硒和锌对小鼠成釉细胞DNA损伤的作用研究

目的 探讨硒和锌对小鼠成釉细胞DNA损伤的保护作用.方法 以2.50、5.00、10.00 μmol/L亚硒酸钠用于小鼠成釉细胞为硒作用组,以5.00、10.00、20.00 μmol/L硫酸锌作用于小鼠成釉细胞为锌作用组.细胞作用24h后,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA单链断裂情况.结果 与对照组比较,2.50和5.00 μmol/L亚硒酸钠作用组小鼠成釉细胞DNA损伤的指标尾长、Olive尾矩、尾DNA％和尾长/头长值均明显下降(P＜0.05);10.00 μmol/L亚硒酸钠作用组小鼠成釉细胞的尾长、尾/头长比值较对照组均显著性降低(P＜0.05).与对照组比较,5.00、10.00和20.00 μmol/L硫酸锌作用组可使小鼠成釉细胞尾长和Olive尾距明显下降,差异均有统计学意义(P ＜0.05);5.00和10.00 μmol/L硫酸锌作用组尾长/头长值明显下降(P＜0.05).以Olive尾矩为观察指标,2.50和5.00 μmol/L亚硒酸钠的保护作用要优于10.00μmo1/L亚硒酸钠,以2.50 μmol/L亚硒酸钠保护作用相对较好;10.00和20.00 μmol/L硫酸锌的保护作用要优于5.00μmol/L硫酸锌,以10.00 μmol/L硫酸锌保护作用相对较好.结论 2.50～10.0 μmol/L的亚硒酸钠和5.00～20.00 μmol/L硫酸锌均对成釉细胞DNA损伤具有一定的保护作用,其中2.50 μmol/L亚硒酸钠和10.00 μmol/L硫酸锌的相对保护作用较好.     

枸杞多糖对氟诱导小鼠成釉细胞DNA损伤影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对氟化钠(NaF)致小鼠成釉细胞DNA损伤的影响.方法 离体培养小鼠成釉细胞,2个处理因素为NaF染毒(含浓度为0.00、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L 6个水平)和LBP预处理(含质量浓度为0.00、100.00、200.00、400.00 mg/L 4个水平),6×4析因设计,2因素各水平全面组合共分24组,以浓度为0.00mmol/L NaF+质量浓度为0.00 mg/L LBP组为对照组.小鼠成釉细胞经LBP预处理24 h后,再给予NaF染毒,24 h后收获细胞,采用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况.结果 分别以0.50、1.00、2.00、4.00 mmol/L NaF单独染毒的小鼠成釉细胞尾长、Olive尾距、尾部DNA％、尾长/头长值均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).析因设计方差分析结果显示,LBP和NaF存在交互作用,差异均有统计学意义(P ＜0.001).经质量浓度分别为100.00、200.00、400.00mg/L的LBP预处理后,在不同NaF染毒剂量的条件下,多数尾长、Olive尾距、尾部DNA％、尾长/头长值等DNA损伤指标值均低于相应剂量NaF单独染毒时的指标值(P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).结论 一定剂量NaF可致小鼠成釉细胞DNA损伤,LBP对氟诱导的小鼠成釉细胞DNA损伤起到一定的保护作用.     

三种方式染毒丙烯酰胺对雄性小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响

目的 研究腹腔注射、灌胃、皮肤染毒丙烯酰胺(AA)对小鼠睾丸细胞DNA损伤的影响.方法 将24只清洁级健康雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为空白对照组、腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组,每组6只.染毒剂量为25mg/kg,每天1次,连续染毒5 d.首次染毒后第6天称体重和睾丸重,计算睾丸系数.采用单细胞凝胶电泳实验对彗星细胞的尾长、尾部DNA%、尾矩(tail moment,TM)、Olive尾矩(olive tail moment,OTM)进行检测.结果 染毒后腹腔染毒组和灌胃染毒组小鼠体重均低于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).与空白对照组比较,腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组小鼠的睾丸重量及其脏器系数均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与空白对照组比较,腹腔染毒组、灌胃染毒组和皮肤染毒组小鼠睾丸细胞DNA的尾长、尾部DNA%、尾矩、Olive尾矩均较高,差别有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).各染毒组两两比较发现,睾丸细胞DNA的尾长、尾部DNA%、尾矩、Olive尾矩间差异均有统计学意义(P＜0.05),均以灌胃染毒组最高,腹腔染毒组次之,皮肤染毒组最低.结论 丙烯酰胺可致雄性小鼠睾丸细胞产生DNA损伤,且以灌胃染毒方式产生的毒性作用最为敏感.     

低剂量纳米二氧化钛和乙酸铅联合诱导人胚肝细胞DNA损伤与修复作用

目的研究纳米二氧化钛（titanium dioxide nanoparticles,nano-TiO₂）与乙酸铅（PbAc）联合染毒对人胚肝细胞（L-02）的DNA损伤及修复作用。方法将L-02细胞分别以1μg/ml乙酸铅溶液和10、1、0.1、0.01、0.001μg/ml纳米二氧化钛溶液以及1μg/ml乙酸铅+0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml纳米二氧化钛溶液处理24 h,同时,以1‰二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）为阴性对照,30μmol/L H₂O₂为阳性对照。测定L-02细胞DNA的Olive尾矩、DNA加合物8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）和DNA损伤修复酶8-羟基鸟苷DNA糖苷酶同源物1（OGG1）的水平。结果与阴性对照组比较,1μg/ml乙酸铅+1、10μg/ml纳米二氧化钛组L02细胞DNA的Olive尾矩和8-OHdG生成量明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与1μg/ml乙酸铅单独染毒组比较,1μg/ml乙酸铅+10μg/ml纳米二氧化钛联合染毒组L02细胞DNA的Olive尾矩和8-OHdG生成量明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与阴性对照组和1μg/ml乙酸铅单独染毒组比较,1μg/ml乙酸铅+0.001～1μg/ml纳米二氧化钛组L02细胞OGG1的表达水平均明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。随着乙酸铅的添加以及纳米二氧化钛染毒浓度的升高,L02细胞DNA的Olive尾矩和8-OhdG生成量均呈上升趋势,OGG1的表达水平呈下降趋势。乙酸铅和纳米二氧化钛对DNA损伤修复蛋白OGG1的表达存在协同作用,但对Olive尾矩水平和8-OHdG生成量不存在交互作用。结论低浓度乙酸铅和纳米二氧化钛联合暴露可使L02细胞DNA损伤增加,OGG1应激性增高以修复DNA损伤,但持续增加的DNA损伤会使OGG1水平下降。     

多氯联苯对苯并[a]芘致HepG2细胞DNA损伤作用的影响

目的观察多氯联苯(PCBs)153和苯并[a]芘(B[a]P)单独及联合处理对人肝肿瘤细胞HepG2的DNA损伤作用。方法以HepG2细胞为靶细胞,以DMSO为溶剂对照,PCB153设4个剂量组:0.1、1、10和100μmol/L,B[a]P设4个剂量组:12.5、25、50和100μmol/L。应用单细胞凝胶电泳试验检测PCB153和B[a]P单独和联合处理对HepG2细胞DNA损伤的影响;通过荧光分光光度法分别测定PCB153对HepG2细胞CYP1A1(EROD)、CYP2B1(PROD)酶活性的影响。结果与溶剂对照相比,B[a]P各剂量组Olive尾矩均显著增加(P<0.01);而PCB153各剂量组均不引起Olive尾矩显著增加,与50μmol/LB[a]P单独作用相比,0.1~10μmol/L的PCB153与50μmol/LB[a]P联合作用可使Olive尾矩增加,但只有10μmol/L PCB153与50μmol/LB[a]P联合作用极显著增加Olive尾矩(P<0.01);100μmol/L PCB153与50μmol/LB[a]P联合作用与50μmol/LB[a]P单独作用相比,Olive尾矩则显著降低(P<0.01)。酶活性分析表明,PCB153各剂量组均可诱导EROD、PROD活性显著增加,差异有统计学意义。结论PCB153在一定浓度范围内使B[a]P诱导的HepG2细胞DNA损伤作用显著增强,可能与其诱导的CYP1A1、CYP2B1酶活性升高有关。     

低剂量辐射联合环磷酰胺对荷瘤鼠DNA损伤的影响

目的研究低剂量辐射联合环磷酰胺对荷瘤鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的影响。方法荷瘤鼠随机分为对照组、CTX化疗组(CTX组,40mg/kg)和低剂量照射联合CTX组(LDR CTX组),环磷酰胺给予前6h行5cGy的低剂量照射,连续3 d。采用中性单细胞凝胶电泳检测低剂量辐射联合化疗后对荷瘤鼠外周血淋巴细胞DNA双链断裂的情况。观察了尾长、彗星长、头DNA%、尾DNA%、尾矩、Olive尾矩等指标的变化。结果LDR CTX组其尾长、彗星长、头DNA%、尾DNA%、尾矩、Olive尾矩均比CTX组明显减小,各项指标差异均有显著性(P<0.05)。结论荷瘤鼠预先接受低剂量全身照射能减轻环磷酰胺治疗后外周血淋巴细胞DNA损伤。     

2,2'',4,4''-四溴联苯醚和2,2'',4,4'',5-五氯联苯联合作用的细胞遗传毒性

目的 研究2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)和2,2',4,4',5-五氯联苯(2,2',4,4',5-hexachlorobiphenyl,PCB153)联合作用的细胞遗传毒性.方法 体外培养的SH-SY5Y细胞暴露于2、4、8mol/LPBDE-47或(和)5mol/LPCB153 24 h后,采用噻唑盐(MTT)、单细胞凝胶电泳、胞质分裂阻滞以及SDS-KCl沉淀法分别检测细胞活力、DNA损伤、微核和DNA-蛋白交联(DPC)形成情况.结果 与单独PBDE-47染毒组比较,各联合染毒组核分裂指数(NDI)明显下降,微核率、微核细胞率和DPC明显增加,Olive尾矩增大,尾部DNA百分率升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).≥4 mol/L PBDE-47+5 mol/L PCB153联合染毒细胞存活率明显低于相应剂量的PBDE-47和PCB153单独染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).≥2mol/LPBDE-47+5mol/L PCB153联合染毒组微核率、微核细胞率、DPC均明显高于PCB153单独染毒组;≥4 mol/L PBDE-47+5 mol/L PCB153联合染毒组细胞NDI低于PCB153单独染毒组;Olive尾矩和尾部DNA百分率仅8 μmol/L PBDE-47+5μmol/LPCB153联合染毒组高于PCB153单独染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05).析因分析显示,两者在抑制细胞存活、诱导DNA损伤、微核和DPC形成等方面存在交互作用,差异有统计学意义(P＜0.01),表现为协同作用方式.结论 一定剂量的PBDE-47与PCB153联合可抑制细胞存活,诱导DNA损伤、微核和DPC形成,呈现细胞遗传毒性,两者联合作用类型为协同作用.     

PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞DNA损伤和修复基因表达的影响

目的探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞DNA损伤及其修复基因表达的影响。方法设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/LPBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/L PCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h。用单细胞凝胶电泳试验测定DNA损伤情况,用RealTime PCR检测DNA损伤修复酶XRCC1及XRCC3mRNA表达情况。结果中、高剂量单独染毒组和中、高剂量联合染毒组细胞尾部DNA百分率、Olive尾距均显著高于对照组(P<0.05),且呈现明显的剂量-效应关系,中、高联合染毒组细胞尾部DNA百分率、Olive尾距均显著高于相应的PBDE-47或PCB153单独染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后其细胞尾部DNA百分率及Olive尾距均明显下降(P<0.05),高剂量联合组对细胞DNA损伤具有交互作用(F=23.74,P<0.01);高剂量染毒组及中、高剂量联合染毒组XRCC1mRNA表达与对照组相比均明显下降(P<0.05),加入抗氧化剂后其XRCC1mRNA表达上升(P<0.05);高剂量单独和联合染毒组XRCC3mRNA表达与对照组相比均明显上升(P<0.05),加入抗氧化剂后可使XRCC3mRNA表达明显下降(P<0.05)。相关分析结果表明,细胞DNA损伤与XRCC1mRNA的表达呈负相关,与XRCC3mRNA的表达呈正相关(r分别为0.74,0.76,P<0.05)。结论一定剂量的PBDE-47可导致DNA损伤和影响DNA损伤修复基因的表达,PCB153可增强PBDE-47对细胞DNA的损伤作用,氧化应激可能在PBDE-47致DNA损伤过程中发挥了重要作用。     

低功率微波致雄性小鼠生殖细胞DNA损伤作用

目的探讨低功率微波对小鼠雄性生殖细胞DNA的损伤作用。方法选择清洁级昆明种雄性小鼠40只,随机分为1个对照组和3个辐照组,每组10只。微波辐射源平均功密度为250μW/cm2,频率为900 MHz的连续波,全身24 h暴露。分别于照射后5,10,15 d处死小鼠,观察小鼠睾丸细胞拖尾率、尾长、尾部DNA%和Olive尾矩(OTM)等。结果微波辐射连续照射使小鼠睾丸细胞拖尾率、尾长、尾部DNA%和OTM明显升高,照射后15 d拖尾率达45.8%,尾长、尾部DNA%和Olive尾矩分别为(33.81±16.87)μm,(33.92±20.32)%和(11.08±8.54),与对照组比较差异均有统计学意义(P0.01)。结论连续微波辐射对雄性小鼠生殖细胞DNA有损伤作用,具有时间效应关系。     

DNA修复抑制状态下苯并（a）芘对人胚肺成纤维细胞的DNA损伤作用

目的研究DNA修复抑制状态下苯并(a)芘[B(a)P]对人胚肺成纤维细胞(HELF)的DNA损伤情况,探讨DNA修复机制在外源性化学致癌物诱导真核细胞DNA损伤中的作用。方法代谢活化条件下,以阿糖胞苷(ara-C,0、100μmol/L)与B(a)P(0、10、20、50μmol/L)按2×4联合染毒2h,通过彗星试验观察不同染毒条件下HELF细胞的DNA损伤情况。同时设阴性对照组(0.1%DMSO)和阳性对照组(10μmol/LK2CrO7)。结果与阴性对照组比较,B(a)P各剂量组的HELF的拖尾率、Olive尾矩随剂量增加而显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。100μmol/Lara-C单独染毒组与阴性对照组比较,拖尾率、Olive尾矩升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。B(a)P ara-C组与相应剂量的B(a)P组比较,其拖尾率、Olive尾矩升高,差异有统计学意义(P<0.01)。析因分析表明,ara-C与B(a)P诱导HELF的DNA损伤存在交互作用(F=3.219,P=0.024)。ara-C可增强B(a)P对HELF的DNA损伤作用。结论DNA修复抑制在外源性化学致癌物诱导真核细胞DNA损伤中存在重要作用。