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目的 构建针对核干细胞因子(NS)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体.方法 根据GenBartk提供的NS基因AY825265 mRNA序列及siRNA设计原则设计siRNA,筛选得到126-144 nt,199-217 nt和487-505 nt 3个19 bp片段为靶序列;合成带有BamHI、XhoI酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,经过退火,将此序列克隆至载体pRNAT-U6.1中构建重组表达载体;转化DH5α,提取质粒,应用PCR技术和测序方法鉴定重组克隆.转染入食管癌EC9706细胞,检测NS基因沉默情况.结果 PCR筛选得到3个目的片段的阳性重组克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致.RT-PCR和Western blot检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低EC9706细胞中NS mRNA和蛋白水平的表达.结论 成功构建出一组针对NS基因的siRNA表达载体,为下一步NS基因的RNA干扰研究鉴定了基础. 相似文献
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全反式维甲酸诱导的食管癌细胞DNA聚合酶β的表达 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:了解食管癌细胞分化过程中DNA聚合酶β(polβ)基因的表达。方法:采用全反式维甲酸(ATRA)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、原位杂交、免疫组化和Western blot方法分别检测细胞分化和polβ基因的表达。结果:ATRA作用5d后可以诱导Eca109细胞分化。Wt—polβ和mt—polβ(截短的)基因的表达随着Eca109细胞的分化而降低。结论:ATRA可下调Eca109细胞wt-polβ和mt—polβ的表达,促使其分化。 相似文献
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Survivin反义核酸对SKOV3细胞生长及Survivin基因表达的影响 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 :观察Survivin反义核酸对人卵巢癌细胞系SKOV3的生长及Survivin基因表达的影响。方法 :应用基因重组技术 ,将在真核细胞中能稳定表达反义Survivin的pcDNA3 SVVas经脂质体LipofectamineTM2 0 0 0 介导转染人卵巢癌细胞株SKOV3,经G4 1 8筛选得到抗性克隆 (SKOV3/SVVas) ,同时以空载体pcDNA3转染SKOV3作为对照(SKOV3/neo) ;绘制细胞生长曲线 ;采用免疫组化、RT PCR和流式细胞仪检测SKOV3、SKOV3/neo及SKOV3/SVVas细胞的内源性SurvivinmRNA及蛋白的表达和凋亡细胞。结果 :与SKOV3及SKOV3/neo细胞比较 ,SKOV3/SVVas细胞增殖和代谢能力均明显降低 ,Survivin蛋白阳性表达率及mRNA相对表达量明显降低 (P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡率显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 :稳定表达的反义Survivin能够有效抑制SKOV3细胞内源性Survivin蛋白的表达 ,诱导SKOV3细胞凋亡。 相似文献
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目的:观察胃癌细胞中再生蛋白Ⅰ (Reg Ⅰ)基因第2内含子的调控功能.方法:分别从人外周血、胃癌细胞BGC823和SGC7901中提取基因组DNA,克隆Reg Ⅰ第2内含子.构建荧光素酶报告载体pGL4-Human-intron 2、pGL4-BGC823-intron 2和pGL4-SGC7901-intron 2,分别转染胃癌细胞BGC823和SGC7901,荧光检测仪检测荧光素酶活性.结果:RegⅠ基因第2内含子序列与GenBank公布的序列基本一致,但517~531的腺嘌呤A在不同来源的DNA中有差异重复.重组质粒转染胃癌细胞中的萤光素酶活性均高于对照组;转染胃癌细胞来源的intron 2重组质粒,荧光素酶活性低于转染人来源的intron 2.胃泌素孵育后,荧光素酶活性无明显改变.结论:胃癌细胞中Reg Ⅰ第2内含子具有促进基因表达的功能. 相似文献
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目的:对高盐和低盐培养条件下杜氏盐藻蛋白质组的双向电泳(2-DE)图谱进行比较分析,筛选高盐诱导蛋白并鉴定.方法:提取高盐(3.5 mol/L NaCl)和低盐(1.5 mol/L NaCl)培养条件下杜氏盐藻的总蛋白并进行2-DE,考马斯亮蓝染色后用Image-Scanner扫描仪扫描,ImageMaster 5.0... 相似文献
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目的分析肿瘤相关抗原p62在免疫诊断中的作用和价值。方法采用Cochrane系统评价方法,通过计算机检索中国学术期刊全文数据库、万方数据库、维普咨询网、中国生物医学文献数据库和PubMed、Springer、Elsevier、EBSCO外文数据库,并辅以手工检索,检索时间截止至2010年6月。获取p62用于肿瘤血清学免疫诊断的病例-对照研究共18篇文献,采用Cochrane协作网Review Manager 4.2.8软件进行Meta分析。结果以p62能否应用于肿瘤的免疫诊断为题,共纳入17项研究,包括6种不同的肿瘤类型,含1554例肿瘤患者病例和1461例正常人对照,目的均是检测p62自身抗体在肿瘤患者和正常对照中出现的例数。统计得出总的效应统计量比值比(odds ratio,OR)及其95%CI为10.74(7.25~15.90),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 Meta分析结果表明肿瘤患者血清中抗p62自身抗体的检测在免疫诊断中具有实际应用价值。 相似文献
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食管鳞癌组织中EphrinB2、半胱氨酸蛋白酶8蛋白和mRNA的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨人食管鳞癌组织中EphrinB2与半胱氨酸蛋白酶8(Caspase-8)的表达.方法:运用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测96例食管鳞癌患者的癌组织和癌旁正常组织中EphrinB2与Caspase-8的表达,采用Cox回归进行食管癌患者生存分析.结果:癌组织中Caspase-8 mRNA(△Ct)与蛋白的表达水平分别为(7.38±2.47)和(2.51±2.38)%,低于配对正常组织的(5.46±1.87)和(8.85±7.88)%(t=1.375和-22.761,P均<0.001);癌组织中EphrinB2蛋白的表达水平为(11.67±2.48)%,高于配对正常组织中的(1.71±0.60)%(t=-38.322,P<0.001).癌组织中EphrinB2与Caspase-8蛋白的表达水平相关(r=-0.340,P<0.001).COX回归分析:有家族史和Caspase-8 mRNA低表达是影响食管癌患者生存的危险因素(95%CI分别为1.990-8.547和0.152-0.788,P均<0.05).结论:人食管鳞癌组织中EphrinB2的高表达和Caspase-8的低表达可作为食管癌发生发展的评估指标. 相似文献
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