人幽门螺杆菌UreB与Omp11双价疫苗载体的构建与鉴定

目的:构建含人幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)郑州分离株MEL HP27 ureB-omp11融合基因的重组表达载体.方法:利用分子克隆技术,扩增Hp UreB、Omp11编码基因及融合基因ureB-omp11,将融合基因ureB-omp11与载体pET30a( )进行酶切、连接,然后转化并筛选含有目的基因的重组载体.结果:酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp ureB-omp11融合基因,由2 280 bp组成.与GenBank报道的相比,核苷酸序列同源性为99.39%,氨基酸序列同源性为99.47%.结论:成功构建了MEL Hp27融合蛋白UreB-Omp11的双价疫苗重组载体,为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制奠定了良好的基础.     

幽门螺杆菌Omp22-HpaA融合基因工程菌蛋白的表达

目的:优化幽门螺杆菌Omp22-HpaA基因工程菌pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1的表达条件,并对其表达产物进行纯化和鉴定.方法:在不同诱导时机、不同诱导剂(IPTG)浓度和不同诱导时间条件下诱导pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1的表达,测定目的蛋白的表达量.在优化条件下诱导工程菌表达,并应用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,采用Amyloss树脂预装柱对可溶性Omp22-HpaA蛋白进行分离、纯化,对纯化后的蛋白行Western blot分析.结果:工程菌培养2 h时加入IPTG(终浓度为0.4 mmol/L)诱导7 h,目的蛋白Omp22-HpaA表达量达到菌体总蛋白的20%以上.经纯化得到了较高纯度(＞90%)的目的蛋白,并具有良好的免疫原性.结论:建立了从pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1可溶性表达产物中纯化较高纯度Omp22-HpaA融合蛋白的方法.     

耐喹诺酮类福氏志贺菌基因突变分析

目的研究福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因突变与其喹诺酮类药物耐药的关系.方法对临床收集的1株喹诺酮类药物敏感福氏志贺菌、2株喹诺酮类药物耐药程度不同的福氏志贺菌,对上述2个靶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增及核酸序列分析.结果首次发现临床分离喹诺酮类耐药福氏志贺菌parC基因突变,导致121,129,131,134,141,L51位5个位点氨基酸编码改变;耐药程度较高的菌株共发现gyrA、parC基因上6个突变位点,耐药程度较低的菌株发现gyrA基因1个突变位点.结论福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因和拓扑异构酶ⅣparC基因突变均与其喹诺酮类药物耐药有关,靶基因突变位点数量可能与喹诺酮类药物耐药程度有关,临床耐药株靶基因突变存在多态性.     

霍乱弧菌O139和El Tor菌株tcpA分子特征的研究

[目的]从霍乱弧菌XJ93006、MO45、XJ89079中克隆毒素协同调节菌毛亚单位A（tcpA）基因（包括侧序列）并测序比较。[方法]PCR扩增tcpA片段;克隆该片段;提取质粒经鉴定后测序并利用DNAMAN对该序列进行序列分析,比较。[结果]成功构建XJ93006、MO45、XJ89079 tcpA基因的重组质粒。三株霍乱弧菌及与N16961 tcpA基因及其两侧核酸序列同源性XJ89079和N16961为100%,XJ93006和XJ89079为99.8%,XJ93006和MO45为99.5%,XJ89079和MO45为99.7%。[结论]该研究初步认为我国新疆VC O139与本地EVC关系密切。     

幽门螺杆菌cagA基因对胃癌细胞影响

目的观察幽门螺杆菌（Hp）野生株与cagA基因同源缺失突变株对人胃癌细胞株BGC823的细胞增殖和凋亡的影响,探讨与Hp毒力基因cagA相关的细胞水平的毒性效应。方法将幽门螺杆菌野生株与cagA基因缺失突变株与BGC823细胞共培养,分别在6,12,24和48 h观察细胞形态学变化,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果野生株和突变株Hp攻击BGC823细胞6 h,即可引起细胞的形态学变化,48 h时均可观察到细胞形态呈分散及蜂鸟样改变（细胞拉伸）。MTT法检测显示,野生株对BGC823细胞增殖具有抑制作用,而缺失cagA基因的突变株可刺激细胞增殖,且在24,48 h的2个时间点上均高于对照组和野生株组（P〈0.05）。流式细胞分析显示,在攻击BGC823细胞48 h后,野生株和突变株均可引起细胞凋亡,凋亡率高于对照组（P〈0.05）,2个实验组的凋亡率差异无统计学意义。结论Hp作用后细胞呈分散和蜂鸟样改变（伸长）并不是cagA基因特有的细胞学效应;cagA基因是Hp抑制细胞增值所必需的元素;cagA基因的有无对Hp致凋亡效应的影响不大,在Hp致细胞凋亡的效应中作用可能有限。     

河南省人口老龄化现状调查

目的对河南省人口老龄化的现状进行分析，并提出对策建议，为政府及相关部门应对人口老龄化提供决策参考。方法利用人口普查资料和卫生事业发展资料，计算老年人口系数和人口老化系数等，对河南省人口老龄化现状、特点进行分析。结果2004年，河南省老少人口比为27．44％，比1990年的19．22％上升了8．22％；1982—2000年间，河南省人口老化系数增长了1．27％，人口老龄化的速度明显加快、程度不断加深。结论河南省人口老龄化趋势明显，必须从战略高度认识和重视老龄化问题。     

幽门螺杆菌基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的相关性

目的 探讨Hp基因型与慢性胃炎、消化性溃疡的关系。方法 对标准株和临床分离株幽门螺杆菌空泡毒素基因vacA和致病岛基因的cagA、cagE、cagT片段进行PCR扩增，对基因组DNA进行随机扩增多态性分析（RAPD），并以Hela细胞测定全部菌株的VacA毒素活性。SPSS13．0软件聚类分析进行基因分型。结果 全部菌株被分为3个型别，慢性胃炎、消化性溃疡和非胃炎非溃疡分别有自己的优势基因型，且各型之间的总体分布差异具有统计学意义。结论 Hp基因型与疾病类型有关，空泡毒素基因和致病岛基因可作为Hp基因分型的靶基因，RAPD是有效的基因分型手段。     

叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的：探讨叶黄素对食管癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：EC9706细胞在RPMI培养液(含10%小牛血清)中进行常规传代培养。常规条件下培养24 ｈ后,用叶黄素处理,同时设溶剂对照组和5-氟尿嘧啶(5-Fu)阳性对照组。采用流式细胞术观察叶黄素对细胞凋亡的影响,并用免疫组织化学方法检测其对凋亡调节蛋白Bax 和Bcl-2表达的影响。结果：在实验条件下,100 μg·mL^-1叶黄素处理细胞96 h可促进细胞凋亡。免疫组化分析结果表明,同样条件下,叶黄素可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达并促进促凋亡蛋白Bax的表达。结论：叶黄素具有促进EC9706细胞凋亡的作用,此作用可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax而实现的。     

骑自行车人与行人车祸伤害的流行病学特征

目的 :为控制和预防骑自行车人与行人的车祸伤害提供依据。方法 :采用描述流行病学方法 ,对 1996年郑州市机动车与骑自行车人和行人相撞的车祸资料进行分析。结果 :骑自行车人与行人的车祸伤害人数占该年总车祸伤害人数的 37.1% ,死亡人数占总死亡人数的 46 .6 % ,伤亡人员多为青壮年。骑自行车人与行人的车祸伤害主要发生在城市主干道、混合式道路、无交通控制方式的交通环境中 ;引起这类伤害的主要原因是驾驶员疏忽大意 ,骑自行车人抢道行驶和突然猛拐 ,行人违章穿行车行道。结论 :骑自行车人与行人车祸伤害是车祸伤害的重要组成部分。致伤原因是人们的交通安全意识差 ,没有按照交通规章行驶。因此 ,应加强交通法规的宣传和教育 ,提高人们的交通安全意识     

小鼠胚胎肢芽器官培养中锌对骨形成的影响

目的 通过研究锌缺乏／过量在骨形成过程中骨密度的变化,探讨锌影响骨代谢的机制,为发挥在骨质疏松中的治疗作用提供科学依据。方法 应用自制浸没式一次通气旋转装置对16天孕龄小鼠胚胎肢芽器官进行培养,采用钼钯X－ray乳腺机分析骨密度的变化。结果 锌缺乏组迁量补锌组Ⅲ与对照组相比,骨质较薄,长骨长度较短,骨密度降低,补锌组Ⅰ、Ⅱ与对照组相比,骨密度明显升高,长骨长度较长,骨质较厚。结论 提示适量补锌有促进骨形成,提高骨密度的潜在作用。