小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定。方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定。结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O∶9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同。结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O∶9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验。     

O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌主要毒力基因分布调查

目的　了解我国常见致病性血清型毒力基因的分布情况。方法　参照国外发展成熟的聚合酶链反应(PCR)技术进行毒力基因检测。结果　实验证实在我国分离到的主要流行血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因分布特征为 :ail 、ystA 、ystB-、yadA 、virF 占 5 6.2 % ;ail 、ystA 、ystB-、yadA-、virF-占 2 5 .6% ;其他型占18.2 %。结论　通过实验证实在我国引起感染暴发和流行的血清型O∶3和O∶9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因的分布主要为 :ail 、ystA 、yadA 、ystB-、virF 型 ,很少部分的ail 、ystA 、ystB-、yadA-、virF-根据以前的资料被认为是毒力质粒丢失的结果 ,其他型很有可能是非致病的菌株。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌不同温度下生长预测模型的初步研究

目的研究小肠结肠炎耶尔森氏菌(以下简称耶氏菌)O:3和O:9血清型在增菌液MTSB中关于温度的生长模型。方法用液体稀释法计细菌总量,并应用此模型来预测耶氏菌O:3和O:9血清型在有效的生长温度下的生长速率,世代时间,迟缓期及不同时间的生长菌数.并比较相同条件下耶氏菌O:3与O:9血清型之间生长速率的差异。结果耶氏菌O:3血清型的最低生长温度为-17·8℃,耶氏菌O:9血清型的最低生长温度为-10·3℃,在增菌液MTSB中的生长模型:耶氏菌O:3血清型为M=0·0134(T-255·1866),耶氏菌O:9血清型为M=0·0173(T-262·7457)。结论在4~30℃的温度范围内,它们的生长速率都随着温度的升高而增加,而在4℃到15·7℃之间时,耶氏菌O:3血清型的生长速率大于耶氏菌O:9血清型,在15·7~30℃之间时,则耶氏菌O:9血清型的生长速率大于耶氏菌O:3血清型。     

小肠结肠炎耶尔森菌O:9血清型特异性单克隆抗体筛选及其应用

目的利用杂交瘤技术筛选出能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型特异性单克隆抗体的细胞株,用于该型菌株的鉴定.方法采用ELISA方法筛选克隆株,并用玻片凝集法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果筛选到3株能分泌小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌的抗体与经鉴定的18株小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型菌株呈阳性反应,而与其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌及常见肠道致病菌无交叉凝集反应;应用于小肠结肠炎耶尔森菌野生株分型鉴定时,能准确鉴定出其中的24株O：9血清型菌株,与用日本进口分型血清鉴定、PCR毒力基因检测结果相同.结论筛选获得的细胞株产生的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O：9血清型鉴定,具有很好的型特异性,避免了过去免疫血清制备中繁琐的抗原交叉吸收试验.     

福建O：9与O：3型小肠结肠炎耶氏菌分子流行病学特征的研究

小肠结肠炎耶氏菌（Y.：）O：3和O：9型是引起人类Y.e菌病的最主要菌型，福建省Y.e的血清型以O：3为主动、O：9其次。我们从分子生物学的角度对福建省不同地区、不同来源的Y.二：3型菌株之间的差异进行了分析研究，进一步阐明了福建省O：3型Y.e流行病学的特征。为进一步了解O：9型Y.e各菌株之间的差异以及与0：3型Y.e在流行病学特征上的差异，本文应用毒力质粒DNA限制性内切酸酶切图谱分析的方法对两种血清型各菌株之间的差异进行了研究，现将结果报道如下。1材料与方法1.1＄株1.且.且O：3型Y.e＊＊”菌12株＊34等，分离自福建不同…     

嗜肺性军团杆菌培养基(BALM)的研究

蓝藻培养液能促进嗜肺性军团杆菌的生长,将此培养滤液适量加入参照硝酸铁培养基配方用国产试剂自制的基础培养基(LM)中,制成蓝藻培养基(BALM)。嗜肺性军团杆菌第6血清型标准株在BALM上形成菌落的能力优于BCYE;第1血清型标准株在两种培养基上的菌落形成能力较接近。从临床标本中分离NANJ-1株的结果表明,该菌株在BALM上的生长时间、菌落大小优于BCYE和其他几种培养基。     

低浓度O3和NO2对小鼠气道炎症单独及联合作用

目的 探讨O3和NO2单独和混合暴露对小鼠气道的损伤和炎症水平影响.方法 将80只清洁级BALB/C小鼠随机分为8组:其中4组为致敏模型组(根据暴露不同分为空气对照组、O2组、NO2组及混合暴露组),另外4组为非致敏组(分组同前).O3暴露浓度采用0.16 mg/m3,NO2为0.30 mg/m3,每天暴露2 h,连续7 d.暴露完成后处死动物进行气管灌洗,取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和细胞因子含量检测.结果 致敏组中,NO2和O3单独和混合暴露后均可导致BALF中性粒细胞比例、IL-6水平明显升高(均为P＜0.05),,其中O3单独暴露和混合暴露还导致IL-2和MDA的明显升高(均为P＜0.05);非致敏组中,只有O3暴露和混合暴露可引起BALF细胞总数、中性粒细胞比例增高和IL-2、IL-6、MDA水平明显升高(均为P＜0.05),且致敏组IL-2和IL-6水平高于相同暴露条件非致敏组(P＜0.05);混合暴露时致敏小鼠气道内细胞总数和MDA明显高于O3或NO2单独暴露(P＜0.05).结论 O3和NO2暴露均会加重致敏小鼠气道炎症,其中O3暴露还会引起非致敏小鼠气道炎症发生,引起炎症反应均是以中性粒细胞增高为主要特征;混合暴露对小鼠气道炎症存在联合作用;相对于非致敏小鼠,致敏小鼠对O3和NO2暴露更敏感.     

一起两种血清型副溶血性弧菌食物中毒的毒力基因及分子分型研究

目的:对一起两种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究。方法:参照WS271-2007等标准对10名病人的肛拭进行致病菌的检测,对分离的副溶血性弧菌进行血清学试验;运用荧光定量PCR检测分离菌株的毒力基因,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果:10份样本均检出O4:K8血清型副溶血性弧菌,其中5份样本同时检出O3:K6血清型副溶血性弧菌。两种血清型的副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh阳性、trh阴性。PFGE分型显示,同一血清型的菌株为高度相似克隆,相似度在92.9%～100%之间,同一样本不同血清型的菌株为不同克隆。结论:这是一起由O4:K8和O3:K6两种血清型副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒。     

深圳地区2002-2008年副溶血弧菌分子特征研究

目的了解深圳地区副溶血弧菌主要血清型和分子分型以及毒力因子分布,分析新O3:K6型克隆群与国际流行株的进化关系.方法对2002-2008年深圳地区1005株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型;采用荧光PCR方法对68种不同血清型的28 1株副溶血弧菌进行tlh、toxR、tdh和trh毒力基因检测;对281株菌株进行orf8检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对不同分离时间的5种主要血清型菌株进行分子分型,根据有代表性的分子分型图谱选取82株副溶血弧菌菌株进行GS-PCR检测,并选取60株副溶血弧菌菌株进行toxRS基因测序;进而对41株O3:K6和O1:K25副溶血弧菌菌株进行多位点序列分型(MLST)分析,采用eBURST软件分析进化关系.结果1005株菌共得到79种不同的血清型,主要血清型为O3:K6、O4:K8、O1:K25、O1:KUT、O4:K68、O1:K56和O9:K44,所占比例分别为57.9%、8.16%、5.27%、5.87%、1.39%、1.39%和0.99%.243株为tlh+、toxR+、tdh+、trh-,37株为tlh+、toxR+、tdh-和trh-,1株tlh+、toxR+、tdh+和trh+.35株O3:K6型菌株的MLST序列类型为ST3,是同源复合体CC3,O4:K8型副溶血弧菌的序列类型为ST189,无同源复合体.结论深圳地区主要流行的副溶血弧菌为tdh+、trh-的O3:K6、O4:K8和O1:K25菌株,2006年后出现O1:K56、O9:K44、O3:K29、O4:K9新的血清型;其中O3:K6血清型属于新的O3:K6克隆群,与其他国家流行的副溶血弧菌属于同一克隆群,同时也存在新、旧克隆群.血清的多样性和新旧克隆群的存在是造成深圳地区副溶血弧菌腹泻病高发态势的主要原因之一.     

福建省O157∶H7大肠杆菌毒力及特征基因的初步研究

[目的]对福建省分离的80株E. Coli O157∶H7菌株进行毒力及特征基因的检测分析.[方法] 应用聚合酶链反应 (PCR),以志贺毒素基因 (stx)、粘附抹平因子基因 (eaeA)、溶血素基因(hlyA)、O157抗原编码基因 (rfbO157) 和H7抗原编码基因 (fliCH7) 为靶基因进行检测.[结果] 福建省分离的O157∶H7菌株毒力基因携带率为6.25%(5 / 80). 菌株毒力基因图谱为stx+eaeA+hlyA和eaeA+hlyA.rfb O157 基因阳性与O157血清型符合率为100 %.[结论] 福建省分离的O157∶H7菌株毒力基因携带率 (6.25%) 低于江苏省疾病高发地区 (85.7%,P<0.05).     

沙门菌在皮蛋中的定量生长状况分析

目的了解不同血清型在皮蛋中生长状况以及定量生长情况,为定量风险评估和预防控制食源性疾病提供基础数据和科学依据。方法通过人工染菌的方法将3种血清型的102和105CFU的菌量分别注射入鸭蛋中,按照皮蛋的生产制作工艺制成皮蛋,在室温下储存,从存储1~227 d,分10次取出,通过菌落计数分析在皮蛋中生长状况。结果 3种血清型均能在皮蛋中生存和生长,不同浓度菌株进入皮蛋中24 h候后均能迅速生长至109。结论不同血清型均能在皮蛋中生长并长期存活。     

肿瘤坏死因子和干扰素对肠上皮紧密连接的破坏作用

目的:了解肿瘤坏死因子(TNF-α)和干扰素(IFN-γ)对上皮细胞功能的作用,研究TNF-α和IFN-γ与上皮细胞屏障功能的关系. 方法:T84细胞株用加有5%胎牛血清的DMEM/F-12 混合培养液培养.实验分为四组:即对照组、TNF-α处理组、IFN-γ处理组和TNF-α与IFN-γ联合处理组.TNF-α处理组和IFN-γ处理组细胞分别用加有10 ng/mL TNF-α和100 U/mL IFN-γ的培养液处理72 h.各细胞因子联合处理组用100 U/mL IFN-γ处理19 h后,再加入10 ng/mL TNF-α.用EVOM电压电阻仪测定细胞跨膜电阻抗(TER)变化,用透射电镜观察细胞紧密连接的形态改变. 结果:IFN-γ单独处理48 h后,TER降低至78.06%,培养至72 h降低为59.31%.在单一TNF-α作用下,24 h后TER值逐渐降低,72 h 降低至56.82%.与对照细胞相比,TNF-α和IFN-γ联合处理的T84细胞株TER值显著降低,72 h TER值为20.88%,表明细胞紧密连接的结构破坏. 结论:TNF-α和IFN-γ损伤T84细胞株的紧密连接屏障功能,两者具有协同作用.     

2008年广东省食物中毒副溶血弧菌分子特征研究

目的了解2008年广东省副溶血弧菌食物中毒分离株的血清分型及分子特征。方法对2008年广东省14起副溶血弧菌食物中毒事件中90株分离自病例和9株分离自相关食物的菌株进行血清分型,耐热溶血素基因（tlh）、耐热直接溶血素相关基因（trh）和耐热直接溶血素基因（tdh）PCR检测以及选取优势菌型O3∶K6和O4∶K8血清型进行ER IC-PCR分子分型。结果 90株病例来源菌株以O3∶K6（62.2%）和O4∶K8（14.4%）血清型为主,9株食物来源菌株血清型别多样,无优势菌型,且同时分离到病例及食物来源菌株的4件事件中有3起食物来源菌株的血清型与同一事件中从病例分离到的血清型不同。PCR检测发现,99株副溶血弧菌tlh基因均为阳性,trh基因均为阴性,tdh基因88株阳性,其中食物来源菌株tdh基因阳性率为11.1%（1/9）,病例来源菌株tdh基因阳性率为96.7%（87/90）。选取22株O3∶K6血清型和10株O4∶K8血清型菌株（均分离自病例）进行ER IC-PCR分子分型分析,结果显示,2种血清型菌株可分为8个ER IC型别,且可区分为2类不同的聚类,这2类聚类之间的相似值为54.7%。同1起食物中毒事件中分离到的O3∶K6或O4∶K8血清型,其ER IC型别表现出多样性;而不同食物中毒事件中分离到的O3∶K6或O4∶K8血清型,部分菌株ER IC型别表现出100%的相似性。结论广东省副溶血弧菌食物中毒分离株血清型多样,同一血清型菌株存在遗传多样性,一群遗传关系密切的trh阴性、tdh阳性的O3∶K6和O4∶K8血清型为副溶血弧菌食物中毒优势菌型。     

大肠埃希菌O157∶H7的流行病学研究近况

在威胁人类健康的病原性大肠埃希菌中,肠出血性大肠埃希菌(Entero-hemorrhagic E.coli,EHEC)的主要血清型菌株O157∶H7,是近年来新发现的危害严重的肠道致病菌.     

小肠结肠炎耶尔森氏菌O_3血清型生物3型菌株的致病性

许多国家已经报道小肠结肠炎耶尔森氏菌 O3血清型生物4型、O8血清型生物1型、O9血清型生物2型和 O5∶27血清型生物2型菌株是引起人胃肠炎及导致败血症或继发性后遗症(如关节炎等)的病原菌。在日本,已从临床病例及健康动物中分离到 O3血清型生物4型菌株。但有学者从临床和健康猪体内分离到一种属于 O3血清型生物3型的小肠结肠炎耶尔森氏菌,该菌株发酵乳糖、木糖和山梨糖,VP 反应阴性。本文作者从临床     

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 StxⅡ基因表达

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157∶H7StxⅡ基因表达,并评价其对细菌生长的影响及细胞毒性。方法针对EHEC O157∶H7StxⅡ基因设计引物,构建CRISPR/Cas9表达质粒pdCas9-StxⅡ并转化EHEC O157∶H7感受态细胞,采用RT-PCR及胶体金法检测StxⅡ基因表达情况,绘制菌株生长曲线,将菌株培养上清液接种Vero细胞观察细胞病变情况。结果测序分析显示pdCas9-StxⅡ表达质粒被成功构建;转化EHEC O157∶H7(00G097)感受态细胞后,StxⅡ基因mRNA、蛋白表达均受抑制,EHEC O157∶H7生长曲线未受影响(P值均0.05)。pdCas9-StxⅡ-00G097菌株培养上清液对细胞的毒性效应(CPE为30%)显著低于对照菌株00G097和pdCas9-00G097(CPE均80%)。结论成功构建的pdCas9-StxⅡ表达质粒能特异抑制EHEC O157∶H7StxⅡ基因表达、降低细胞毒性,为进一步研究志贺毒素StxⅡ在EHEC O157∶H7致病机理和基因工程减毒活菌苗奠定了基础。     

河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布状况及菌株的毒力研究.方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析.结果:共采集食品530份,检出O157∶H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%.其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%.5株O157∶H7菌株中,4株带有SLT2、eae和Hly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和Hly 4种毒力基因.结论:掌握食品中O157∶H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义.     

O:3和O:9小肠结肠炎耶尔森菌主要毒力基因分布调查

目的了解我国常见致病性血清型毒力基因的分布情况。方法参照国外发展成熟的聚合酶链反应(PCR)技术进行毒力基因检测。结果实验证实在我国分离到的主要流行血清型O：3和O：9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因分布特征为：ail^ 、ystA^ 、ystB^-、yadA^ 、virF^ 占562％；ail^ 、ystA^ 、ystB^-、yadA^-、virF^-占25．6％；其他型占18.2％。结论通过实验证实在我国引起感染暴发和流行的血清型O：3和O：9小肠结肠炎耶尔森菌毒力基因的分布主要为：ail^ 、ystA^ 、yadA^ 、ystB^-、virF^ 型，很少部分的ail^ 、ystA^ 、ystB^-、yadA^-、virF^-根据以前的资料被认为是毒力质粒丢失的结果，其他型很有可能是非致病的菌株。     

脱细胞异体真皮基质的遗传毒性研究

目的:检测医疗器械注册产品脱细胞异体真皮基质的遗传毒性.材料与方法:以产品浸提液为供试液,采用细菌回复突变试验(Ames 试验) 和小鼠淋巴瘤细胞试验(MLA),在非代谢活化(-S9) 和代谢活化(+S9) 条件下检测.Ames 试验采用平板掺入法,检测了50 、100 、200 μl/ 皿3个剂量组诱发鼠伤寒沙门氏菌TA98 、TA100 、TA1535 、TA1537 及大肠杆菌WP2 uvrA 的回变菌落数;MLA 检测了终浓度2.5% 、5% 、10% (V/V) 3 个浓度组,在+S9/3 h、-S9/3 h 、-S9/24 h 三种处理条件下诱发的L5178Y 细胞TK 基因突变频率(MF) 和小集落突变百分率(SC%).结果:未经复水处理所得样品浸提液诱发五株菌的回变菌落数,对比氯化钠注射液溶媒(阴性)对照组均无明显增加;-S9/3 h 处理条件下诱发的MF 明显增加(P<0.01),且具有浓度相关性;复水处理后所得样品浸提液,在-S9/3 h 、24 h 条件下诱发的MF 均无明显增加.结论:脱细胞异体真皮基质对测试菌株his-/trp-无明显诱变作用,未经复水处理时在-S9 条件下对测试细胞tk-+/-及染色体具明显损伤作用,经复水处理后无明显损伤作用.产品在非代谢活化条件下表现出的阳性结果可能与其附加的冷冻保护剂有关.     

在化妆品菌落总数测定中应用TTC的探讨

目的：探讨在化妆品菌落总数测定中加入TTC后对结果的影响及应用TTC的安全浓度。方法：应用1～5mg／100ml TTC营养琼脂对G^-杆菌、G^＋杆菌、G^＋球菌、G^-弧菌和真菌的代表菌株进行菌落总数测定，观察菌落的生长、显色、大小变化。结果：TTC对G^-杆菌、G^-弧菌和真菌代表菌株在1～5mg／100ml内生长、显色、大小变化较少；G^＋杆菌在≤2mg／100ml、G^＋球菌在≤4mg／100ml TTC营养琼脂内生长，红色随浓度的增加而加强，菌落直径随浓度升高而变小。结论：应用5mg／100ml用于菌落计数对G^＋有明显的抑制作用，建议应用2mg／100ml的TTC浓度做化妆品菌落总数测定。