小鼠胚胎肢芽器官培养中锌对骨形成的影响

目的 通过研究锌缺乏／过量在骨形成过程中骨密度的变化,探讨锌影响骨代谢的机制,为发挥在骨质疏松中的治疗作用提供科学依据。方法 应用自制浸没式一次通气旋转装置对16天孕龄小鼠胚胎肢芽器官进行培养,采用钼钯X－ray乳腺机分析骨密度的变化。结果 锌缺乏组迁量补锌组Ⅲ与对照组相比,骨质较薄,长骨长度较短,骨密度降低,补锌组Ⅰ、Ⅱ与对照组相比,骨密度明显升高,长骨长度较长,骨质较厚。结论 提示适量补锌有促进骨形成,提高骨密度的潜在作用。     

耐喹诺酮类福氏志贺菌基因突变分析

目的研究福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因突变与其喹诺酮类药物耐药的关系.方法对临床收集的1株喹诺酮类药物敏感福氏志贺菌、2株喹诺酮类药物耐药程度不同的福氏志贺菌,对上述2个靶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增及核酸序列分析.结果首次发现临床分离喹诺酮类耐药福氏志贺菌parC基因突变,导致121,129,131,134,141,L51位5个位点氨基酸编码改变;耐药程度较高的菌株共发现gyrA、parC基因上6个突变位点,耐药程度较低的菌株发现gyrA基因1个突变位点.结论福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因和拓扑异构酶ⅣparC基因突变均与其喹诺酮类药物耐药有关,靶基因突变位点数量可能与喹诺酮类药物耐药程度有关,临床耐药株靶基因突变存在多态性.     

志贺菌中成簇规律间隔短回文重复序列的分子分布特征

目的 探索志贺菌中成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)的分布。方法 共选择志贺菌分离株52株, 其中河南41株, 江西6株, 北京5株。利用PCR扩增志贺菌的4个CRISPR位点(S1、S2、S3、S4), 产物送测序, 分析CRISPR的重复序列和间隔序列。结果 志贺菌的4个CRISPR位点阳性率分别为33. 69%(S1)、50.00%(S2)、82.69%(S3)和73.08%(S4);S1和S3包括2种亚型, S2有3种亚型, S4包括4种亚型。2004年前分离的河南分离株中检出S1位点, 2004年后分离的菌株中均未检出该位点;S2、S3和S4在两组的分布没有差异。结论 志贺菌各CRISPR位点含有不同亚型, 河南分离株S1的分布与细菌分离时间有关, 而S2、S3 及S4和分离时间无关。     

幽门螺杆菌融合基因hspA-ureB重组质粒的构建及其编码蛋白抗原性预测

目的：构建幽门螺杆菌(H．pylori)郑州分离株MEL-HP27的hspA-ureB融合基因的克隆,并运用生物信息学软件预洲融合蛋白HspA-UreB的空间结构和抗原性。方法：从重组质粒pNHA27和pNUB27分别纯化同收hspA和ureB基因片段,并以hspA-ureB的顺序插入温控表达载体pBV220中,用质粒酶切电泳和特异PCR方法鉴定重组质粒。利用生物信息学软件和Genbank数据库分析hspA-ureB表达蛋白的抗原性和空间结构。结果：质粒酶切电泳和特异PCR均可见2．06kb的融合基因片段。生物学软件分析显示：MEL-HP27融合蛋白HspA-UreB的长度为689个氨基酸,蛋白相对分子质量为76500,等电点为5．79,具有5个抗原活性结构域。结论：成功构建了MEL-HP27融合蛋白HspA-UreB的重组表达质粒,编码融合蛋白具有典型抗原分子的结构特征,有望成为H.pylori疫苗候选抗原。     

河南省居民慢性病患病情况及社会学多因素Logistic分析

目的：探讨河南省居民慢性病患病现状及其影响因素。方法：采用随机分层抽样方法抽取河南省3000名居民,应用世界卫生组织制定的渊查表进行问卷调查。结果：46．4％的调查对象未患任何一种慢性病,患1种、2种、3种及以上慢性病的分别为26．9％、13．2％和23．5％,总慢性病例次患病率达107．7％,城市为119．8％,农村为101．2％,男性为116．0l％,女性为124．28％,前4位依次为视力问题、胃炎或胃溃疡、压抑或焦虑和背痛或椎间盘问题。多因素Logistic回归分析显示性别、年龄、职业、医疗支出是慢性病的主要社会学影响因素。结论：河南省居民慢性病患病率处于高水平,慢性病预防控制策略和措施亟待加强,应更加关注女性、老年人、失业者。     

新疆O139群霍乱弧菌93006菌株基因组文库的构建

目的：构建我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株(93006菌株)的基因组文库,为研究我国O139群霍乱弧菌的来源及其基因组特征提供资料。方法：制备霍乱弧菌高相对分子质量的基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组。DNA部分酶切成平均大小为32∽40kb的片段,将部分酶切并经碱性磷酸酶(CIAP)处理的DNA片段与经XbaI、CIAP、BamHI处理的粘粒载体SuperCosl的载体臂相连接,连接产物经体外包装并转染大肠杆菌XL-BluelMR,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,构建霍乱弧菌的基因组文库。结果：该文库共获得了1200个单克隆,平均插入片段的大小为32kb,空载率为0．05％,相当于9个库容量,从本文库中筛选到任一霍乱弧菌的DNA单拷贝序列的机率为99．98％,该文库能承受7次反复冻溶。结论：成功构建了我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株93006的基因组文库,为进一步克隆霍乱弧菌的基因和研究我国O139群霍乱弧菌的来源奠定了基础。     

SARS-CoV-2 Nsp8基因及蛋白分子特征探讨

  目的  SARS-CoV-2感染不仅引起呼吸系统病变，且可能累及生殖系统及中枢神经系统。本研究探讨SARS-CoV-2 nsp8基因变异、Nsp8蛋白结构与生物学功能及靶向药物，为建立更有效的防控策略奠定基础。  方法  采用生物信息学技术和大型生物数据库，分析nsp8基因变异性、Nsp8理化特征、空间结构、抗原表位、生物功能、药物结合靶点等。  结果  基于3种28株冠状病毒的nsp8序列构建了进化树；SARS-CoV-2毒株间nsp8基因保守性为99%~100%，与SARS遗传距离较MERS近；Nsp8无信号肽及跨膜区；在体外网织红细胞内半衰期为4 h，具有亲水性；获得Nsp8二级和三级结构模型；Nsp8具有线性B细胞和CTL细胞抗原表位、磷酸化及SUMO修饰位点；从DrugBank数据库筛选出可靶向结合Nsp8的四种药物。  结论  Nsp8具有典型抗原分子特征，参与病毒复制，且同种不同株nsp8基因高度保守，在病毒致病机制、分型及防治研究中具有应用潜力。在全球亟需新型冠状病毒肺炎特效防治措施的状况下，靶向结合Nsp8的化疗药物具有重要科学意义和应用价值。     

幽门螺杆菌UreB蛋白对小鼠的免疫调节作用

目的鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)UreB蛋白对小鼠的免疫调节作用,为H.pylori致病机制和免疫防治研究奠定基础。方法利用前期纯化制备的由大肠杆菌(Escherichia Coli,E.coli) TB1/pMAL-c2x-UreB表达的H.pylori UreB重组蛋白(rUreB),对实验组小鼠进行背部皮下注射,对照组采用蛋白纯化过柱缓冲液(Column buffer)替代重组蛋白注射液。在注射后1周和2周采集小鼠血液样品,进行血细胞常规计数和淋巴细胞流式分析。对比分析实验组与对照组小鼠血液免疫细胞构成比的差异。结果全血细胞计数显示,实验组红细胞(RBC)和白细胞(WBC)计数与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);在rUreB免疫后1周,小鼠外周血CD4~- CD3~+ T细胞和CD3~+ T细胞在总淋巴细胞中所占构成比均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);2周后,组间差异无统计学意义(P0.05);CD4~+ CD3~+ T淋巴细胞与总淋巴细胞比值、CD4~+ CD3~+与CD4~- CD3~+T淋巴细胞比值在免疫组与对照组间的差异无统计学意义(P0.05)。结论 H.pylori UreB经皮下注射可改变淋巴细胞亚群的构成比,且该效应具有明显时效性特征。该研究发现,对H.pylori感染免疫和致病机制的研究具有参考价值。     

Budd-Chiari综合征与抗磷脂抗体综合征的相关性研究

对74例Budd-Chiari 综合征(BCS)患者和41例健康者分别抽取外周静脉血,离心分离血浆,应用酶联免疫吸附试验测定抗心磷脂抗体IgG和IgM.发现BCS患者IgG抗体阳性率为5.4%, 对照组无IgG抗体阳性,二者间无统计学差异(P>0.05);所有受试者均无抗心磷脂IgM阳性者.认为我国BCS主要病因可能不是抗磷脂抗体综合征造成的.