SARS-CoV S蛋白全长基因克隆及其表达的初步研究

目的:克隆表达SARS-CoVS蛋白,构建SARS全长基因疫苗。方法:从SARS病毒的总cDNA中以PCR方法扩增编码人SARS-CoVS1和S2蛋白的编码序列,再将二者分别克隆入真核表达载体pVAX1,构建重组表达载体。然后进一步将S1和S2连接到pVAX1中。酶切和测序鉴定阳性克隆。采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western检测S蛋白的表达。结果:PCR方法分别扩增出了1900bp和1800bp左右的基因片段,两片段插入pVAX1构建重组表达载体后,经序列测定证实该插入片段为SARS病毒S蛋白编码序列。将重组子转染VeroE6细胞,收集细胞总蛋白,Western检测获得特异蛋白带。结论:成功克隆并表达了SARS-CoVS蛋白,为其作为SARS基因疫苗研究打下基础。     

2型糖尿病的综合治疗进展

近年来国内外2型糖尿病的临床和基础研究取得了很大进展,对2型糖尿病的治疗产生了巨大影响,为适应当今日新月异的糖尿病治疗进展水平,根据国内外最新的临床研究证据,本着循证医学和转化医学的理念,深入探析糖尿病的综合治疗及进展,把最新的糖尿病研究用于临床实践,以有效控制糖尿病.     

FSHR胞外区基因片段的原核表达及多克隆抗体的制备

目的 构建人卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)胞外区的原核表达载体,并用纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备抗血清.方法 采用RT-PCR克隆人FSHR胞外区,将其克降到原核表达载体pET32a(+),并通过IPTG诱导目的 基因在大肠杆菌中表达,所获得的包涵体蛋白通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化重组蛋白,并用SDS-PAGE和蛋白印迹法鉴定.结果 PCR扩增出1 047 bp目的 基因片段,测序证实克隆的基因序列与GenBank中的FSHR序列相符.工程菌pET32 a(+)/FSHR胞外区经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,Mr约为58 000,与预期的一致.其表达形式为不溶性包涵体,此包涵体蛋白通过Ni-NAT离子交换柱层析纯化,纯化的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带.该蛋白免疫小鼠制备抗血清,抗体效价为1:12 800,Western blot检测证实该抗体能与目的 蛋白发生特异性结合.结论 获得了人FSHR胞外区融合蛋白及特异性多克隆抗体,为进一步研究FSHR蛋白的功能奠定了基础.     

他汀药物降低急性冠脉综合征外周血Th1/Th2细胞比率

目的:探讨在急性冠脉综合征(ACS)中应用他汀类药物对Th1和Th2细胞亚群的影响。方法:将56例ACS按照入院前是否应用他汀药物分为应用他汀组(A组,30例)和未使用他汀组(B组,26例),用流式细胞术检测入院时Th1和Th2     

医学本科生第二课堂教学实践与体会

第二课堂活动对拓展医学本科生的理论视野和动手能力有非常重要的作用。近年来,该校基础部把本科生第二课堂活动摆在医学本科教育的突出重要位置上,并进行了大量有益的探索与实践。第二课堂的实践活动提高了学生的学术兴趣和科研素养,为实现培养创新性人才的目标打下了良好基础。     

从护理评估到护理诊断

护理诊断是护理程序的核心，之后的一切工作将围绕着护理诊断展开。因此，在教学中帮助学生根据护理评估资料正确判断得出护理诊断是提高护生能力必须突破的难关。笔者利用模拟病例的方式使这个问题变得浅显易懂。在此利用３个模拟病例予以说明，也为今后的护理教学和课程结构的改进积累经验。模拟病例一：患者王××，男性，５６岁，反复咳嗽，咳粘稠痰伴胸痛１年，有吸烟史１０余年，每日１包。患病以来心情紧张忧郁，精神疲倦，活动后胸闷气急，近期气促加重并出现紫绀，今因大量咯血内心害怕来就诊。查体：体温３９℃，脉弱，血压１１／…     

甘露糖抑制内质网应激促进胰岛β细胞存活

目的 1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)是由于胰岛β细胞受自身免疫系统的破坏,而导致胰岛素缺乏和血糖升高的一种自身免疫性疾病,胰岛β细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是其发病的重要因素。甘露糖是一种葡萄糖的差向异构体,新近发现其具有减缓甚至阻断T1D进展的作用,但具体机制仍待进一步阐明。方法通过ERS诱导剂(TG/TM)处理NIT-1细胞,荧光定量PCR检测内质网应激标志物mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞生存活力,台盼蓝法鉴定细胞生死状态。结果给予适宜浓度的甘露糖预处理,可改善ERS诱导剂引起的胰岛β细胞系(NIT-1)细胞活力下降并逆转ERS诱导剂引发的BiP、ATF4及CHOP mRNA水平升高。结论甘露糖可抑制NIT-1细胞的过度ERS,进而减少凋亡,促进存活,为甘露糖用于治疗T1D提供了新的理论依据。     

低剂量雷帕霉素给药对流感病毒感染的小鼠肺组织常驻CD8~+记忆T细胞的影响

目的雷帕霉素(rapamycin)已被报道可以促进记忆性CD8~+T细胞,包括效应性记忆(effector memory)CD8~+T细胞及中央记忆性(central memory)CD8~+T细胞的分化,但是其对组织常驻(tissue resident)CD8~+记忆T细胞的调控作用尚未见报道。本研究旨在探索雷帕霉素对小鼠组织常驻CD8~+记忆T细胞的影响。方法将C57BL/6J野生型小鼠随机分成2组:对照组和雷帕霉素处理组。向其输注能够特异性识别LCMV抗原gp33-41的P14细胞(CD8~+T细胞),而后利用表达LCMV gp33-41的流感病毒感染小鼠。利用流式染色技术检测和比较2组小鼠在不同时间点的血液、淋巴结以及肺脏中抗原特异性CD8~+记忆T细胞的比例和数量以及相应的表面分子、胞内细胞因子。结果与对照组相比,雷帕霉素处理组的外周血、引流淋巴结以及肺组织内的抗原特异性CD8~+记忆T细胞均显著增多,同时发现外周血中CD8~+记忆前体细胞比例增多,淋巴结中的中央型CD8~+记忆T细胞比例及数量增多、CD8~+记忆T细胞的功能增强,肺脏组织常驻CD8~+记忆T细胞的CD103和CD69的表达上升。结论感染流感病毒后,持续低剂量给予雷帕霉素能够抑制mTOR信号从而提高组织特异性常驻CD8~+记忆细胞的形成和维持,这为新型流感疫苗的研发提供了新的思路。     

辅助刺激信号在类风湿关节炎发病机制中的作用

类风湿关节炎作为一种系统性自身免疫性疾病,其发病机制与许多因素有关。辅助刺激信号在其病程中的作用是近期国内外研究热点之一。已有的研究发现,CD28,CTLA-4,CD80,CD86,CD40,CD40L等辅助刺激分子在类风湿关节炎中均呈现表达异常,并且与不同的临床特征有一定的相关性,提示这些分子可能在发病过程和疾病进展中扮演了一定的角色。而针对这些分子所设计的一些药物如CTLA4Ig,其治疗作用已经在动物实验中得到了初步验证。但辅助刺激分子与T细胞和抗原提呈细胞之间的相互作用是动态且复杂的免疫调节过程,其在类风湿关节炎发病及病程进展中的机制尚不完全清楚,明确其调节过程,有助于更好的理解类风湿关节炎的发病机制,并可以为其基因治疗提供新的线索。     

人microRNA-146a慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建针对has-miR-146a的慢病毒表达载体,并鉴定成熟has-miR-146a在细胞内表达水平。方法PCR扩增pri-miR-146a,克隆于慢病毒载体plenti-GFP中,转染293FT细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染Jurkat细胞。结果成功构建了has-miR-146a的慢病毒表达载体,建立了高效转染系统。结论建立了高效稳定表达has-miR-146a的慢病毒转染系统。