基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多种成分定量测定研究

目的建立基于超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱的益心舒片中多成分(绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮Ⅱ_A)的定量分析方法。方法采用BEH C_(18)色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.2 m L/min;质谱采用ESI离子源,平行反应监测(PRM)的扫描方式进行检测。结果在优化的色谱质谱条件下,绿原酸、芦丁、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、欧当归内酯A、丹参酮Ⅱ_A分别在0.3～3.0、0.000 5～0.005 0、0.01～0.10、0.04～0.40、0.1～1.0、5.0～50.0、0.2～2.0、0.1～1.0、0.1～1.0、0.004～0.040、5.0～50.0μg/m L线性关系良好(r≥0.999 5);精密度、重复性及稳定性良好;加样回收率在99%～102%,RSD均小于3%;本研究所测成分在各批次样品中的质量分数依次为绿原酸217.80～502.25μg/g、芦丁0.50～0.59μg/g、咖啡酸8.45～13.54μg/g、阿魏酸2.61～3.56μg/g、迷迭香酸66.70～188.56μg/g、丹酚酸B 4 002.53～8 793.80μg/g、丹酚酸A 158.04～321.65μg/g、丹参酮Ⅰ 127.72～612.48μg/g、隐丹参酮75.56～285.70μg/g、欧当归内酯A 2.68～3.98μg/g、丹参酮Ⅱ_A 2 921.86～6 085.88μg/g。结论本实验建立的方法灵敏度高且准确性好,方法学考察结果符合测定要求,可用于益心舒片中多种活性成分的快速测定;并为其质量评价提供新的科学依据和参考。     

基于UPLC-ESI-Orbitrap-MS技术对金钗石斛生物碱的分析

目的:通过UPLC-ESI-Orbitrap-MS技术对金钗石斛生物碱的主要化学成分进行分析。方法:采用Thermo Q Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱-色谱联用系统分析,以Hypersil Gold C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.9μm)为固定相,流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~2 min,5%B,2~15 min,5%~95%B,15~17 min,95%B),流速0.3 m L·min~(-1),柱温40℃,进样量2μL;质谱条件采用电喷雾离子化(ESI)方式,在正离子模式下,以full scan/targeted-dd MS2扫描模式检测,研究金钗石斛生物碱的主要化学成分。结果:通过与对照品比对、结合参考文献,分析多级质谱数据,根据化学成分的质谱碎片,推测色谱峰对应的化学结构,共归属8种倍半萜类金钗石斛生物碱,分别是石斛碱(dendrobine),mubironine B,石斛氨碱(dendramine),石斛醚碱(dendroxine),石斛酮碱(nobilonine),6-羟基金石斛碱(6-hydroxynobiline),N-异戊烯基石斛碱(N-isopentenyldendrobinium),N-异戊烯基-6-羟基石斛碱(N-isopentenyl-6-hydroxydendroxinium)。结论:建立了金钗石斛倍半萜类生物碱的主要化学成分的分析方法,为金钗石斛药材的鉴别及质量控制提供了科学依据。     

驻极体静电场对巨噬细胞迁移能力的影响

目的 探讨驻极体产生的静电场对巨噬细胞迁移能力的影响.方法 常温下利用低温等离子体放电法(栅控恒压电晕放电)制备得-2000 V聚丙烯驻极体,借助常规等温表面电位衰减测量方法研究驻极体在储存和实验条件下的电荷储存稳定性.用紫外线消毒后的驻极体作用于对数生长期的小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞),采用细胞划痕实验、Transwell细胞实验、荧光探针示踪法研究在驻极体静电场作用下细胞的迁移和形态变化.结果 -2000 V驻极体在常温、常湿条件下放置14 d时其表面电位稳定在初始值的70％,置于细胞培养箱28 h后其表面电位与0 h时相比差异无统计学意义(P>0.05).细胞划痕实验结果显示,驻极体静电场作用28 h时RAW264.7细胞向划痕区迁移、增殖能力增强,划痕面积减小.Transwell实验结果显示,驻极体静电场作用12和24 h时跨膜细胞数均较对照组增加(P均<0.01).荧光探针示踪实验结果显示,驻极体静电场作用下RAW264.7细胞体积变大,发生延展,褶皱增多,生出板状伪足、丝状伪足等突足结构.结论 制备的-2000 V驻极体可在体外提供稳定的静电场并持续作用于细胞,其静电场促进巨噬细胞体积变大、发生延展、褶皱增多并生出板状伪足和丝状伪足等突足结构,增强了巨噬细胞的迁移能力.     

载人航天空间辐射主动防护方法

近地轨道短期载人航天飞行期间,由于存在地球磁场的保护,舱内航天员受到的空间辐射剂量处于可接受水平,适当的质量厚度屏蔽就可以确保航天员的空间辐射安全。星际飞行中的主要辐射是银河宇宙辐射和随机发生的太阳质子事件。由于缺少了地球磁场的保护,质量厚度屏蔽方法已经不能满足空间辐射防护的需要,必须寻找新的技术和方法解决该问题。本文介绍了国际上主要研究的三种载人航天主动防护方法:静电场防护,等离子体防护和磁场(包括约束磁场与非约束磁场)防护,并分别对它们的防护原理进行了阐述。     

UHPLC-Q-Orbitrap HRMS快速鉴定羊红膻药材的化学成分

目的:应用超高液相色谱四级杆-静电场轨道肼高分辨质谱联用(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,快速识别与鉴定羊红膻药材中主要化学成分。方法:采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm),流动相0. 1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱。质谱采用ESI源,负离子一级全扫描-数据依赖性二级质谱扫描(MS2)模式采集数据。通过高分辨质谱数据解析,并结合对照品数据和相关文献对羊红膻药材中的化学成分进行识别和鉴定。结果:通过精确相对分子质量和二级碎片离子分析,并结合对照品确认、质谱裂解规律和相关文献检索,共鉴定29个化合物,包括绿原酸类化合物19个,黄酮类7个,小分子有机酸3个,其中除木犀草素葡萄糖醛酸苷和芹菜素葡萄糖醛酸苷外,其余27个化合物为首次从该药材中发现。结论:建立的UHPLC-Q-Orbitrap HRMS可快速鉴定羊红膻药材中的化学成分,研究结果为其药效物质基础、质量控制以及临床应用等研究提供了科学的依据。     

UHPLC-Q-Orbitrap HRMS法分析精制冠心软胶囊化学成分

目的建立一种对中药制剂精制冠心软胶囊中复杂化学成分快速、高效的鉴定分析方法,为系统研究其化学组成提供基础数据。方法应用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术对精制冠心软胶囊中的化学成分进行鉴定分析。通过多级离子碎片信息与对照品比对,结合文献数据进行准确定性。结果共鉴定出精制冠心软胶囊中43种化学成分,主要包括黄酮类、苯酞类、有机酸类、醌类及其他等。结论本方法可系统、准确、高效鉴定精制冠心软胶囊中化学组成,为其物质基础和质量控制研究提供科学理论依据。     

宁泌泰胶囊联合坦索罗辛治疗良性前列腺增生症的临床研究

目的 系统研究藤黄健骨胶囊的主要化学成分,并探讨其发挥药效的主要作用机制,为其药效物质研究提供一定的参考依据。方法 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）对藤黄健骨胶囊的主要化学成分进行全面分析,根据化合物的一级、二级质谱信息,并与对照品或参考文献进行比对,以实现对药物的化学信息进行快速识别。在此基础上,采用BAT-MAN-TCM数据库对鉴定得到的化学成分进行靶点预测,进一步通过DAVID数据库进行KEGG通路注释分析和GO富集分析,初步筛选出药物的主要药效物质,并探讨其作用机制。结果 从藤黄健骨胶囊中共鉴定出34种化学成分,“成分-靶点”网络分析表明药物中的重要成分山柰酚、大豆苷元、熊果酸、刺芒柄花素和豆甾醇等可作用于Bcl-2、BAX、AKt、PPARG、PTGS1、PTGS2、TNF、IL6、F7及IL1B等关键靶点,结果分析表明破骨细胞分化信号通路、NF-κB信号通路、PI3K-Akt信号通路、肾细胞信号通路以及血小板激活等可能是其发挥壮骨健骨、补肾活血和解痉止痛治疗作用的主要途径。结论 采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS高分辨质谱分析结合网络药理学的方法,初步明确了藤黄健骨胶囊的化学组成及潜在作用机制,为筛选其药效成分及深入阐明作用机制提供了科学的理论依据。     

仲景炮附子对慢性心力衰竭的治疗作用及机制研究

目的 研究仲景炮附子Aconiti Lateralis Radix Preparata对慢性心力衰竭（CHF）的治疗作用,并采用超高效液相色谱四级杆静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-QE-Orbitrap-MS）测定仲景炮附子水煎液的成分,结合网络药理学探究其治疗CHF的作用机制。方法 采用ip盐酸阿霉素构建大鼠CHF模型,ig给予仲景炮附子水煎液（3.3 g·kg^-1）16d后,试剂盒法检测血清脑钠素（BNP）含量、心肌组织Ca²⁺-ATP酶和Na⁺,K⁺-ATP酶活性,苏木素-伊红（HE）染色后镜下观察左心室组织病理学形态变化。采用UPLC-QE-Orbitrap-MS测定仲景炮附子水煎液的成分,借助Swiss Target Prediction、DrugBank、Gene Cards、OMIM、TTD等平台预测仲景炮附子治疗CHF的作用靶点,利用Cytoscape软件构建相关作用网络,并对核心基因进行基因本体论（GO）功能富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现稀便、腹水、体质量减轻等现象;血清BNP水平显著升高（P<0.01）;Ca²⁺-ATP酶、Na⁺,K⁺-ATP酶活力均有降低趋势;左心室心肌组织切片出现明显的心肌纤维断裂,心肌间隙增宽,出现部分空泡变性等病理变化。与模型组比较,仲景炮附子水煎液组大鼠稀便情况得到一定程度改善,腹水和体型消瘦情况改善不明显;BNP水平显著降低（P<0.05）;Ca²⁺-ATP酶、Na⁺,K⁺-ATP酶活力均有升高趋势;左心室组织病理学形态有明显改善。采用UPLC-QE-Orbitrap-MS共鉴定出仲景炮附子水煎液主要成分52个。通过网络药理学预测得到仲景炮附子治疗CHF活性成分43个,活性成分靶点472个,CHF疾病靶点1063个,活性成分与疾病交集靶点68个;网络分析结果表明,仲景炮附子可能通过作用于信号转导与转录激活子3（STAT3）、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α（PIK3CA）、MAPK1等关键靶点发挥抗CHF作用,涉及到RAS相关蛋白1（Rap1）、磷脂酰肌醇3''-激酶（PI3K）-蛋白激酶B （Akt）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号通路。结论 仲景炮附子对阿霉素诱导的慢CHF有一定的治疗作用,可通过多成分、多靶点、多途径发挥作用。     

高压微胶囊成型装置制备用于成囊的海藻酸钙胶珠

利用高压微胶囊成型装置进行了制备用于成囊的海藻酸钙胶珠的试验研究 ,从而为用于药物控制释放的聚精氨酸基微胶囊的制备提供基础制备参数。将海藻酸钠溶液经试验装置滴入氯化钙溶液中固定化成海藻酸钙凝胶珠 ,考察了海藻酸钠浓度对制得的胶珠性能的影响及推进速度、针头内径、电压等对制得的胶珠直径的影响。得到较佳的海藻酸钠浓度为1.8% (W /V) ,发现推进速度提高 ,胶珠直径增大 :针头内径越大 ,胶珠直径越大 ;电压增大 ,胶珠的直径先减少后增大 ;不同针头内径制备出胶珠的平均直径最小时所对应的电压也随针头内径的增大而增大     

5,7-二甲氧基香豆素和6,7-二甲氧基香豆素在大鼠体内的代谢产物鉴定与代谢途径分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）技术对5,7-二甲氧基香豆素和6,7-二甲氧基香豆素在大鼠血浆,组织（心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠）,尿液和粪便中的代谢产物进行鉴定分析,并推测其在大鼠体内的代谢途径。方法 雄性SD大鼠ig给予5,7-二甲氧基香豆素和6,7-二甲氧基香豆素（100 mg/kg）,收集血浆、组织、尿液以及粪便样品。样品处理后,采用Thermo Scientific Accucore^TM C₁₈色谱柱（100 mm×3 mm,2.6 μm）,以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相梯度洗脱,在电喷雾电离源正离子模式下采集生物样品的质谱数据。采用Xcalibur采集数据,利用Compound Discoverer 3.1软件的化合物代谢产物预测模板进行分析,结合相关文献以及Mass Frontier 7.0软件对代谢产物进行鉴定。结果 在大鼠的生物样本中检测到33个5,7-二甲氧基香豆素代谢产物,21个6,7-二甲氧基香豆素代谢产物。在血浆、尿液、粪便、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠中分别鉴定出8、28、23、2、10、3、10、13、7、7个5,7-二甲氧基香豆素代谢产物和7、19、14、7、7、4、7、13、3、8个6,7-二甲氧基香豆素代谢产物。结论 通过液质联用技术推测出了33个5,7-二甲氧基香豆素代谢产物和21个6,7-二甲氧基香豆素代谢产物,阐明了2种香豆素在大鼠体内通过去甲基化、羟基化、水解、还原、甲基化、磺酸化、葡萄糖醛酸化等途径进行代谢,对2种香豆素的代谢特点进行了比较分析,为进一步研究中药中2种香豆素的作用机制和作用途径奠定了基础,同时也为药物代谢研究提供一种综合研究方法。