小肠结肠炎耶尔森菌O∶3与O∶9混合培养竞争关系

目的 探讨相对等量混合培养情况下不同血清型(O:3、O:9)小肠结肠炎耶尔森菌菌株是否存在竞争关系.方法 将O:3、O:9菌株等量混合于100 mL Luria-Bertani(LB)培养液内作为实验组,另将O:3、O:9单独培养于100 mL LB培养液中作为对照组,28℃培养,每隔3h取各组菌液涂板进行菌落计数,并以O:3单克隆抗体鉴定各菌落血清型.结果 在混合培养条件下,O:3在生长峰值处的生长量均较单独培养时有所下降;在培养21、33、39 h时,O:3单独培养生长量分别是混合培养的4.40、5.81、4.79倍,在生长高峰阶段表现出明显抑制(P＜0.05);混合培养对O:9生长量无明显影响;在生长速度方面,2种血清型在混合培养和单独培养条件下均未表现出明显差异.结论 混合培养时,O:3对O:9的生长量无明显抑制作用,但O:9对O:3具有一定抑制作用.     

马鞍山市志贺菌福氏4c亚型毒力基因检测及分子分型研究

目的了解马鞍山市志贺菌福氏4 c(ShigellaF4c)分离株的毒力基因的流行模式及分子分型的特点,掌握Shi-gellaF4c在该市的流行状况。方法使用常规法进行菌株分离培养、使用全自动微生物鉴定系统进行生化鉴定,鉴定为志贺菌的阳性菌株使用PCR检测ShigellaF4c的ipa H、ial、set、sen四种毒力基因及应用PFGE进行分子分型。结果 ipa H、ial、set、sen四种毒力基因在76株ShigellaF4c的携带率分别为100%、97.4%、96.1%、90.8%,其中67株ShigellaF4c四种毒力基因全为阳性,占88.2%;本地区ShigellaF4c携带毒力基因模式分成五大类型,Ⅰ型是主要毒力基因模式。PFGE电泳条带图谱显示,ShigellaF4c中100%相同的菌株数较少;100%相同的都为同一年代,91%相同的菌株出现跨年度;不同年代分离株无完全相同基因型,地域方面没有明显联系。结论马鞍山地区S.F4c分离株携带ipa H、ial、set、sen四种毒力基因普遍存在,毒力强是本地区ShigellaF4c主要特征之一;ShigellaF4c在本地区无显著的流行迹象,属于散在发病。     

171株小肠结肠耶尔森菌的病原学特征

目的研究徐州地区分离的171株小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica,Y.e)的病原学特征及其动态变化。方法通过血清学分型,生物分型,毒力基因检测,分析不同时代分离株的致病性。通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析Y.e的分子流行病学特征。结果不同时代分离株的优势型别始终为O:3血清型。非致病菌型是近年分离的Y.e菌株的优势菌型。O:3血清型菌株其狗源株和人源株的PFGE带型完全相同。结论不同时代分离菌株的毒力分布特征发生了很大的变迁,O:3血清型菌株流行比较稳定,菌株变异较小。     

假结核耶尔森菌毒力相关基因的检测及序列分析

目的对来自不同血清型的29株假结核耶尔森菌的主要毒力相关基因进行检测及序列分析,初步了解假结核耶尔森菌主要毒力基因的分布与变异情况。 方法应用的聚合酶链反应（PCR）技术进行血清学分型与毒力基因（inv、pYV、HPI毒力岛、ypm）检测,并对ypm基因扩增基因进行测序比较。 结果29株实验菌株均携带编码侵袭素的inv基因,15株携带毒力质粒（pYV）,13株携带全部或部分HPIs基因簇,19株携带ypmA基因,1株携带ypmB基因,1株携带ypmC基因 。结论假结核耶尔森菌毒力基因的分布具有一定的多态性。     

血清2型猪链球菌全菌体蛋白的免疫蛋白质组学研究

目的寻找血清2型猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)全菌体蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗侯选抗原的筛选提供线索。方法采用免疫蛋白质组学技术,分析和研究血清2型S.suisSC84菌株全菌体蛋白中能与猪链球菌病人恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对这些蛋白进行鉴定。结果S.suisSC84全菌体蛋白与3份猪链球菌病人恢复期血清进行免疫杂交反应,发现8个与IgG抗体发生阳性反应的蛋白点。经MALDI-TOF-MS鉴定,这8个蛋白分别为溶菌酶释放蛋白(MRP)、琥珀酸脱氢酶/延胡索酸还原酶黄素蛋白亚单位(SDHFp/FRDFp)、触发因子(TF)、延长因子G(EF-G)、细菌糖磷酸转移酶系统甘露糖特异ⅡAB亚单位(PTS/MAN-IIAB)、丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶(6-PFK)、色氨酸-tRNA合成酶(TrpRS)。MRP定位于胞壁;TF、PTS/MAN-IIAB、PK及TrpRS定位于胞质;SDHFp/FRDFp、EF-G及6-PFK定位于胞外。并且确定了它们在S.suis05ZYH33菌株基因组的编码基因。结论在S.suisSC84全菌体蛋白中发现8个抗原活性蛋白,其中SDHFp/FRDFp、TF、EF-G、PTS、PK、6-PFK及TrpRS是在S.suis新发现的抗原性蛋白,它们作为特异诊断抗原和疫苗侯选抗原的前景有待进一步研究。     

抗坏血酸克吕沃菌脉冲场凝胶电泳分型方法的建立

目的建立适于抗坏血酸克吕沃菌的PFGE分型方法。方法参考PulseNet中大肠杆菌O157∶H7的PFGE分型方法,选择不同的限制性内切酶和不同的电泳参数,进行反复试验,来确定用于抗坏血酸克吕沃菌PFGE分型的具有高分辩能力的限制性核酸内切酶和电泳参数。结果5株抗坏血酸克吕沃菌经限制性内切酶XbaI、SpeI、BlnI酶切后,再经我们选定的参数电泳,可呈现理想的PFGE带型,具有良好的分型能力。而NotI、SmaI酶切后产生的片段绝大部分集中在200kb以下,且图谱上条带过于密集而难以明确区分。结论利用限制性内切酶XbaI、BlnI和SpeI的PFGE分型方法对抗坏血酸克吕沃菌都具有较好的分辨能力,都可以用于该菌的分子分型,但应优选限制性内切酶BlnI、XbaI。     

小肠结肠炎耶尔森菌耐热性肠毒素B基因(ystB)初步研究

目的研究小肠结肠炎耶尔森菌的耐热性肠毒素B基因(ystB)的分布特征。方法通过聚合酶链反应(PCR)、DNA探针杂交方法与序列分析检测致病性和非致病性小肠结肠炎耶尔森菌携带ystB基因的情况。结果98株非致病性小肠结肠炎耶尔森菌中52株携带ystB基因,占53.06%。全部48株致病性小肠结肠炎耶尔森菌均不携带该基因。结论ystB基因仅存在于部分生物1A型非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,而不存在于致病性菌株中。     

小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性单克隆抗体制备

目的　制备出小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型特异的单克隆抗体。方法　用常规的骨髓杂交瘤融合技术。结果　筛选到了一株针对于小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性的克隆株 (编号 :Y6H8) ,且证实分泌的抗体属于针对于脂多糖免疫球蛋白IgG ,可用于玻片凝集法鉴定 0∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌。 结论　通过本实验证实小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型菌株脂多糖存在其特异性成分 ,可用于该菌株的分型鉴定.     

一种快速检测患者血液标本猪链球菌方法的研究

目的建立一种快速检测患者血液标本中猪链球菌的方法。方法收集患者血液标本。提取细菌金基因组DNA；根据猪链球菌6个特异基因设计引物，采用PCR技术对这些基因进行检测，并对PCR扩增阳性的基因产物进行序列分析验证，并分析该方法诊断猪链球菌病的特异性和敏感性。结果取唾液链球菌等6种链球菌进行验证，该检测方法的特异性为100％。模拟标本（细菌含量〉10^3个／ml）的敏感性为100％，血培养阳性病人标本的敏感性为100％。通过对90份血培养阴性临床标本的检测，9份PCR结果阳性，序列分析结果证实扩增片段为目的基因。结论该方法灵敏、特异、快速。可直接用于患者血液标本的猪链球菌特异性基因的检测，为猪链球菌感染的早期诊断提供实验室依据。     

致病性耶尔森菌感染与细胞因子相关性的研究进展

目的病原体感染机体后会引起相关的细胞因子发生变化,细胞因子的变化是病原体与感染的机体相互作用的结果。本文主要综述了鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌这三种致病性耶尔森菌感染后机体细胞因子变化的研究进展,主要包括致炎性细胞因子和抑炎性细胞因子的变化。