偏痛汤1号化学成分的UHPLC-LTQ-OrbitrapMS~n快速鉴定研究

建立超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱联用(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)技术分析偏痛汤1号化学成分的方法。方法:采用UHPLC BEH C18色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm),以乙腈0. 1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。分别在正、负离子模式下,采集LTQOrbitrap MS数据,依据保留时间信息、高分辨质谱精确分子量和MSn多级碎片信息分析偏痛汤1号全方的化学成分以及方中蔓荆子、甘草和细辛三味中药的特征性成分。结果:从偏痛汤1号中共鉴定出126种化学成分,其中17种化学成分为蔓荆子特有,60种化学成分为炙甘草特有,5种化学成分为细辛特有。结论:该方法可为偏痛汤1号质量控制、药效学研究提供参考数据,为复方中药化学成分的快速定性分析提供借鉴。     

基于UPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱的中药瓜蒌化学成分分析

目的:基于超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱系统(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)分析鉴定中药瓜蒌的化学成分。方法:瓜蒌样品粉碎过筛后采用70%甲醇超声提取,Waters HSS T3-C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),流动相0. 1%甲酸水溶液-甲醇梯度洗脱,流速0. 3 mL·min-1,采用电喷雾离子源(ESI),正、负离子分别进行一级、二级质谱数据采集。为了获得更多的化合物信息,根据色谱峰分离情况、质谱响应强度以及一级质谱解卷积后提取得到的准分子离子数量,优化样品提取条件、色谱及质谱参数。根据精确相对分子质量、离子碎片信息、相关对照品比对,并结合瓜蒌化学成分文献信息,对其中的化学成分进行分析鉴定。结果:从瓜蒌中共分析鉴定了91个化学成分,包括14个氨基酸类化合物,5个单萜类化合物,5个四环三萜类化合物,1个五环三萜类化合物,14个黄酮类化合物,17个有机酸类化合物,3个多糖类化合物,7个核苷类化合物,7个生物碱及含氮化合物,12个挥发性成分,1个植物甾醇,及其他5种化合物。结论:该方法具有高效分离、高灵敏检测优势,可较为全面地对瓜蒌中不同类型化合物进行分析鉴定,为瓜蒌药效物质基础及质量标准研究提供参考。     

静电场对力竭运动后大鼠血清SOD活性影响的实验研究

通过对长期施以５种不同场强静电幅照的训练型大鼠在急性力竭性训练后即刻、１２小时、２４小时后血清ＳＯＤ活性测定结果的分析研究，发现静电幅照场强为０．８ＫＶ／ｃｍ作用于疲劳大鼠可使体内ＳＯＤ活性水平在５种场强中达到最高值，明显高于安静、训练两组对照值，经ｔ检验，具有显著性差异。并探讨了静电场对消除机体疲劳的影响。     

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS的佛耳草多成分定量分析

目的 建立一种快速稳定的液质联用方法同时分析佛耳草中17种化学成分的含量,为完善佛耳草质量标准提供实验依据。方法 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱法（UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS）对15批不同产地佛耳草中的17种成分进行定量分析,使用ACQUITY UPLC^? BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,以甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B）为流动相梯度洗脱（0~1.0 min,8%A;1.0~4.0 min,8%~26%A;4.0~9.0 min,26%A;9.0~14.0 min,26%~34%A;14.0~14.5 min,34%~45%A;14.5~15.0 min,45%~60%A;15.0~18.0 min,60%~90%A;18.0~19.0 min,90%A;19.0~19.01 min,90%~8%A;19.01~20.0 min,8%A）,流速0.3 mL·min^-1,柱温40 ℃,进样量2 μL;运用电喷雾离子源,正、负离子模式全扫描,扫描范围m/z 100~1 000。结果 所建立的测定方法经方法学验证良好,能够用于17种成分的同时定量。15批佛耳草样品中奎宁酸、没食子酸、原儿茶酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、1,3-O-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸A、异槲皮苷、1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、大波斯菊苷、紫云英苷、异绿原酸C、木犀草素、芹菜素、高车前素的质量范围依次为39.60~179.12、0.17~0.84、2.41~8.38、4.33~31.50、13.63~180.38、2.43~14.75、1.16~19.68、0.49~5.63、55.77~445.16、0.23~10.26、62.04~530.10、1.11~18.01、11.36~90.61、12.22~65.98、7.22~69.84、3.37~45.65、0.30~2.59 μg·g^-1,其中有机酸类成分在佛耳草中含量比黄酮类成分更高,以1,5-O-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸A、奎宁酸、绿原酸含量较高,同时,贵州产地佛耳草样品中黄酮类成分含量高于江苏产地样品,江苏产地佛耳草样品中有机酸类成分含量则高于贵州产地样品。结论 建立的检测方法可用于佛耳草中17种成分含量的快速、准确测定,明确了佛耳草主要成分的含量范围,可为佛耳草质量控制标志物的选择提供参考。     

胡杨树脂提取物抗炎活性筛选及化学成分分析

目的:探讨胡杨树脂提取物对脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬白血病细胞RAW 264. 7细胞炎症保护作用及利用UPLC-Q-Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术,对胡杨树脂化学成分进行识别和鉴定。方法:用不同浓度(12. 5、25、50、100、200μg·m L-1)的胡杨树脂提取物处理RAW 264. 7细胞,MTT法检测细胞增殖活性;通过LPS(1μg·m L-1)诱导RAW 264. 7细胞建立炎症模型,用不同浓度胡杨树脂提取物处理炎症模型,MTT法检测胡杨树脂提取物对细胞的保护作用;采用UPLC-Q-Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用技术,借助数据挖掘方法识别和鉴定胡杨树脂中的化学成分,对其高分辨一级和二级质谱数据进行解析,并与数据库比对,对胡杨树脂化学成分的结构推测和确认。结果:在实验浓度范围内,胡杨树脂提取物对细胞无细胞毒性作用;与LPS模型组比较,浓度为12. 5、25、50、100、200μg·m L-1胡杨树脂提取物均能显著改善LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264. 7的炎症反应,具有较好的浓度依赖性;通过高分辨数据推测鉴定出6个化合物,分别为棕榈油酸、邻苯二甲酸二丁酯、十六酰胺、油酸酰胺、硬脂酰胺、芥酸酰胺。结论:该结果为胡杨树脂的提取分离及抗炎活性作用研究奠定基础,为进一步对胡杨树脂的综合研究提供科学的依据。     

基于 UPLC-Orbitrap-HRMS技术鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠体内入血成分

目的 鉴定当归-川芎药对化学成分及大鼠ig后的入血原型成分和代谢产物。方法 基于超高效液相色谱-静电场轨道阱-高分辨率质谱技术（UPLC-Orbitrap-HRMS）,结合对照品图谱、自建数据库、相关文献信息及Compound Discoverer3.3、Xcalibur qual browser 4.3等软件对当归-川芎药对的化学成分进行分析鉴定;大鼠经ig给药后制得含药血清,通过比对含药血清与对照组血清,鉴定入血原型成分和代谢产物。结果 共在当归-川芎药对中鉴定出69个化学成分,主要包括苯酞类24个、有机酸类24个、氨基酸类8个、含氮类7个、香豆素类4个、木脂素类1个、黄酮类1个;在含药血清中共鉴定出30个入血原型成分,包括苯酞类15个、有机酚酸类13个、香豆素类2个;鉴定出45个代谢产物,包括32个苯酞类代谢产物,13个有机酚酸类代谢产物。结论 明确了当归-川芎药对的化学成分及入血原型成分和代谢产物。     

止得咳颗粒在大鼠体内的代谢产物研究

目的 分析止得咳颗粒在大鼠体内的代谢产物并推测其代谢途径。方法 将雄性SD大鼠随机分为空白组、给药组（止得咳颗粒,9.45 g/kg）,每组灌胃超纯水或相应药液,每天2次,每次灌胃间隔6～8 h,连续3 d。收集各组大鼠血清、粪便、尿液样品,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UPLC-Q-Exactive-MS）技术鉴定大鼠灌胃止得咳颗粒后上述生物样品中的代谢产物,并推测其代谢途径。结果 大鼠灌胃止得咳颗粒后,在其血清、尿液、粪便样品中共鉴定出16个原型成分（如野鸢尾黄素、黄芩素、绿原酸等）和11个代谢产物（如山柰酚或木犀草素水合产物、绿原酸甲基化产物、黄芩苷羟基化产物）。其中,血清样品中鉴定出8个原型成分和4个代谢产物;尿液样品中鉴定出10个原型成分和7个代谢产物;粪便样品中鉴定出8个原型成分和5个代谢产物。结论 止得咳颗粒在大鼠体内的代谢成分主要包括黄芩苷、野鸢尾黄素、绿原酸,主要涉及甲基化、羟基化、葡萄糖醛酸化等代谢途径。     

基于UPLC-QE-HF-MS/MS技术分析红凉伞化学成分及入血成分

目的 分析红凉伞提取物化学成分及入血成分,初步阐明其可能的药效物质基础。方法 采用配对比较法将12只大鼠随机分为空白组和红凉伞给药组,每组6只。每天上、下午各给药1次,连续3 d;第4天再次给药后,取血后制备血清样品。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对红凉伞提取物和血清样品中化学成分进行分析鉴定。使用Compound Discoverer 3.0软件进行保留时间矫正、峰识别、峰提取等工作,根据二级质谱信息,利用Thermo mzCloud在线数据库、Thermo mzVault本地数据库,并参照有关文献和对照品质谱信息,初步鉴定红凉伞化学成分及入血成分。结果 从红凉伞提取物中共鉴定出34个化合物,主要为香豆素类、黄酮类、有机酸类、氨基酸类等成分,包括岩白菜素、槲皮素、没食子酸、L-焦谷氨酸等化合物;从血清样本中共鉴定出5个入血成分,分别为L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸。结论 本研究初步推测L-焦谷氨酸、丁香酸、岩白菜素、朱砂根皂苷A、麦考酚酸是红凉伞的药效物质基础。     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS和整合网络药理学的川芎酒制后增强抗脑缺血损伤作用机制分析

目的 分析川芎酒制前后水提物中差异性成分，探讨川芎酒制增强抗脑缺血损伤的分子作用机制。方法 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS），基于化合物质谱信息并结合对照品、参考文献比对，定性分析川芎水提物的主要化学成分，采用化学模式识别方法筛选川芎酒制前后的差异性成分。基于此，通过在线数据库对差异化合物的潜在靶点进行预测，搜索脑缺血疾病相关靶点。运用Cytoscape 3.6.0建立川芎酒制前后差异成分-作用靶点-疾病网络图；使用STRING 11.5构建交集靶点蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络；通过DAVID 6.8对差异性成分抗脑缺血的潜在靶点进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；同时，将相对含量较高且酒制后峰面积升高的化合物与其对应靶点进行分子对接，以验证酒制增效机制。结果 从川芎中共鉴定出71个化学成分，筛选出34个差异性成分，对应潜在靶点603个，与769个疾病靶点做交集后共得到60个交集靶点。通过PPI网络分析得到7个关键靶点，包括JUN、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、丝裂原活化蛋白激酶3（MAPK3）、白细胞介素-1β（IL-1β）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、胱天蛋白酶-3（CASP3）、基质金属蛋白酶9（MMP9）；肿瘤坏死因子（TNF）信号通路为主要的差异信号通路。分子对接结果显示，各差异成分（洋川芎内酯K、洋川芎内酯F、3-正丁基苯酞、Z，Z′-6，8′，7，3′-双藁本内酯、阿魏酸、Z-藁本内酯）和其对应靶点均具有较好的结合活性。结论 川芎酒制增效机制可能与抑制炎症反应的作用增强有关。     

HPLC-MS法测定大鼠体内大黄素血药浓度及药动学研究

目的建立高效液相色谱/四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-HR/MS)方法,研究大黄素在正常与脑缺血大鼠体内的药动学规律。方法采用HPLC-Q-HR/MS内标法测定大黄素血药浓度,色谱柱为XBridge~(TM) C_(18)柱(150 mm×2.1mm,5μm),柱温30℃;流动相为3 mmol/L乙酸铵-甲醇,梯度洗脱,梯度洗脱程序为0～2 min,30%甲醇;2～10 min,30%～60%甲醇;10～13 min,60%～30%甲醇;体积流量为0.3 m L/min;进样体积为5μL;质谱条件:离子源为加热电喷雾离子化源(HESI),扫描方式为全扫模式,负离子模式检测。以DAS 3.0软件拟合计算药动学参数。结果大黄素在正常与脑缺血大鼠血浆中的主要药动学参数分别为AUC_(0-∞)(605.63±163.66)、(1 107.78±191.11)ng?h/m L,C_(max)(81.96±20.72)、(91.65±16.82)ng/m L,V_Z/F(851.03±97.30)、(1 051.87±119.88)L/kg,t_(1/2)(10.31±1.61)、(23.13±3.56)h,t_(max)(0.75±0.22)、(0.75±0.16)h。结论该法操作简便、分析速度快速、灵敏,适用于大黄素在大鼠体内的药动学研究。