消痔灵注射液对膀胱癌EJ细胞生长抑制作用研究

目的研究消痔灵注射液对膀胱癌EJ细胞生长的抑制作用及其机制。方法将膀胱癌EJ细胞用不同浓度消痔灵溶液（1、2、3、4、6、8、10 g/L）处理，另设对照组。采用CCK-8法检测消痔灵溶液作用不同时间（12、24、48 h）对EJ细胞增殖的抑制作用；采用流式细胞术观察EJ细胞生长抑制情况；吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）荧光染色进一步观察其凋亡诱导作用；采用Western Blot检测Caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果消痔灵对EJ细胞生长有明显的抑制作用，且在消痔灵浓度低于6 g/L时随作用浓度增高抑制率显著增加（P<0.01），作用时间延长对增殖抑制率也有一定影响（P<0.05）。流式细胞分析显示细胞在消痔灵作用后被阻滞在G0/G1期，且随给药浓度增高细胞凋亡率明显增高（P<0.01）。AO/EB染色显示EJ细胞凋亡形态学特征与药物作用时间和浓度有明显的相关性。Western Blot结果显示，与对照组比较，消痔灵组Caspase-3及Bax蛋白的表达水平增高（P<0.05），Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论消痔灵注射液对膀胱癌细胞生长有显著的抑制作用，可能与其阻断细胞增殖周期及诱导癌细胞凋亡有关。     

miRNA141表达的调控对人前列腺癌DU145细胞恶性生物行为的影响

目的：研究microRNA-141（miR-141）表达的调控对人前列腺癌细胞系DU145细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法：利用脂质体Lipofectamine2000将miR-141 mimics（miR-141 up组）和miR-141 inhibi‐tiors（miR-141 down 组）分别转染至人前列腺癌DU145细胞中，同时设置未转染组（Control组）和miRNA无义序列转染组（NC组）。qPCR检测转染前后各组DU145细胞中miR-141表达变化，MTT方法检测各组DU145细胞的增殖活力和对顺铂（DDP）作用敏感性变化，流式细胞术检测各组DU145细胞周期和顺铂作用下凋亡率变化，Transwell方法检测各组细胞侵袭和迁移能力的变化，Western blotting检测各组细胞中VEGF、EGFR蛋白表达量变化。结果：与Control组和NC组相比，miR-141 down组DU145细胞中miRNA-141表达水平下降为（0.18±0.08），其细胞增殖活力显著下降而对DDP敏感性显著上升、细胞周期被阻滞于G0+G1期而细胞凋亡率显著上升至（46.67±5.86）%、细胞侵袭率和迁移率分别显著下降至（44.34±8.32）%和（57.73±6.19）%、VEGF和EGFR相对表达量分别下降至（0.47±0.06）和（0.36±0.06）（上述各指标分别P<0.05或P<0.01）。miR-141 up组DU145细胞中miR‐NA-141表达水平上升为（4.23±0.53），其细胞增殖活力显著上升而对DDP敏感性显著下降、细胞周期提前进入S和G2期而细胞凋亡率显著下降至（18.77±4.24）%、细胞侵袭率和迁移率分别显著上升至（89.94±6.34）%和（94.44±5.84）%、VEGF和EGFR相对表达量分别上升至（0.89±0.07）和（0.73±0.06）（上述各指标分别P<0.05或P<0.01）。结论：miR-141在前列腺癌DU145细胞中发挥促癌因子作用，其下调表达能够显著抑制DU145细胞增殖活力、周期、侵袭与迁移，而促进对DDP的敏感性和细胞凋亡，其机制可能与其抑制VEGF和EGFR蛋白表达有关。     

保肾通络方对KK-Ay小鼠足细胞p38通路及凋亡的作用机制研究

目的探讨保肾通络方对KK-Ay小鼠肾脏足细胞p38通路及凋亡的影响,进而阐明保肾通络方防治DN的分子机制。方法 30只KK-Ay小鼠随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,另选取10只C57BL/6J小鼠作为正常对照组。保肾通络方组和缬沙坦组分别给予保肾通络方和缬沙坦灌胃,正常对照组和模型组予等剂量蒸馏水灌胃,实验周期为12周。结果与正常对照组相比,模型组足细胞p38通路显著激活,足细胞凋亡数目明显增加(P0.05);与模型组相比,保肾通络方组及缬沙坦组小鼠足细胞p38通路激活被抑制,足细胞凋亡数目明显减少(P0.05)。结论保肾通络方可以抑制DN小鼠足细胞p38通路激活,减轻足细胞凋亡,可能是其降低DN蛋白尿,延缓疾病进展的分子机制。     

miR-147对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:比较胶质瘤患者胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-147表达水平的差异性，进一步分析miR-147与胶质瘤细胞生物学活性的相关性。方法:通过实时荧光定量PCR检测65例胶质瘤患者瘤组织和瘤旁组织中miR-147的表达水平；采用Lipofectamine 2000转染法转染胶质瘤细胞，分为miR-147 mimics组和NC组，检测两组转染效率；进一步通过CCK-8实验、流式细胞实验和Transwell实验比较两组细胞生物活性。结果:胶质瘤组织中miR-147表达水平显著低于瘤旁组织；与NC组比较，miR-147 mimics组细胞不论是增殖能力还是侵袭能力都明显降低，但是，miR-147 mimics组的细胞凋亡率升高。结论:胶质瘤组织中存在miR-147低表达的现象。miR-147在胶质瘤细胞中表达升高能够抑制细胞的增殖能力、降低其侵袭能力，并促使更多的细胞发生晚期凋亡。miR-147可能在胶质瘤中扮演着抑癌基因的重要角色。     

奥沙利铂通过调控miRNA-7-5p/RAF-1促进胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨奥沙利铂如何调控MAPK通路,抑制胃癌细胞的增殖。方法NCBI检索文献,利用TargetScan、StarBase和miRBase数据库,进行GO分析与KEGG通路富集,找到相关miRNAs,预测靶基因。应用Real-time PCR、MTT、Hoechst33258、流式细胞术、细胞划痕实验、Western blot等方法分析人胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期、侵袭及蛋白表达情况。结果胃癌细胞中miR-7-5p显著低表达,RAF1与miR-7-5p存在互靶关系。miR-7-5p mimics与奥沙利铂均可促进SGC-7901细胞的凋亡,提高G1期细胞百分率(P<0.05),降低侵袭、迁移速度。caspase3、caspase9蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。结论过表达miR-7-5p与奥沙利铂均可促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡,提示奥沙利铂可能通过上调miRNA-7-5p促进SGC-7901细胞的凋亡,降低侵袭、迁移速度。     

蒿甲醚对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用研究

目的:研究蒿甲醚对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）的增殖、侵袭以及迁移的影响并探讨其分子机制。方法:分别利用MTT、集落形成试验检测胃癌细胞的活力和生长；流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率；利用细胞侵袭和划痕愈合试验检测胃癌细胞的侵袭和迁移；Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:蒿甲醚（0~800 μmol/L）能够浓度和时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）。集落形成试验以及流式细胞术结果显示蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长以及促进细胞凋亡（P＜0.05）。细胞侵袭和划痕愈合试验发现蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）。Western blot结果显示蒿甲醚(400 和 600 μmol/L)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平（P＜0.05）；同时能够抑制N-cadherin 和vimentin的蛋白表达并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:蒿甲醚可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭以及迁移，其机制可能是与促进细胞凋亡以及抑制上皮间质转化有关。