加味桃红四物汤对骨髓基质干细胞体外诱导的实验研究

目的研究加味桃红四物汤对骨髓基质干细胞早期促缺氧诱导因子（HIF-1）与血管内皮生长因子（VEGF）分泌的影响。方法骨髓基质干细胞取材,设置中药组及生理盐水组,观察HIF-1、VEGF表达。结果中药组对骨髓干细胞培养第2d HIF-1α表达量开始出现,第5、7天后中药组HIF-1α mRNA的表达量显著低于生理盐水组。而第3、5、7、14天VEGF表达中药组表达较生理盐水组强,在第5、7天VEGF表达达到峰值。结论加味桃红四物汤可以诱导骨髓基质干细胞向血管祖细胞分化,并促相关生长因子表达。     

晚期自噬在非酒精性脂肪肝中的促凋亡作用

目的 在非酒精性脂肪肝体外模型中研究油酸长期刺激对自噬的影响及其作用.方法 用含浓度为400 μmol/L油酸的DMEM高糖培养基培养肝癌HepG2细胞,制作体外非酒精性脂肪肝细胞模型.向肝癌HepG2细胞转染GFP-LC3质粒,通过观察LC3Ⅱ绿色荧光斑点确定自噬的发生.采用PI3k抑制剂LY294002抑制自噬.用...     

人趋化因子CCL3L1融合蛋白表达和活性分析

目的人趋化因子CCL3L1进行融合蛋白原核表达和真核表达，纯化后活性分析。方法克隆人类CCL3L1eDNA，构建两种CCL3L1表达载体，获得两个CCL3L1融合蛋白，一个在BL21大肠杆菌表达的GST-CCL3L1融合蛋白，另一个在跎果蝇细胞表达的His-CCL3L1融合蛋白。同时克隆了pcDNA3.1-flag-CCR5表达载体，培养了稳定表达flag-CCR5的细胞株，进行人趋化因子CCL3L1活性分析。结果成功构建人趋化因子CCL3L1融合蛋白原核表达载体pGEX-4T和真核表达载体pMT／BiP／V5-His，免疫沉淀法检测和Westernblot法分析His-CCL3L1蛋白在浓度1nmol／L到50nmol／L存在剂量依赖性，浓度50nmol／L到100nmol／L没有剂量依赖性。纯化的His-CCL3L1蛋白能特异性结合CCR5受体。结论成功表达了融合蛋白GST-CCL3L1和His-CCL3LI，果蝇细胞表达的His-CCL3L1蛋白具有与天然CCL3L1相同的生物学活性，为进一步制备CCL3L1单克隆和多克隆抗体及研究CCL3L1影响HIV-1感染的机制提供基础资料。     

高龄股骨粗隆间不稳定型骨折不同手术方式比较

[目的]通过分析动力髋螺钉（DHS）及人工股骨头置换术治疗股骨粗隆间骨折的手术效果，评价不同的手术方案治疗高龄患者股骨粗隆间骨折的临床效果。[方法]本组40例，男22例，女18例；年龄75～90岁，平均82岁。其中22例应用DHS手术内固定治疗；18例采用人工股骨头置换术治疗。[结果]平均随访1．5a，应用DHS及人工股骨头置换术患者，卧床时间分别为3周和1周，完全负重时间分别为10周和6周。无感染及骨折不愈合发生。2例DHS内固定的患者出现螺纹钉穿出股骨头，4例出现髋内翻，2例出现肺部感染。仅30％年龄〉70岁的患者恢复至术前的活动水平。[结论]人工股骨头置换术是老年人股骨粗隆间骨折较为理想的内固定方法，可大大减少并发症。     

CCL3L1融合蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备

目的 表达和纯化CCL3L1融合蛋白,并对其免疫原性进行分析.方法 应用分子生物学技术将pGEX-4T-1-CCL3L1质粒进行酶切,收集CCL3L1片段与pET-32a(+)表达载体连接,构建pET-32a(+)-CCL3L1重组质粒,将其转化BL-21大肠埃希菌进行蛋白表达并纯化.应用酶切鉴定、SDS-PAGE及Western blot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性.以间接ELISA法测定BABL/c小鼠多克隆抗体滴度.结果 成功获得了高纯度的CCL3L1融合蛋白,且该蛋白为可溶性表达,以其制备的多克隆抗体滴度最高可达1:51 200.结论 获得高纯度可溶性表达的CCL3L1融合蛋白及其高效价的多克隆抗体.     

不同内固定方式治疗肩峰骨折

肩峰骨折较为少见,临床报道不多,本院从1992年1月~2005年6月分别采用单纯克氏针、钢丝张力带、重建钢板内固定术治疗肩峰骨折,对得到随访的19例患者进行回顾性分析,比较其临床疗效、及优缺点,探讨肩峰骨折的手术选择。1临床资料1·1一般资料本组19例,男15例,女4例。年龄15~46岁     

E2F1促进内源性XRCC1启动子的表达

目的 探讨E2F1对XRCC1的调节作用及其意义.方法 将受四环素调节的启动子控制的E2F1表达载体(tet-E2F1)和突变的E2F1(tet-132E)表达载体分别转染至Saos2细胞,构建XRCC1启动子荧光报告载体,同时转染特异的XRCC1启动子荧光报告载体和不同数量的E2F1表达载体以及E2F2、E2F4、E2F4表达载体进入Saos2细胞,收集细胞,进行荧光素酶分析,570 nm波长读取吸光度值.结果 转染E2F1表达载体和XRCC1启动子荧光报告载体,提高E2F1载体的数量可以增加荧光素酶的活性,相反.突变的E2F1(132E)不能激活XRCC1启动子荧光报告基因.结论 E2F1能够激活XRCC1启动子,并且能够使XRCC1启动子表达增强.     

Sigma-1受体在小鼠肝缺血再灌注损伤中的表达和作用

目的 研究Sigma-1受体在小鼠肝缺血再灌注损伤中的表达和作用。方法 将20只小鼠随机分为对照组和肝缺血再灌注组,建立小鼠肝缺血再灌注模型。肝缺血再灌注组分别为缺血1 h再灌注6 h、再灌注12 h和再灌注24 h组。实时荧光定量PCR及Western Blot实验分别检测各组小鼠肝组织Sigma-1受体mRNA及蛋白表达水平。进一步研究Sigma-1受体在小鼠肝缺血再灌注损伤中的作用,将20只小鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、Sigma-1受体激动剂组、Sigma-1受体激动剂加抑制剂组。建立小鼠肝缺血再灌注模型1 h前,向激动剂组小鼠腹腔注射Sigma-1受体激动剂4-苯基-1-(4-苯丁基)哌啶,激动剂加抑制剂组小鼠腹腔注射激动剂4-苯基-1-(4-苯丁基)哌啶和抑制剂NE-100。再灌注12 h后通过实时荧光定量PCR检测肝组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6和IL-10 mRNA表达水平,ELISA法检测血清TNF-α、IL-6和IL-10水平,检测血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）及谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）,苏木精-尹红染色法观察肝组织病理学变化。结果 同对照组比较,缺血1 h再灌注12 h组Sigma-1受体表达水平明显升高(P<0.05)。同肝缺血再灌注组比较,Sigma-1受体激动剂组小鼠肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达水平下降,IL-10 mRNA表达水平升高,血清TNF-α、IL-6水平降低,IL-10水平升高,血清ALT、AST水平降低,肝组织病理学损伤减轻(P<0.05)。Sigma-1受体激动剂加抑制剂组小鼠肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达水平较Sigma-1受体激动剂组升高,IL-10 mRNA表达水平下降。血清TNF-α、IL-6水平升高,IL-10水平降低,血清ALT、AST水平升高,肝组织病理学损伤加重(P<0.05)。结论 在小鼠肝缺血再灌注后,Sigma-1受体表达水平升高,促进Sigma-1受体活化可减轻肝缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制炎症反应有关。     

ASPP2抑制HBx引起细胞自噬的实验研究

目的 观察ASPP2对HBx引起的细胞自噬的改变.方法 运用Hbx转染HepG 2细胞,ASPP2过表达与对照情况下,采用免疫印迹技术检测内源性自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ和P62的表达,采用免疫荧光方法检测LC3荧光颗粒表达水平,采用RT-PCR技术检测自噬相关基因Beclin-1的mRNA转录水平.结果 免疫印迹技术显示转染HBx质粒比转染空载组的LC3Ⅱ量增多,但是在加入ASPP2腺病毒组比空载组的LC3Ⅱ表达量减少.免疫荧光显示转染HBx质粒比转染空载组的LC3荧光颗粒多,但是在共转染ASPP2质粒组比空载组的LC3荧光颗粒减少.RT-PCR方法显示转染HBX质粒比转染空载组的表达增多,但是在加入ASPP2腺病毒组比空载组表达量减少.结论 ASPP2可以抑制HBx引起的细胞自噬.     

撬拨复位植骨椎弓根螺钉固定治疗胸腰椎爆裂性骨折

[目的]椎体撬拨植骨成形加椎弓根螺钉固定治疗早期胸腰椎爆裂性骨折,预防术后形成“空心椎”引起的钉松动、断钉及伤椎再塌陷、后凸畸形等并发症。[方法及结果]收治胸腰椎爆裂性骨折患者28例,行椎弓根螺钉内固定后,用神经根探子撬拨压缩下陷的伤椎上终板和前中柱,使之复位,经伤椎通过椎弓根植骨成形。术后随访6~18个月,全部获得骨性愈合(100%)。脊柱后凸Cobb's角度术前平均23.6°(n=23)矫正至术后平均4.4°(n=23),随访角度5.3°;椎体前缘高度压缩比由术前平均45%恢复至术后97%,随访时95%;伤椎椎管内矢状径术前平均7.6 mm,术后17.5 mm,随访矢状径17.1 mm,无明显狭窄。无内固定松动、断裂或弯曲。[结论]椎体撬拨植骨成形加椎弓根螺钉固定治疗胸腰椎压缩性骨折,手术安全性高,经植骨均获得骨性愈合,恢复了伤椎的强度和刚度,减少了内固定的应力,防止后凸畸形,降低并发症出现。