食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化检测

目的检测食管癌组织中hMSH2基因启动子区甲基化状态,探讨与食管癌发生、发展的关系。方法32例食管癌患者术前均未接受放疗、化疗等其他治疗,手术切除后30min内,在癌组织及正常食管黏膜组织各取约1.0cm×1.0cm×1.0cm大小的组织块标本,立即储存于-80℃冰箱中,冻存备提DNA。采用甲基化特异PCR法(MSP法)检测食管癌及正常食管黏膜组织中错配修复基因hMSH2启动子区甲基化的表达。结果32例食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率为34.4%(11/32),正常食管黏膜组织未发现甲基化,两组甲基化阳性率相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。高龄患者(≥70岁)癌组织中启动子区hMSH2甲基化发生率(85.7%)明显高于较低龄患者(<70岁,20.0%;P<0.05)。病理组织学Ⅲ~Ⅳ级食管癌组织中,hMSH2启动子区甲基化发生率(70.0%)明显高于Ⅰ~Ⅱ级(18.2%,P<0.05)。结论食管癌组织中,hMSH2基因启动子区甲基化与年龄和病理组织学分级可能有关。     

拓扑替康对HL-60细胞增殖的抑制作用

目的：探讨拓扑替康（topotecan，TPT）对人髓系白血病细胞HL-60的增殖抑制作用。方法：采用四甲基偶氮唑盐光吸收法（MTT法）检测不同浓度的TPT（0．05μmol／L、0．10μmol／L、0．15μmol／L、0．20μmol／L及空白对照组）作用HL．60细胞后4h、8h、12h、16h的增殖情况，计算各组细胞的增殖抑制率，并找出TPT作用HL-60细胞的最适时间和最适浓度。倒置显微镜观察细胞生长状念及形态学改变。结果：TPT作用HL-60细胞12h后细胞集落减少，细胞中颗粒及碎片增多。双因素疗蓐分析显示：不同浓度TPT作用不同时间后，对HL-60细胞生长抑制率差异有统计学意义（F时间=312．24，P〈0．05；F性别=1110．35，P〈0．05）。同一时间点不同浓度的TPT对HL-60细胞的抑制作用随浓度的升高而增强，同一浓度TPT在不同时间点对HL-60细胞的抑制作用随时间的延长而增强，其作用的最适时间和最适浓度分别为12h和0．15μmol／L。结论：拓扑替康能抑制HL-60细胞的增殖，且其抑制作用具有时间和浓度依赖性。     

产超广谱β-内酰胺酶菌300株去巯基型基因检测

超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)的产生是革兰阴性杆菌耐药的重要原因之一.SHV是去巯基的英文缩写,SHV型ESBLs可以水解β-内酰胺类抗生素的巯基,主要引起产ESBLs菌对青霉素类抗生素耐药[1-3].为了解本院产ESBLs菌株的SHV型基因携带情况和临床分布特点,作者应用PCR技术对本院临床标本分离的300株产ESBLs菌株进行SHV型基因检测,对其院内流行情况进行调查.     

凋亡抑制蛋白Survivin、bcl-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨凋亡抑制蛋白Survivin、bcl-2蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达与不同临床病理特征的关系及二者在肺癌发生过程中可能存在的相关性。方法:采用免疫组化法的链霉菌抗生物素过氧化酶(S-P)法检测80例NSCLC组织和20例正常肺组织中Survivin、bcl-2蛋白表达情况。结果:非小细胞肺癌组织中Survivin、bcl-2蛋白阳性表达率分别为61.3%、50%,而在肺良性病变组织中阳性表达率分别为0%、10%,两者在两组中的表达均有显著性差异(P<0.05);Survivin蛋白在～期肺癌组织中阳性表达率72.0%显著高于I～II期肺癌组织的43.3%(P<0.05),bcl-2蛋白在鳞癌组的阳性表达率62.2%高于腺癌组的34.3%(P<0.05);Survivin、bcl-2蛋白在肺癌组织中的表达呈正相关关系。结论:Survivin蛋白表达与肺癌的TNM分期密切相关,Survivin、bcl-2可以作为判断病情和评价预后的指标。     

羊心室心肌细胞动力学观察

目的:探讨成体羊心室心肌细胞增殖与死亡的方式及规律.方法:12只山羊取心脏后,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成体羊心室心肌细胞,包括工作心肌细胞和传导心肌细胞,均可见明显的无丝分裂相和细胞死亡特征.结论:正常成体羊心室心肌细胞存在增生和死亡的动力学过程,且羊心室心肌细胞增殖的主要方式是无丝分裂.     

成人和成体羊心脏心内膜的组织动力学观察

目的:观察并比较正常成体羊和人心脏心内膜细胞,探讨心内膜的一般组织动力学过程.方法:取12只山羊和6例人尸检心脏组织标本,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成体羊与成人心脏均发现内皮细胞无丝分裂相.内膜细胞来自成血-血管内皮干细胞归巢和内化及内皮细胞增生迁移.内膜细胞可以演化形成心肌细胞.结论:正常成体心脏一般组织动力学特征是内膜细胞以多种方式来源于成血-血管干细胞,内膜细胞可通过多种途径演化为心肌细胞.     

成人和成体羊心脏组织动力学比较

目的:比较正常成人和成体羊心脏的组织动力学过程,探讨心脏组织演化的规律.方法:取12只山羊和6例人尸检心脏组织标本及羊心脏传导系统标本,常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜观察.结果:正常成人与成体羊心脏组织演化均包括心内膜-心肌演化体系、房室间区-心肌演化体系和肌层内心肌演化体系,但在羊心内膜-心肌演化体系中的优势演化途径是心内膜细胞-心肌生成单位-心肌细胞演化系,人的优势演化途径是心内膜细胞-非心肌生成单位-心肌细胞演化系;在肌层内心肌演化体系中有细胞重建的重要演化方式.结论:正常成人和成体羊心肌演化总体模式基本相似,但各自具有不同优势演化途径.     

ret基因真核表达载体的构建及其瞬时表达

目的:构建ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET,为制作转基因动物提供实验基础.方法:利用HandⅢ及NotⅠ限制性核酸内切酶,消化pSK-RET及pcDNA3.0空质粒,获得目的基因及相应载体;通过T4连接酶重组DNA;通过氨苄青霉素(Amp)抗性、酶切鉴定及DNA序列分析,确定阳性克隆.通过脂质体包裹转染NIH3T3细胞,采用Western blot方法检测载体的瞬时表达状况.结果:Amp抗性筛选阳性;酶切片段电泳分析在5 400 bp及3 300 bp处有明显条带;DNA序列分析提示重组基因与实际序列一致;Western blot结果显示175 000处有明显条带.结论:ret基因真核表达载体pcDNA3.0-RET构建成功,并可瞬时表达.     

非小细胞肺癌中PTEN与微血管生成的检测

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中PTEN的表达与肿瘤微血管生成的关系。方法采用免疫组化SP法分别检测75例肺癌组织和20例正常肺组织PTEN蛋白情况,以及不同PTEN表达组的肺癌组织中微血管密度(MVD)值的变化。结果肺癌组织中PTEN的阳性表达率为48%(36/75),低于其在正常肺组织中的阳性表达率95%(19/20)(P<0.05);PTEN阳性组MVD值34.53±10.26低于PTEN阴性组的MVD值49.40±12.54(P<0.05)。结论肺癌中PTEN表达的减低可能促使微血管密度增加,导致肺癌预后不良。     

食管鳞癌组织中EphrinB2、半胱氨酸蛋白酶8蛋白和mRNA的表达

目的:探讨人食管鳞癌组织中EphrinB2与半胱氨酸蛋白酶8(Caspase-8)的表达.方法:运用实时荧光定量PCR和免疫组化方法检测96例食管鳞癌患者的癌组织和癌旁正常组织中EphrinB2与Caspase-8的表达,采用Cox回归进行食管癌患者生存分析.结果:癌组织中Caspase-8 mRNA(△Ct)与蛋白的表达水平分别为(7.38±2.47)和(2.51±2.38)%,低于配对正常组织的(5.46±1.87)和(8.85±7.88)%(t=1.375和-22.761,P均＜0.001);癌组织中EphrinB2蛋白的表达水平为(11.67±2.48)%,高于配对正常组织中的(1.71±0.60)%(t=-38.322,P＜0.001).癌组织中EphrinB2与Caspase-8蛋白的表达水平相关(r=-0.340,P＜0.001).COX回归分析:有家族史和Caspase-8 mRNA低表达是影响食管癌患者生存的危险因素(95%CI分别为1.990-8.547和0.152-0.788,P均＜0.05).结论:人食管鳞癌组织中EphrinB2的高表达和Caspase-8的低表达可作为食管癌发生发展的评估指标.