小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体的制备

目的 利用杂交瘤技术制备小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株的分型鉴定.方法 用小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株作为抗原,以骨髓杂交瘤细胞融合技术制备小肠结肠炎耶尔森单克隆抗体,用玻片凝集筛选法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果 筛选到1株与小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株呈现阳性反应,并与日本的抗血清检测结果相一致,而与被检测的其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌和常见肠道致病菌无交叉凝集反应.结论 本实验筛选获得的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株鉴定,具有良好的特异性,避免了免疫血清难以避免的交叉凝集现象.     

河南省2011-2013年小肠结肠炎耶尔森菌监测结果分析北大核心CSCD

目的了解河南省小肠结肠炎耶尔森菌的宿主分布、血清学及毒力基因情况。方法于2011—2013年采集腹泻病人粪便、各类家禽家畜粪便、苍蝇以及生熟肉制品涂抹标本,共6 057份,采用冷增菌方法进行目的菌分离。对不同宿主样本中分离到的小肠结肠炎耶尔森菌进行系统生化鉴定、血清学分型和毒力基因PCR检测。结果 6 057份样本中共分离出288株小肠结肠炎耶尔森菌,检出率为4.75%。所分离的小肠结肠炎耶尔森菌主要血清型是O∶8和O∶5,生物分型以1A为主。O∶3血清型多具有致病性,其中以猪分离株最多。结论河南省小肠结肠炎耶尔森菌在人群和各类动物中均有存在,猪是小肠结肠炎耶尔森菌致病性菌株的主要宿主。     

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7引起的溶血性尿毒综合征患者血清抗体调查

目的　对 1999年某地出现的一批先有腹泻病症状后继发急性肾功能衰竭 (肾衰 )的患者进行血清学调查和诊断。方法　使用基因克隆表达纯化的肠出血性大肠埃希菌 (EHEC) -溶血素(Hly)和EHECO15 7脂多糖 (LPS)为抗原 ,对采集自 4 2例肾衰患者的血清标本进行蛋白印记试验。结果　EHEC Hly的检测发现 ,IgG抗体阳性 2 1份 ,阳性率5 0 .0 % ;IgM抗体阳性 16份 ,阳性率38.1% ;在 11份标本中同时检测到IgG和IgM抗体 ,阳性率2 6 .2 % ;检测到IgG或IgM抗体阳性的标本 2 6份 ,阳性率 6 1.9%。EHECO15 7LPS的检测发现 ,2 4份标本分别检测到IgG和IgM抗体 ,阳性率各为 5 7.1% ;在 2 9份标本中检测到IgG或IgM抗体 ,阳性率6 9.0 % ;在 2 0份标本中检测到IgG和IgM抗体 ,阳性率4 7.6 %。在 4 2份血清标本中同时检测到EHEC Hly和O15 7LPS的特异性抗体的标本 2 2份 ,阳性率 5 2 .4 % ;检测到EHEC Hly或O15 7LPS的特异性抗体的标本 34份 ,阳性率81.0 %。结论　结合细菌学和血清学诊断结果、临床症状和流行病学分析 ,可以认为这些患者感染了EHECO15 7∶H7。在分离不到病原菌的情况下 ,检测患者血清标本的EHEC Hly和 /或EHECO15 7LPS的特异性抗体 ,不失为一种可以考虑的诊断方法     

口腔溃疡和口舌糜烂治验

口腔溃疡(肾阳不足,虚火上炎)(?)××,女,3后岁。门诊号:21—155。初诊:1977年3月23日。多发性口腔溃疡5天。舌面舌边以及内唇上下各有米粒或绿豆大小之溃疡点多枚,疼痛难忍。语言、饮食,均感困难;上腭粘膜亦破碎疼痛。伴恶寒怕冷,腰膝痠楚,脚跟足底疼痛,不能履地。便调,溲清。舌胖嫩,齿印深,苔淡白,脉沉细。证由肾阳不足,阳损及阴,水不济火,虚火上炎。治拟温肾和阳,补虚敛阴。处方:潞党参9克、上肉桂2.4克、川黄连1.8克、五味子4.5克、京元参9克、肥知母9克、杭白芍9克、北细辛1.5克、补骨脂9克、怀牛膝9克、生甘草3克。3剂。     

福氏痢疾杆菌2b血清型菌株基因组中SfII和SfX前噬菌体整合位点及排列方式研究

目的 研究福氏痢疾杆菌2b血清型菌株中SfII和SfX前噬菌体整合位点及排列方式.方法 根据2b血清型菌株基因组中SFII和SfX前噬菌体可能的整合位点及排列方式,设计引物,对50株2b血清型菌株进行PCR扩增,并对扩增产物测序,根据扩增和测序结果判断噬菌体的整合位点和排列方式.结果 在2b血清型菌株中,SfII和SfX前噬菌体前后相连,整合于宿主菌染色体proA和yaiC基因间的thrW tRNA基因上;以SfII在前,SfX在后,或SfX在前,SfII在后两种方式排列;而以后一种方式为主,在共50株检测菌株中,有49株为此方式.结论 福氏痢疾杆菌血清型相关噬菌体的整合位点及排列方式,对研究福氏痢疾杆菌血清型转换及血清型相关噬菌体的整合机制具有重要意义.     

霍乱毒素B亚单位与志贺毒素2B亚单位融合表达及抗原性检测

目的 克隆表达出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7志贺毒素2B亚单位(Stx2B)与霍乱毒素B亚单位(CTB)的融合蛋白(CTB-Stx2B),并检测其抗原性和与神经节苷脂(GM1)结合能力.方法 设计引物扩增融合蛋白CTB-Stx2B的编码基因ctb-stx2b,T-A克隆测序验证后克隆入原核表达质粒pET30a(+)C,构建表达质粒pET30a(+)-ctb-stx2b,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达、纯化,获得目的蛋白CTB-Stx2B,SDS-PAGE和Western-blot检测其抗原性和形成五聚体的能力;GM1-ELISA法检测其与GM1结合能力.结果 扩增出约750 bp的目的片段,测序鉴定与设计序列一致;原核表达质粒pET30a(+)-ctb-stx2b转化E.coliBL21(DE3)后,经酶切和PCR扩增鉴定正确;IPTG诱导后SDS-PAGE初步测定CTB-Stx2B单体的相对分子质量(MR)约为20×103;Western-blot检测CTB-Stx2B能与CTB单克隆抗体结合,纯化产物经复性后大多以五聚体形式存在;ELISA检测CTB-Stx2B具有结合GM1活性.结论 成功克隆、表达了融合蛋白CTB-Stx2B;表达的蛋白具有良好的CTB抗原性和GM1结合能力.     

中国部分地区大肠埃希菌O157的分子分型及变异研究

目的了解出血性大肠埃希菌（EHEC）O157的分子流行特征和遗传变异关系并完善EHECO157：H7感染性腹泻监测制度。方法采用聚合酶链反应分析毒力基因的分布情况；用脉冲场凝胶电泳技术对1988-2005年部分地区分离到的249株EHECO157：H7（其中产志贺毒素的245株，不产志贺毒素的4株）和51株O157非H7进行分子流行病学分析。结果stx2基因在我国的EHECO157：H7菌株中有着很高的分布率，部分菌株携带stx2基因变种。300株O157共分为161种带型，其中51株O157非H7菌株共有42种带型，4株O157：H7非产毒株分别为4种带型，245株EHECO157：H7共有115种带型。结论EHECO157间的基因变异较大；产stx2原毒素的菌株和5衄2毒素发生变异的菌株带型相差较大。部分菌株之间存在着一定的交叉，说明虽然这两大类菌株有其特有的流行克隆系，但是它们的克隆系之间亲缘关系较近。     

猪链球菌分泌蛋白的免疫蛋白质组学研究

目的 寻找猪链球菌(S.suis)SC84菌株分泌蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗候选抗原的筛选提供线索.方法 采用免疫蛋白质组学和介质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MALDI-TOF MS)技术,分析和鉴定S.suisSC84菌株分泌蛋白中能与感染病例恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点.结果 在S.suis SC84菌株分泌蛋白的免疫杂交膜上,共发现14个具有抗原活性的蛋白点,其中11个点可以在考马斯蓝染色胶上找到匹配点.11个蛋白点经质谱鉴定,分属于8种蛋白,全部定位于胞壁或胞外.其中溶菌酶释放蛋白、溶血素、细胞外因子为S.suis 已知的抗原蛋白;5'-核苷酸酶、ribonucleases G和E、金属内肽酶等为新发现的具有抗原活性的蛋白;所有的蛋白均能在测序菌株S.suis 05ZYH33基因组中找到相应的编码基因.结论 在S.suis 分泌蛋白中发现了新的具有抗原活性的蛋白,可能作为S.suis特异诊断抗原和疫苗候选抗原,用于诊断试剂和疫苗的研究.     

徐州市肠出血性大肠杆菌O157:H7宿主动物的监测研究

目的系统观察宿主动物携带大肠杆菌O157:H7水平及菌株毒力变化,为制订O157:H7感染性疾病防制策略提供依据。方法采集徐州市疫情暴发点和监测点宿主动物粪便标本分离菌株。应用PCR技术检测stx1和stx2毒力基因。采用R×C列表χ2检验、确切概率法对宿主动物粪便带菌情况和变化趋势进行统计学分析。结果共监测宿主动物粪便3608份,带菌145份,带菌率为4.02%。随着年份的不同宿主动物带菌率有明显的差异(χ2=337.00,P<0.05)。不同的宿主动物带菌率不相同。牛、羊1999年带菌率与其他年份差异明显(χ2=4.98,P<0.05)。不同年份O157:H7毒力基因发生了变化。结论徐州市1999—2006年O157:H7宿主动物带菌情况、菌株带毒情况发生了明显变化。牛、羊是主要的宿主动物,猪、鸡是否为宿主动物有待进一步研究。     

广州市某野生动物市场从业人员携带SARS冠状病毒抗体状况调查

目的了解广州市新源野生动物市场从业人员严重急性呼吸综合征（SANS）抗体产生情况及其暴露果子狸的关系。方法对野生动物市场从业人员中的志愿者进行SARS病毒血清抗体监测，对监测结果结合果子狸在市场的存在情况进行分析。结果2003年5和12月、2004年1和7月、2005年6月，共5次分别对328、238、135、139和53名市场从业人员开展调查，SARS病毒IgG抗体检出率依次为25．61％、13．03％、12．59％、5．04％和9．43％，没有检测到SARS病毒IgM抗体。在接受2次以上随访调查的129人中，97人的血清抗体一直为阴性，博人一直为阳性；有13人从阳性转为阴性，有1人从阴性转为阳性。在清除果子狸后进入市场的工作人员，SARS病毒IgG抗体检测全部阴性。结论广州市新源野生动物市场从业人员SARS病毒抗体检出率和市场内果子狸的存在情况密切相关。