与Western blotting 分别从mRNA 和蛋白表达水平验证目的基因的干扰和过表达水平。结果:插入慢病毒表达载体的基因片段与目的基因的碱基序列完全一致。病毒包装成功后，嘌呤霉素最小致死浓度1 μg/ml，感染复数200，感染人Saos-2的感染效率达80%，其中shRNA-HSP90β组干扰效率为86.35%，pEZ-HSP90β组的mRNA相对表达量增加2.8倍。进一步研究发现，shRNA-HSP90β组较NEG-shRNA组中HSP90β蛋白表达明显降低，pEZ-HSP90β组较NEG-pEZ组HSP90β蛋白表达增加。结论:HSP90β基因干扰和过表达慢病毒载体构建成功，并能够在Saos-2中稳定表达。     

接种预防性人乳头瘤病毒疫苗预防宫颈癌及癌前病变

背景:持续性感染高风险型(hr)人乳头瘤病毒(HPV)会引起宫颈癌前病变和宫颈癌的发生。HPV16和18感染导致了全球约70%的宫颈癌。目的:评价预防性HPV疫苗在青少年和成年女性中的危害及预防宫颈癌前病变和HPV16/18感染的保护效果。     

成都市女性社区居民对宫颈癌及人乳头瘤病毒的认知度调查研究

目的 了解成都市女性社区居民对宫颈癌及HPV的基线认知水平；评价以医务人员为主导的健康教育能否有效提高社区居民宫颈癌相关认知水平。方法 2015 - 2018年每年妇女节期间通过对社区女性进行问卷调查，比较4年间（2015 - 2018）培训前后社区女性认知水平的变化情况以及疫苗上市前（2015 - 2016）和疫苗上市后（2017 - 2018）社区女性基线认知的变化。结果 健康教育前、后有效问卷分别为591、449份。健康教育前，32.1%的调查对象认为HPV病毒感染是引起宫颈癌最重要的原因，47.2%认为HPV的传播途径为性传播，25.2%认为HPV疫苗接种的最佳年龄为初次性生活前；健康教育后，以上比例分别增长至45.4%、73.7%、62.8%（P均＜0.05）。疫苗上市后，基线愿意接受筛查的调查对象比例由疫苗上市前的95.4%下降到86.1%（P＜0.05）。“医院展板”对基线认知的影响最大，接触过该途径人群的平均认知得分比未接触人群高3.4分（P＜0.05）。结论 成都市社区女性对宫颈癌及HPV相关的基线认知水平较低，疫苗上市后筛查意愿有明显下降趋势。以医院医生为主导的宫颈癌及HPV健康教育应当纳入社区人群健康教育的常规模式，同时应加强宣传疫苗接种后仍应进行宫颈癌筛查的重要性。     

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)快速检测GⅡ型诺如病毒

目的建立基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的GⅡ型诺如病毒快速检测方法。方法设计针对GⅡ型诺如病毒特异性保守序列的RPA引物,利用RPA检测试剂盒建立RPA扩增体系,并通过2%琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分析鉴定,从而对引物扩增效率、特异性、灵敏度和稳定性进行评价。结果本研究针对GⅡ型诺如病毒特异性保守序列设计了RPA特异性引物RPAf/RPAr,利用RPA检测试剂盒建立了RPA扩增体系。引物筛选实验结果显示,RPA检测方法在扩增反应5min后即可定性检测诺如病毒。将GⅡ.4型诺如病毒、GⅡ.17型诺如病毒、GⅡ.3型诺如病毒、GⅡ.6型诺如病毒、星状病毒、MS2噬菌体、人轮状病毒和人腺病毒基因组作为模板进行特异性检测。结果显示,只有GⅡ.4、GⅡ.17、GⅡ.3和GⅡ.6型诺如病毒有特异性扩增,表明该方法特异性良好,可基本满足对GⅡ型诺如病毒的检测。灵敏度实验结果显示,该方法可检测低至106 copies/μL的诺如病毒。利用10例诺如病毒阳性粪便样品对RPA检测方法稳定性进行评价。结果表明,10例样品均被特异性扩增,表明该方法稳定较好。结论本文建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高、稳定性好以及可操作性强,可用于对诺如病毒的检测。     

深圳市宫颈门诊就诊者高危型人乳头瘤病毒和生殖道沙眼衣原体感染情况

目的 分析深圳地区宫颈门诊就诊者高危型人乳头瘤病毒（high-risk human papillomavirus, HR-HPV）和生殖道沙眼衣原体（genital chlamydia trachomatis, GCT）感染情况及其与子宫颈癌/癌前病变的关联。方法 回顾性地收集2018年1—12月深圳市妇幼保健院妇科宫颈门诊就诊者病历资料,采用非条件Logistic回归分析高危型HPV和GCT与子宫颈病变的关联,计算比值比（odds ratio, OR）和95%置信区间（confidence interval, CI）。结果 本研究纳入深圳市宫颈门诊就诊者881例,平均年龄（36.86±9.46）岁。高危型HPV阳性率为71.7%,GCT的阳性率为7.4%,高危型HPV合并GCT的感染率为5.6%。高危型HPV阳性率随年龄递增（P_趋势=0.001）,而GCT阳性率和高危型HPV合并GCT感染率呈现随年龄逐渐下降的趋势（趋势性P=0.002和0.014）。多因素Logistic回归分析显示,高危型HPV感染与细胞学ASCUS+及病理学CIN1+存在显著关联,OR值及95%CI分别为3.72 （2.35, 5.90）和6.90 （3.79, 12.57）;未发现GCT感染或高危型HPV合并GCT感染与细胞学ASCUS+及病理学CIN1+存在关联。结论 宫颈门诊就诊者是深圳市高危型HPV和GCT感染的重点人群,需有针对性地做好健康教育、安全套促进和常规筛查工作。