奥沙利铂通过调控miRNA-7-5p/RAF-1促进胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨奥沙利铂如何调控MAPK通路,抑制胃癌细胞的增殖。方法NCBI检索文献,利用TargetScan、StarBase和miRBase数据库,进行GO分析与KEGG通路富集,找到相关miRNAs,预测靶基因。应用Real-time PCR、MTT、Hoechst33258、流式细胞术、细胞划痕实验、Western blot等方法分析人胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期、侵袭及蛋白表达情况。结果胃癌细胞中miR-7-5p显著低表达,RAF1与miR-7-5p存在互靶关系。miR-7-5p mimics与奥沙利铂均可促进SGC-7901细胞的凋亡,提高G1期细胞百分率(P<0.05),降低侵袭、迁移速度。caspase3、caspase9蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。结论过表达miR-7-5p与奥沙利铂均可促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡,提示奥沙利铂可能通过上调miRNA-7-5p促进SGC-7901细胞的凋亡,降低侵袭、迁移速度。     

神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达

背景:有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。目的:检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达?设计:重复测量设计。单位:吉林大学第二临床医学院,吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。材料:实验于2004-10/2005-10在吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12～14d的Wistar大鼠1只,将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体(武汉博士德公司);大鼠抗大鼠Musashi抗体(日本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠)。方法:取孕12～14d的Wistar大鼠胎盘,剥离羊膜获得上皮细胞,在37℃、体积分数为0.05的CO2环境下,胰蛋白酶消化5min,加入DMEM/F12培养液,以5×109L-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后,细胞以1×108L-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中,用质量浓度为40g/L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。主要观察指标:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况。结果:①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察:羊膜上皮细胞培养24h后,细胞扁平呈成纤维细胞样。3～5d后,胞体饱满,核大而圆,核仁清晰,突起发达,并互相连成网状。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况:培养4d后免疫细胞化学染色结果可见,羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇化酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。结论:羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性,可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。     

神经组织细胞特异性蛋白在大鼠羊膜上皮细胞中的表达

背景：有证据表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原，且可以分泌多种神经营养因子及递质。若羊膜上皮细胞能够代替神经细胞，其神经营养作用必将为治疗神经推行性病变带来广阔前景。目的：检测神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中是否表达？设计：重复测量设计。单位：吉林大学第二临床医学院，吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。材料：实验于2004-10／2005-10在吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室完成。选取清洁级孕12-14d的Wistar大鼠1只。将分离出的羊膜上皮细胞用于实验。小鼠抗大鼠神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶单克隆抗体、兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶和NT-3多克隆抗体（武汉博士德公司）；大鼠抗大鼠Musashi抗体（13本庆应义塾大学岗野荣之教授惠赠）。方法：取孕1扣14d的Wistar大鼠胎盘，剥离羊膜获得上皮细胞，在37℃、体积分数为0．05的CO2环境下，胰蛋白酶消化5min，加入DMEM／F12．培养液，以5&;#215;10^9L^-1的浓度接种于培养瓶中。培养3d后，细胞以1&;#215;10^8^L^-1的浓度接种于预先涂有多聚赖氨酸的直径35mm平皿中，用质量浓度为40g／L的多聚甲醛固定20min。采用免疫细胞化学染色方法对神经元特异性抗原微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白、乙酰胆碱转移酶在羊膜上皮细胞中的表达情况进行检测。主要观察指标：①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况：结果：①大鼠羊膜上皮细胞不同培养时间的形态观察：羊膜上皮细胞培养24h后，细胞扁平呈成纤维细胞样。3-5d后，胞体饱满，核大而圆，核仁清晰，突起发达，并互相连成网状。②神经组织细胞特异性抗原在大鼠羊膜上皮细胞中的表达情况：培养4d后免疫细胞化学染色结果可见，羊膜上皮细胞表达Nestin、神经元特异性烯醇化酶、乙酰胆碱转移酶以及Musashi、神经元特异性抗原微管相关蛋白、星形胶质细胞特异性抗原胶质原纤维酸性蛋白。结论：羊膜上皮细胞与神经组织细胞具有一定的同源性。可望作为治疗神经系统疾病新的细胞来源。     

脑心通对H2O2诱导的大鼠内皮细胞凋亡的影响

现代的观点认为动脉粥样硬化的始动环节为血管内皮完整性的破坏,其中内皮细胞凋亡与增生的不平衡是极为重要的因素.吸烟、高脂血症、高血糖、氧化应激等均可导致内皮细胞过度凋亡、血管内膜解剖结构的破坏及血管功能的紊乱.目前,对细胞凋亡及抗凋亡机制的研究较多,抗氧化、抑制氧自由基是研究的热点.脑心通为中药复方制剂,我们于2010年10月至2011年7月,采用H2O2制备人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡模型,并通过血清药理学方法观察含脑心通血清对细胞凋亡的影响.     

356例ICU急性中毒患者预后因素分析

目的 通过分析ICU 356例急性中毒患者的临床资料,探讨影响急性中毒患者预后的相关因素,为临床防治急性中毒提供依据.方法 收集吉林大学第二医院ICU 2005年1月至2009年12月收治的356例资料完整的急性中毒患者的临床资料,按照设计的《急性中毒患者临床观察表》记录相关研究内容,采用U检验、x2检验等方法,行单因素分析和多因素Logistic回归分析,研究性别、年龄、中毒原因、毒物类型、中毒距就诊时间、中毒距入ICU时间、住院时间、心肺复苏、机械通气、急性生理学及慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ评分)与预后的关系.结果 356例患者分为存活组(260例)与死亡组(96例),存活组住院时间(5.72 ±4.37)d、中毒距入ICU时间(17.16±31.22)h、APACHEⅡ评分(10.27±7.77)分,与死亡组住院时间(3.53 ±5.79)d、中毒距入ICU时间(37.21 ±67.35)h、APACHEⅡ评分(18.78 ±8.66)分之间,差异具有统计学意义(P ＜0.05或P＜0.01);两组间心肺复苏、机械通气、毒物类型差异具有统计学意义(P＜0.05);多因素Logistic回归分析结果显示住院时间、APACHEⅡ评分、心肺复苏、机械通气、毒物类型与预后明显相关(P＜0.05).得到死亡风险模型:Y=-0.817-0.137X1 +0.140X3 +2.133X4+ 1.039X5-0.291X6.结论 住院时间、APACHEⅡ评分、心肺复苏、机械通气、毒物类型为影响预后的独立危险因素;APACHEⅡ评分系统可用于急性中毒患者危重程度及预后的评估.     

大鼠羊膜上皮细胞植入损伤脊髓后的存活与迁移

背景:有研究表明羊膜上皮细胞能够表达神经系统细胞的几乎全部特异性抗原,且可以分泌多种神经营养因子及递质,如果羊膜上皮细胞用于代替神经细胞,其神经营养作用必将为治疗脊髓损伤和神经退行性病变带来广阔前景。目的:观察大鼠羊膜上皮细胞移植入损伤脊髓后的存活、迁移及分泌情况。设计:观察实验。单位:吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室。材料:选用1只孕12～14d及18只成年雄性Wistar大鼠,体质量300～350g,由吉林大学实验动物中心提供。免疫组织化学染涂色试剂:小鼠抗大鼠溴核苷脱氧嘧啶单克隆抗体购自Sigma公司;兔抗大鼠神经营养素-3多克隆抗体和兔抗大鼠BDNF多克隆抗体(博士德公司);SP免疫组织化学染色试剂盒购自迈新公司。方法:实验于2005-07/10在吉林大学基础医学院组织与胚胎学教研室完成。①大鼠脊髓损伤模型的建立:大鼠麻醉后,分离皮下组织肌肉,用咬骨钳咬除棘突及椎板,暴露脊髓,用止血钳以一扣力度钳夹脊髓全截面3min,青霉素涂撒创口,缝合肌肉皮肤。术中根据需要吸入乙醚麻醉,1周后移植。②羊膜上皮细胞的获取和培养:取孕12～14d的Wistar大鼠胎盘剪成1mm×1mm×1mm的组织块,经消化培养后,机械吹打使其成为单细胞悬液接种于培养瓶中。③羊膜上皮细胞移植入损伤脊髓:切开原创口,暴露损伤脊髓,将5μL羊膜上皮细胞悬液以1×1012/L的浓度用微量注射器在距损伤处上缘3mm处注入,注入时间为3min,停针5min后缓慢拔出,缝合肌肉、皮肤。④取材及免疫组织化学分析:分别于羊膜上皮细胞移植入1,3周后取材,即室温下40g/L多聚甲醛灌流固定后在PBS缓冲液中浸泡20min,4℃下一抗孵育过夜,二抗生物素化抗小鼠或兔IgG37℃孵育20min,辣根过氧化物酶标记的三抗于37℃孵育20min,0.2g/L二甲基联苯氨显色或AEC显色。主要观察指标:羊膜上皮细胞移植入损伤脊髓1,3周后的存活、迁移及分泌情况。结果:羊膜上皮细胞移植1周后,羊膜上皮细胞仍多聚于软脊膜下,可见阳性细胞核;羊膜上皮细胞移植3周后,羊膜上皮细胞迁移更加广泛,中央管及周围灰质中有大量阳性细胞;同时可观察到在损伤脊髓中移植的羊膜上皮细胞能够表达神经营养素3,表现为显红色的阳性细胞和脑源性神经营养因子。结论:羊膜上皮细胞在大鼠损伤脊髓内能够至少存活3周并有广泛迁移,此外还能够分泌神经营养因子脑源性神经营养因子和神经营养素3。     

fractalkine影响动脉粥样硬化信号的转导机制及卡托普利的干预作用

目的:通过鸟苷酸结合蛋白（G-蛋白）对不规则趋化因子fractalkine（FKN）诱导单个核细 胞合成核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,探讨FKN及其受体CX3CR1 可能存在的信号转导机制及卡托普利的干预作用。方法：将抗凝血用Ficoll密度梯度离心 法分离外周血单个核细胞,随机分为空白对照组、FKN组、PTX组、RO31-8220组、PDTC组及 卡托普利组,应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,应用酶联免疫法检测各 组培养液中TNF-α的表达水平。结果：FKN组与空白组比较NF-κB 、TNF-α表达明显增多( P<0.05);G-蛋白阻断剂PTX组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达明显减少(P<0.05); PKC阻断剂RO31-8220组与FKN组比较NF-κB 、TNF-α表达减少(P<0.05);NF-κB抑制剂PDTC组TNF-α表达较FKN组明显减少(P<0.05);卡托普利组较FKN组NF-κB 、TNF-α表达部分减少(P<0.05)。结论：FKN/CX3CR1有增加单个核细胞表达NF-κB、 TNF-α的作用;而卡托普利可通过减弱FKN/CX3CR1诱导单个核细胞合成NF-κB、 TNF-α,抑制炎症反应和抗动脉粥样硬化;FKN/CX3CR1影响动脉粥样硬化的信号转导机制可能是通过以下级联反应实现的：FKN+CX3CR1→G蛋白→PKC→NF-κB→TNF-α。