miR-24对过氧化氢诱导的HLE-B3细胞凋亡的影响及其与线粒体Smac/Diablo-XIAP-caspase-9/3凋亡途径的关系

目的　探讨微小RNA-24(miR-24)对过氧化氢（H₂O₂）诱导的HLE-B3细胞凋亡的影响,分析其与线粒体中第二个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活因子/低等电位点的凋亡抑制蛋白的直接结合蛋白（the second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP-binding protein with low PI,Smac/Diablo）-XIAP-caspase-9/3凋亡途径的关系。方法　将HLE-B3细胞分为对照组、H₂O₂组、H₂O₂+miR-24 NC组和H₂O₂+miR-24 抑制剂组。先按照miR-24抑制剂、miR-24 NC试剂盒说明书转染H₂O₂+miR-24抑制剂组和H₂O₂+miR-24 NC组细胞24 h,然后向H₂O₂组、H₂O₂+miR-24 NC组和H₂O₂+miR-24 抑制剂组HLE-B3细胞中加入200 μmol·L^-1 H₂O₂干预24 h,收集细胞用于后续实验;将正常培养的HLE-B3细胞设置为对照组。采用实时荧光定量PCR检测各组HLE-B3细胞miR-24表达情况,CCK-8法检测各组HLE-B3细胞生长情况,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,计算各组细胞存活率和细胞凋亡率。采用荧光探针JC-1法检测线粒体膜电位变化情况（利用红绿荧光强度比反映线粒体膜电位）;采用蛋白免疫印迹法检测各组HLE-B3细胞线粒体和细胞质分级中Smac/Diablo及细胞质分级中XIAP、caspase-9和caspase-3蛋白表达情况。对所得数据进行统计学分析。结果　当H₂O₂浓度大于200 μmol·L^-1时,细胞存活率均小于50%,本实验以200 μmol·L^-1 作为最适H₂O₂浓度。对照组、H₂O₂组、H₂O₂+miR-24 NC组和H₂O₂+miR-24抑制剂组细胞miR-24相对表达量分别为1.04±0.02、2.73±0.09、2.69±0.07 和1.15±0.06;与对照组相比,H₂O₂组细胞中miR-24表达升高（P<0.05）;与H₂O₂组和H₂O₂+miR-24 NC组相比,H₂O₂+miR-24抑制剂组中miR-24表达降低（均为P<0.05）,但H₂O₂组与H₂O₂+miR-24 NC组中miR-24表达差异无统计学意义（P>0.05）。与H₂O₂组和H₂O₂+miR-24 NC组相比,H₂O₂+miR-24抑制剂组细胞存活率显著升高、细胞凋亡率显著降低（均为P<0.05）,但H₂O₂组与H₂O₂+miR-24 NC组细胞存活率和细胞凋亡率差异均无统计学意义（均为P>0.05）。对照组、H₂O₂组、H₂O₂+miR-24 NC组和H₂O₂+miR-24抑制剂组红绿荧光强度比分别为0.24±0.02、0.12±0.02、0.15±0.03、0.31±0.06。与对照组相比,H₂O₂组红绿荧光强度比降低（P<0.05）;与H₂O₂组和H₂O₂+miR-24 NC组相比,H₂O₂+miR-24抑制剂组红绿荧光强度比均升高（均为P<0.05）,但H₂O₂组与H₂O₂+miR-24 NC组红绿荧光强度比比较,差异无统计学意义（P>0.05）。与H₂O₂组和H₂O₂+miR-24 NC组相比,H₂O₂+miR-24抑制剂组线粒体分级中Smac/Diablo蛋白及细胞质分级中XIAP蛋白表达升高（均为P<0.05）,细胞质分级中Smac/Diablo、caspase-9和caspase-3蛋白表达降低（均为P<0.05）,但H₂O₂组与H₂O₂+miR-24 NC组线粒体、细胞质分级中Smac/Diablo蛋白及细胞质分级中XIAP、caspase-9和caspase-3蛋白表达相比,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　miR-24可能通过抑制线粒体Smac/Diablo-XIAP-caspase-9/3凋亡途径,抑制H₂O₂诱导的HLE-B3细胞凋亡。     

长链非编码RNA 母系表达基因3调控miR-34a对糖尿病视网膜病变Müller细胞活化及炎症因子分泌的影响

目的　探讨母系表达基因3（maternally expressed gene 3,MEG3）对糖尿病视网膜病变（DR）Müller细胞的活化及炎症因子分泌的影响及机制。方法　高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射构建小鼠DR体内模型。高糖刺激人视网膜Müller细胞株MIO-M1构建DR体外模型。免疫荧光化学染色及Western blot检测小鼠视网膜及Müller细胞中胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。Western blot及酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠视网膜及细胞培养基上清中血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。ELISA检测小鼠视网膜及细胞培养基上清中IL-1β蛋白的表达。分别或同时向Müller细胞中转染pcDNA-MEG3及miR-34a mimic对其表达进行干预。qRT-PCR检测MEG3 mRNA及miR-34a表达。结果　与正常对照组小鼠比较,DR组小鼠视网膜中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均增多（均为P<0.05）,MEG3 mRNA表达降低(P<0.01)。与对照组比较,高糖组Müller细胞中MEG3 mRNA表达降低(P<0.01),而GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均升高（均为P<0.05）。与高糖组比较,高糖+pcDNA-MEG3组中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均降低（均为P<0.05）。与正常对照组比较,DR组小鼠视网膜及高糖刺激的Müller细胞中miR-34a表达均升高(均为P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-MEG3组中miR-34a表达减少(P<0.01)。与pcDNA+NC mimic组比较,pcDNA+miR-34a mimic组中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均升高（均为P<0.05）,而pcDNA-MEG3+NC mimic组中GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达均减少（均为P<0.05）。与pcDNA-MEG3+miR-34a mimic组比较,GFAP、VEGF及IL-1β蛋白表达水平均升高（均为P<0.05）。结论　MEG3在DR小鼠视网膜及高糖刺激的Müller细胞中表达均降低,其可通过负向调控miR-34a抑制Müller细胞活化及炎症因子的分泌。过表达MEG3可能成为DR治疗的新靶点。     

分泌型糖蛋白Reelin对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨分泌型糖蛋白Reelin对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的抑制作用。方法　将大鼠RGC-5分为对照组、NMDA组、Reelin类似物组、Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组。对照组细胞用含双抗的氨基酸双抗培养基培养,NMDA组在对照组细胞培养基中添加100 μmol·L^-1 NMDA后进行细胞培养,Reelin类似物组、Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组在NMDA组细胞培养基的基础上利用Lipofectamine 2000将Reelin类似物、阴性对照和抑制物转染RGC-5,共同孵育24 h。用Annexin V FITC/碘化丙啶联合流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内Reelin、磷酸化-Tau蛋白（p-Tau）、糖原合成酶激酶-3β (GSK-3β)和细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）表达情况。结果　对照组RGC-5细胞凋亡率为（9.30±0.74）%,NMDA组为（25.40±1.13）%,NMDA组高于对照组,差异有统计学意义（t=6.311,P<0.001）。NMDA组RGC-5内Reelin蛋白表达水平低于对照组,p-Tau、GSK-3β和CDK5蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。Reelin类似物组细胞凋亡率为（9.23±0.24）%,低于Reelin阴性对照组［（14.33±1.02）%］和Reelin抑制物组［（26.81±1.15）%］,各组细胞凋亡率差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Reelin类似物组RGC-5内p-Tau、GSK-3β蛋白表达水平均低于Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组,Reelin抑制物组RGC-5内p-Tau、GSK-3β蛋白表达水平均高于Reelin阴性对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;CDK5蛋白表达水平在3组中基本一致,差异无统计学意义（P>0.05）。结论　Reelin对NMDA 诱导损伤的RGC具有保护作用,这种作用是通过下调GSK-3β表达抑制Tau蛋白磷酸化,进一步抑制细胞凋亡而实现的。     

感染性角膜炎共焦显微镜镜下特征与临床特点

分析62例(62眼)外伤感染性角膜炎的共焦显微镜镜下显微特征及临床特点.24例细菌性角膜炎中,16例角膜上皮层或浅基质层伴有1～2 μm高反光点.38例真菌性角膜炎中,14例角膜上皮层及浅基质层检查到长50～200 μm,直径2～5 μm的树枝状真菌菌丝;11例(28.9%)显示浅、中基质层的杂乱分布的直、长线状菌丝,长150～300 μm,直径3～7 μm;3例在浸润的周边部可观察到直径12～15 um的高亮度圆形、椭圆形实心球体真菌孢子.27例(71.1%)真菌性角膜炎有明确的植物外伤史,9例(37.5%)细菌性角膜炎有角膜接触镜配戴史.裂隙灯显微镜检查:32例(84.2%)真菌性角膜炎可见菌丝苔被,28例(74.4%)可见不规则或羽毛状边缘.真菌性角膜炎菌种鉴定为镰孢菌属18例(47.5%).共焦显微镜可显示典型的真菌菌丝及真菌孢子,在真菌性和细菌性角膜炎的鉴别诊断中具有重要价值.     

神经生长因子对人巩膜成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响

目的探索神经生长因子（NGF）对培养的人巩膜成纤维细胞（HSF）生长及胶原蛋白合成的影响。方法采用MTT比色法和流式细胞仪（FCM）分析技术，观察不同质量浓度NGF（10、25、50、100、200ng／ml）对HSF增殖和细胞生长周期的影响，氯胺T法检测胶原蛋白。结果NGF能促进HSF增殖，呈剂量依赖性，质量浓度为100ng／ml时作用最明显。NGF作用后，HSF的G0～G1期百分比降低，而S期百分比显著升高，增殖指数增高。NGF对HSF的胶原合成具有明显的促进作用，并呈剂量依赖性。结论外源性NGF可以促进体外培养的HSF增殖及胶原合成。     

RGP镜片矫正圆锥角膜的疗效评价

目的 评价硬性透气性隐形眼镜(RGP)对圆锥角膜眼的治疗效果.方法 30例(43眼)圆锥角膜患者配戴RGP,观察视力、配适状况及并发症.结果 配戴RGP后,19眼矫正视力≥1.0,平均视力增加4行,均好于框架球柱面联合镜.眩光及视物变形症状均明显改善.随访6～12个月,本组病例配适良好,除少数病例出现点状角膜上皮脱落经...     

白血病抑制因子(LIF)对视网膜视锥细胞氧化损伤的保护作用及机制

目的 研究氧化损伤条件下,白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)对视网膜视锥细胞活性的影响及其作用机制.方法 体外培养小鼠视网膜光感受器视锥细胞(661 W细胞株),根据干预药物不同,随机分为正常对照组、LIF干预组、H2O2干预组、S3I201干预组、H2O2+LIF干预组、H2O2+S3I201干预组、H2O2 +LIF+ S3I201干预组.采用MTT比色法和Western blot法检测LIF预处理对氧化损伤后视锥细胞活性及其相关信号转导通路因子STAT3蛋白表达及其磷酸化水平的影响.运用S3I201阻断STAT3信号通路后,采用MTT比色法和实时荧光定量PCR检测STAT3信号通路阻断对氧化损伤后视锥细胞活性以及抗凋亡因子bcl-2和bcl-xl mRNA的表达影响.结果 与H2O2干预组相比,H2O2+ LIF干预组p-Tyr705-STAT3蛋白的相对表达量明显增加,H2O2+ S3I201干预组p-Tyr705-STAT3蛋白的相对表达量显著下降,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与H2O2干预组相比,H2O2+ LIF干预组661 W细胞的细胞活性显著提高,差异有统计学意义(P＜0.05);与H2O2+ LIF干预组相比,H2O2+ LIF+S3I201干预组661 W细胞的细胞活性显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组相比,LIF干预组、H2O2干预组和H2O2+LIF干预组bcl-2 mR-NA和bcl-xl mRNA的相对表达量均显著增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);与H2O2+LIF干预组相比,H2O2+LIF+S3I201干预组bcl-2 mRNA和bcl-xl mRNA的相对表达量均显著下降(均为P＜0.05).结论 LIF对视锥细胞氧化损伤具有保护作用,其可能通过激活STAT3信号通道刺激抑制凋亡因子bcl-2和bcl-xl的表达增加而发挥作用.     

儿童白内障摘出人工晶状体植入术的护理

目的探讨儿童白内障摘出人工晶状体植入术特殊的护理方式。方法观察记录儿童白内障摘出人工晶状体植入术86例，采用针对儿童特点设计的护理方法，并进行总结。结果75．9％患儿安全度过手术期并获得较为理想的治疗效果。结论针对性护理在儿童白内障治疗康复过程中起着重要作用。     

循序渐进眼球运动训练对眼眶暴裂性骨折术后眼肌力恢复的作用

目的分析循序渐进个体化的眼球运动训练在眼眶暴裂性骨折术后患者眼肌力训练中的应用情况及对患者视功能改善作用。方法选择2001-09/2003-09郑州大学第一附属医院眼科住院行眼眶暴裂骨折修复术患者66例,随机分为实验组38例和对照组28例,眼部检查均有眼球运动障碍、复视、眼球内陷。两组患者在年龄、病因、病情程度、眼球运动障碍的严重程度等方面无差异。两组患者术前、术后均给予常规治疗护理。实验组在术后第1～3天,由责任护师了解手术经过及术后病情,向患者宣教手术后眼球运动训练对术后眼肌恢复的益处,讲清楚训练中的注意事项。术后第3天由责任护师对患者进行眼肌力评估,并依据面部肌力分级,确定肌力级别,制定出不同患者的训练计划。2周后回院复查,采用眼肌功能级别标准,对两组眼肌功能的恢复进行评定。结果实验组有效率89.47%(34/38),无效率10.53%(4/38);对照组有效率67.86%(19/28),无效率32.14%(9/28),实验组眼肌功能恢复明显优于对照组(χ2=4.793,P<0.05)。结论遵循系统循序渐进个体化的训练原则是提高眼眶暴裂性骨折术后患者眼肌功能、改善复视的较好方法之一。