银杏内酯B对肌萎缩侧索硬化细胞模型的保护作用及其机制

目的:探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对肌萎缩侧索硬化细胞模型c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及细胞凋亡的影响。方法:通过含过表达人突变超氧化物歧化酶1(SOD1)~(G93A)基因(hSOD1~(G93A))和过表达人野生SODWT基因(hSOD1WT)与空质粒的慢病毒感染NSC34细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,倒置荧光显微镜下观察慢病毒的转染效率和细胞形态的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检验感染细胞是否过表达SOD1蛋白,建立hSOD1~(G93A)-NSC34细胞系后给予GB,细胞培养分组为正常组、模型组、不同浓度GB组(25,50,75,100 mg·L-1)组,48 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,筛选出最佳药物浓度,后续实验分组为以正常组,模型组,75 mg?L~(-1) GB组,SP600125组,75 mg?L-1GB+SP600125组,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化(p-)JNK,c-Jun,p-c-Jun,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:与正常的NSC34细胞比较,hSOD1~(G93A)NSC34组细胞胞体变圆,突触减少、变短,而hSOD1WT NSC34组细胞和空质粒组细胞形态学未发生明显变化,与正常组比较,hSOD1~(G93A)NSC34组,hSOD1WTNSC3组细胞内SOD1蛋白水平显著升高(P0. 01),肌萎缩侧索硬化(ALS)细胞模型成功建立。与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P0. 01);与模型组比较,给予不同浓度GB后,细胞存活率均显著升高(P0. 01),药物质量浓度为75 mg?L-1时细胞存活率显著升高(P0. 01)。后续实验,与正常组比较,模型组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达量显著升高(P0. 01);与模型组比较,75 mg?L-1GB组,SP600125组,75 mg?L-1GB+SP600125组凋亡率,p-JNK,p-c-Jun,cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P0. 05,P0. 01)。结论:GB对肌萎缩侧索硬化细胞模型具有抑制细胞凋亡的保护作用,这种保护作用可能是通过JNK信号通路实现的。     

丹红滴丸调节Bcl-2/Bax- Cyt-C-Caspase-3抑制心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡

目的:观察丹红滴丸对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞的保护作用,及其对凋亡通路Bcl-2/Bax-Cyt-C-Caspase-3的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、丹红滴丸(浸膏粉)1.5、3 g生药/kg组。大鼠心脏冠状动脉结扎45 min/松开结扎线3 h的方法建立缺血再灌注损伤模型。心脏冠状动脉结扎即刻十二指肠给药。N-BT染色计算缺血心肌范围;TUNEL法检测细胞凋亡,计算凋亡指数;酶联免疫吸附法检测细胞色素C(Cyt-C)含量;免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达量。结果:与假手术对照组比较,模型对照组心肌梗死范围、心肌细胞凋亡指数显著增高(P<0.01)、心肌组织半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X的(Bax)蛋白表达显著上调(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著下降(P<0.01),血清中Cyt-C含量升高(P<0.01)。与模型对照组比较,丹红滴丸各组大鼠心肌梗死范围明显减小、凋亡指数显著降低、心肌组织Bcl-2蛋白表达上调、Bax蛋白表达下调、Bcl-2/Bax升高(P<0.05或P<0.01);心肌组织Caspase-3蛋白表达显著下调(P<0.01),Cyt-C水平降低(P<0.01)。结论:丹红滴丸对缺血再灌注损伤大鼠心肌具有保护作用,机制与其调节Bcl-2/Bax-Cyt-C-Caspase-3凋亡信号分子从而抑制心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡相关。     

冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响

目的:探讨冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响。方法:MTT实验检测冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞增殖能力的影响;集落克隆实验检测细胞集落形成能力; DAPI荧光染色法检测HNE1/DDP细胞核形态的变化; PI单染流式细胞术分析细胞的凋亡情况;检测试剂盒测定细胞内ROS的水平; Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果:MTT实验结果表明,冬凌草甲素20μmol/L～50μmol/L可显著减弱HNE1/DDP细胞活力,抑制细胞增殖;相比于模型对照组,3μmol/L～5μmol/L的冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞的集落形成能力有明显的抑制作用(P <0. 05或P <0. 01);且随着冬凌草甲素给药浓度的增加,细胞核发生明显皱缩,核碎裂增加;细胞内ROS水平明显增加;抑凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2表达明显下调,促凋亡蛋白Bax、Bak表达明显上调(P <0. 05或P <0. 01)。结论:冬凌草甲素能显著抑制耐顺铂鼻咽癌HNE1/DDP细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,其作用可能是通过诱导细胞内ROS的产生,对Mcl-1、Bcl-2、Bax、Bak等凋亡相关蛋白进行调控实现的。     

水翁花对过氧化氢诱导神经细胞凋亡的影响

目的探讨水翁花对过氧化氢(H2O2)诱导神经细胞PC12凋亡的影响及其作用机制。方法构建PC12氧化应激损伤模型,不同浓度的水翁花干预H2O2诱导的PC12细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测细胞SOD水平。qRT-PCR法检测水翁花对miR-422a表达的影响;过表达miR-422a或抑制miR-422a表达对H2O2诱导的PC12细胞凋亡及SOD活性的影响。Western blot法测定细胞中Bcl-2、Bax的表达变化。结果 H2O2诱导的PC12细胞凋亡率升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),抑制miR-422a表达(P<0.05),而水翁花处理后,PC12细胞凋亡率降低(P<0.05),SOD活性增强(P<0.05),促进miR-422a表达(P<0.05),Bcl-2表达上调(P<0.05),Bax表达下调(P<0.05);过表达miR-422a可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡(P<0.05),增强SOD活性(P<0.05);抑制miR-422a表达可逆转水翁花对H2O2诱导的PC12细胞凋亡、SOD活性的影响。结论水翁花可通过上调miR-422a表达对H2O2诱导的PC12细胞损伤发挥保护作用,其可能作用机制与抗细胞凋亡及抗氧化作用相关。     

重楼皂苷D对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

重楼皂苷D(polyphyllin D)是重楼中的一种甾体皂苷单体,具有抗菌、镇痛、镇静、抗肿瘤等多种药理作用,但在胰腺癌中少有报道。该研究通过检测凋亡相关指标,探讨polyphyllin D对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。采用CCK-8法检测不同浓度的(0,1,2,3,4,5μg·μL-1)polyphyllin D分别处理胰腺癌Panc-1细胞24,48,72 h后,观察对细胞增殖的影响。采用流式细胞术对细胞周期、细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane protential,MMP)进行检测,Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞色素C (cytochrome C,Cyto C),Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3,cleaved caspase-9的蛋白表达情况。结果表明,与对照组相比,polyphyllin D能够时间和浓度依赖性地抑制Panc-1细胞的增殖活性。流式细胞术检测显示polyphyllin D能浓度依赖性使细胞阻滞于S期和G2/M期,MMP明显降低,细胞凋亡率随polyphyllin D作用浓度增加而增加。Western blot结果显示,polyphyllin D能浓度依赖性地上调Bax,Cyto C,cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达水平,下调Bcl-2的蛋白表达水平。以上研究结果提示,polyphyllin D能抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖,其机制可能与阻滞细胞的生长周期以及通过线粒体途径诱导细胞的凋亡相关。     

解毒胶囊治疗乳腺癌的机制研究

目的观察解毒胶囊有效成分对乳腺癌相关特异性指标的影响,并分析其作用机制。方法解毒胶囊10×溶液对大鼠进行灌胃7次制备含药血清,以5%、10%、20%浓度对MCF-7细胞加药,并运用MTT法测定细胞增殖与抑制,采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、ERα和PR蛋白的表达。结果与Serum组比较,5%浓度含药血清干预下的OD值升高,差异无统计学意义; 10%、20%浓度含药血清干预下的OD值均降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。与Serum组比较,5%含药血清浓度干预下,ERα蛋白表达下降,差异无统计学意义,PR蛋白的表达量降低,有显著性差异(P <0. 05); 10%、20%含药血清浓度干预下,ERα、PR蛋白表达均明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。与Serum组比较,Bax蛋白表达量明显升高,有显著性差异(P <0. 05); Bcl-2蛋白表达量显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论解毒胶囊可能是通过诱导病变细胞凋亡、改善性激素紊乱从而达到治疗乳腺癌的目的。     

平喘汤对哮喘模型大鼠炎症因子、免疫功能及EOS凋亡的影响

目的:探究平喘汤对哮喘模型大鼠炎症因子、免疫功能及嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡的影响。方法:选用SPF级健康雄性SD大鼠,随机分成6组:正常对照组、哮喘组、阳性对照组(地塞米松)、低中高剂量中药(平喘汤)治疗组各12只,除正常对照组其余均采用卵清蛋白致敏和雾化吸入制备哮喘模型大鼠,治疗2周后取其肺组织灌洗液(BALF),镜下统计炎性细胞(NEU、LYM)数目,采用ELISA法检测炎症因子(IL-6、IL-5)和免疫球蛋白(IgE、IgG1),采用HE染色观察肺部病理变化,采用TUNEL法检测肺组织EOS水平,并进行对比分析。结果:各中药治疗组和阳性对照组IL-6、IL-5、IgE、IgG1、淋巴细胞(LYM)、中性粒细胞(NEU)计数、气道壁EOS计数均高于正常对照组和低于哮喘模型组,肺组织EOS凋亡指数表达均低于正常组和高于哮喘模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:平喘汤治疗哮喘大鼠能降低炎症因子水平,改善免疫功能,对EOS凋亡具有促进作用,是一种较为有效的治疗方法。     

沉默信息调节因子过表达或谷氨酰胺剥夺对肾透明细胞癌细胞凋亡、增殖的影响

背景与目的：肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）是最常见的肾癌类型，它与代谢密切相关。探讨沉默信息调节因子4（silent information regulator 4，SIRT4）过表达或谷氨酰胺（glutamine，Gln）剥夺对ccRCC细胞增殖、凋亡的影响。方法：慢病毒构建SIRT4和突变体H161Y过表达的Caki-2细胞株，利用无Gln的培养基来构建Gln剥夺模型，并通过体外增殖活力实验［细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）］和克隆形成实验来分析两者对Caki-2细胞增殖和生长能力的影响；利用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）水平进而评估Gln代谢对细胞ROS含量的影响；进一步通过线粒体膜电位检测、凋亡检测和蛋白质印迹法（Western blot）检测凋亡相关分子，分析SIRT4过表达以及Gln剥夺对Caki-2细胞凋亡的影响。结果：过表达SIRT4可抑制Gln代谢从而抑制Caki-2细胞增殖，另外还原性物质还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phostate，NADPH）的生成减少能够增加细胞内ROS含量，促进细胞凋亡。而Gln剥夺抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的效果均比过表达SIRT4明显，但长期缺乏Gln将导致细胞无法生长。结论：无论是过表达SIRT4还是Gln剥夺均能抑制ccRCC细胞增殖，促进凋亡。