人胃黏膜蛋白质组双向电泳图谱的获得和分析

目的:建立和优化人胃黏膜组织蛋白质双向凝胶电泳技术,获得高分辨率和重复性的人胃黏膜双向电泳图谱.方法:采用双向电泳技术分离人正常胃黏膜组织总蛋白,并对其关键环节和因素,如样品处理、上样量、电泳参数、染色方法等进行一系列的优化,凝胶染色后扫描图谱,Imagemaster 6.0软件比较分析.结果:获取的人胃黏膜双向电泳图谱蛋白质斑点清晰、重复性好,主要分布在等电点pI 4~7、相对分子质量20 000~90 000范围内.结论:成功建立了人胃黏膜组织蛋白双向电泳技术,获得了分辨率和重复性较好的人胃黏膜双向电泳图谱.     

顺铂及拓扑替康对卵巢癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 :了解顺铂 (DDP)、拓扑替康 (TPT)单独及联合应用对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法 :裸鼠右侧背部皮下接种人卵巢癌SKOV3细胞 ,2 1d后分 4组治疗 ,每组 6只动物。对照组 ,腹腔注射无菌生理盐水 ;DDP组 ,腹腔注射DDP 3mg·kg-1 ;TPT组 ,腹腔注射TPT 5mg·kg-1 ;DDP +TPT组 ,腹腔注射DDP 3mg·kg-1 ,6h后腹腔注射TPT 5mg·kg-1 ;上述药物均每 4d注射 1次 ,共注射 4次 ,于实验第 39d处死裸鼠。治疗期间观察并记录各组裸鼠皮下移植瘤的生长情况 ,计算肿瘤体积、肿瘤生长抑制率 ,绘制肿瘤生长曲线。结果 :各治疗组治疗后肿瘤体积和抑瘤率与对照组相比差异均具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。与DDP及TPT组比较 ,DDP +TPT联合用药组肿瘤体积明显减小 (P <0 .0 0 1 ) ,抑瘤率明显增高 (P <0 .0 0 1 )。结论 :DDP与TPT联合用药比 2药单独应用抑制肿瘤生长的作用更强 ,二者具有协同抗癌作用     

大鼠肝细胞的分离及BRL细胞培养上清对原代肝细胞增殖的影响

目的 :研究大鼠肝细胞分离的方法及正常大鼠肝细胞来源的BRL细胞培养上清对原代大鼠肝细胞贴壁和增殖的影响。方法 :采用体外胶原酶 2步灌注法分离大鼠肝细胞 ,台盼兰染色法计算细胞数及细胞活率。以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测不同浓度的BRL细胞培养上清及含体积分数 15 %胎牛血清的普通培养液对肝细胞贴壁和增殖的影响。结果 :平均每只大鼠可获 2× 10 8个肝细胞 ,平均活力 94 .3%。用普通培养液培养肝细胞 ,肝细胞贴壁率低 ;BRL细胞培养上清能明显促进肝细胞的贴壁和生长 ,且有量效关系 (P <0 .0 5 )。结论 :用本法分离的大鼠肝细胞有较高的获取率和活力 ,BRL细胞培养上清能促进正常大鼠肝细胞的贴壁及增殖     

食管鳞癌组织中P62的表达及与P53、Rb的相互关系

目的 :探讨食管鳞癌组织中P6 2的表达及其与P5 3和Rb在食管癌发生发展中的相互关系。方法 :应用免疫组织化学方法 (SP法 ) ,检测 4 4例食管鳞癌及正常食管黏膜中P6 2、P5 3和Rb的表达水平。结果 :4 4例食管鳞癌组织中P6 2、P5 3、Rb的阳性表达率分别为 6 8.2 %、70 .5 %、4 5 .4 % ;P6 2胞核阳性为 36 .4 %、胞浆阳性为 9.1 % ,胞核胞浆同时阳性为 2 2 .7% ;P6 2细胞核、细胞浆阳性表达率与淋巴结转移情况有关 (P <0 .0 5 )。P5 3阳性表达与食管癌组织学分级、浸润深度相关 (P <0 .0 5 ) ;Rb阳性表达与浸润深度相关 (P <0 .0 1 ) ,与食管癌组织学分级、淋巴结转移情况无关 ;P6 2阳性表达与P5 3阳性表达呈正相关 (rs=0 .82 ,P <0 .0 5 ) ,而与Rb阳性表达呈负相关 (rs=- 0 .78,P <0 .0 5 )。结论 :P6 2、P5 3、Rb可能参与了食管癌的发生发展过程 ,它们的表达可作为判断食管癌恶性程度的参考指标 ,对预后评估有一定的价值     

乙型肝炎病毒核心基因转基因小鼠的建立

目的：建立乙型肝炎病毒核心基因转基因小鼠。方法：构建乙型肝炎病毒核心基因真核表达载体pcDNA3-HBc;采用显微注射法将线性化的表达载体注射至小鼠受精卵的雄性原核巾,然后将注射存活的受精卵植入假孕母鼠的输卵管;取其产10d龄子代鼠进行鉴定。结果与结论：表达载体内切酶酶切及序列分析结果与预期一致;PCR鉴定转基因阳性小鼠比例为25％(6／24)。可表达核心蛋白基因的转基因小鼠成功建立。     

非小细胞肺癌中survivin蛋白的表达及其与p53表达的关系

目的探讨非小细胞肺癌组织中survivin蛋白的表达与临床病理特征的关系及其与p53表达的相关性。方法采用免疫组化的链霉菌抗生物素过氧化酶法(Streptavidin-Peroxidase,SP)检测80例NSCLC组织和20例正常肺组织中survivin、p53蛋白表达情况。结果80例非小细胞肺癌组织中sur-vivin蛋白阳性例数49例,表达率为61.3%,在肺良性病变组织中,未阳性表达,两组比较差异有显著性(P<0.05);在III~IV期肺癌组织中survivin蛋白阳性表达率显著高于I~II期肺癌组织(P<0.05),而与组织学分型、分化程度、淋巴结转移与否无关(P>0.05);survivin、突变型p53蛋白在肺癌组织中的表达呈正相关。结论survivin蛋白表达与肺癌的TNM分期密切相关,有可能成为判断病情和评价预后的指标,survivin有望成为肺癌诊断的肿瘤标志物及基因治疗的新靶点;survivin、突变型p53蛋白在肺癌组织的协同高表达可能促使肺癌病情的恶性发展     

胃腺癌及正常胃黏膜组织蛋白质组双向电泳图谱分析

目的:对胃腺癌与配对正常胃黏膜双向电泳(2-DE)图谱进行比较分析,筛选差异表达蛋白质.方法:采用2-DE技术分离胃腺癌和正常胃黏膜组织总蛋白.银染后采用magicscan图像获取仪扫描2-DE凝胶图像,采用Imagemaster6.0凝胶图像分析软件进行分析.结果:胃腺癌和正常胃黏膜2-DE图谱上蛋白质斑点主要分布在等电点p14～7、相对分子质量20 000～90 000范围内,共有28个差异表达蛋白质,其中15个在胃腺癌组织中表达上调,13个表达下调.结论:胃腺癌与正常胃黏膜组织蛋白质组表达有差异.     

基层医疗机构医院感染管理现况调查

目的:了解基层医疗机构医院感染预防与控制现状.方法:从河南省艾滋病医疗救治重点县中随机抽取一县,对该县的31个村卫生室、11个乡卫生院进行"消毒灭菌、医院感染管理状况"问卷调查.随机抽取该县374名医务人员进行"消毒灭菌、医院感染知识"问卷调查.同时采集标本进行检测,村卫生室采集部位主要包括治疗室治疗台及治疗车台面、皮肤消毒液碘伏、酒精及消毒液容器、敷料缸等.乡卫生院采集部位主要包括治疗室、换药室、手术室、人流室、产房、皮肤消毒液、无菌包、手提式压力蒸气灭菌器等.根据河南省卫生厅医政处制订的综合考评标准,对调查村、乡从医院感染管理、教育培训、医务人员防护、重点部门管理、医疗废物管理5个方面进行综合考评.结果:将"消毒灭菌、医院感染知识"问卷调查表项目归类合并为4个领域,即消毒灭菌、医院感染预防与控制重视程度、个人防护、消毒灭菌操作和医疗废物处理,该县4个领域的得分分别为(53.25±2.81),(47.72±2.53),(41.54±1.95)和(20.19±1.08),4个领域得分差异有统计学意义(F=16.259,P<0.05).对"消毒灭菌、医院感染管理状况"调查表各项目进行评分,满分50分,村卫生室得分(21.00±1.02)分,乡卫生院得分(37.00±1.35)分.2者比较,差异有统计学意义(t=44.915,P<0.05).村卫生室碘伏、酒精消毒合格率为100%.乡卫生院皮肤消毒液(碘伏、酒精)、无菌包消毒合格率达到100%.其余部位采样检测结果不理想.村卫生室综合考评得分率70%～90%,乡卫生院得分率50%～60%.结论:重视基层医院感染工作,对基层医疗机构医务人员进行医院感染知识的教育培训至关重要,应成为医院感染管理的重要内容之一.     

选择性增菌在产TEM型ESBL菌株痰标本检测中的应用

目的:探索选择性增菌在痰标本TEM型ESBL菌株痰标本检测中应用的可行性.方法:从郑州大学第一附属医院30份不重复的痰标本中分离出TEM型ESBLs菌株,采用LB液体培养基进行增菌培养,应用氨苄青霉素(终质量浓度为100 mg/L)进行选择抑菌,采用酶抑制剂增强试验及PCR技术进行ESBLs确证.结果:酶抑制剂增强试验中头孢噻肟与头孢噻肟/克拉维酸抑菌环直径差大于5 mm;PCR扩增产物在约900 bp处有明显条带.结论:选择性增菌方法简单、快速,准确,可用于痰标本中TEM型ESBL菌株的检测.     

食管鳞状细胞癌组织中B7-H1蛋白和mRNA的表达

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中B7-H1蛋白和mRNA的表达及其与肿瘤转移的关系.方法:应用免疫组织化学技术和RT-PCR技术检测54例食管鳞状细胞癌组织以及8例癌旁正常食管黏膜组织中B7-H1蛋白和mRNA的表达,分析B7-H1的表达与食管鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系.结果:食管鳞状细胞癌组织中B7-H1蛋白和mRNA的阳性表达率分别为48.2%和31.5%,而癌旁正常食管黏膜组织中无B7-H1蛋白和mRNA的表达.B7-H1蛋白和mRNA的阳性表达率与食管鳞状细胞癌的浸润深度、淋巴结转移、远处转移及pTNM分期有关(P<0.05).结论:检测食管鳞状细胞癌组织中B7-H1的表达对判断其浸润、转移及病情进展有一定的价值.