肝癌细胞HepG2株线粒体亮氨酸拉链EF-hand结构域基因突变实验研究

[目的]检测肝癌细胞HepG2株线粒体亮氨酸拉链EF-hand结构域(LETM1)基因突变.[方法]提取HepG2株细胞中的mRNA并合成cDNA,采用PCR方法扩增LETM1基因,连接到真核表达载体pCMV-3Myc-2A上,构建重组质粒pCMV-3Myc-LETM1,酶切,测定序列并检测突变位点.[结果]肝癌细胞LETM1基因发生突变和氨基酸改变,突变发生于G148A(缬氨酸→异亮氨酸)、G320A(甘氨酸→天冬酰胺)、G344A(精氨酸→组氨酸)和A1760G(赖氨酸→精氨酸).[结论]肝癌细胞HepG2线粒体LETM1基因发生突变.     

不孕症患者子宫内膜细胞线粒体DNA缺失研究

目的女性受孕期间子宫内膜能量代谢正常与否,直接决定受精卵的种植成功率及胚胎正常发育。本研究拟探讨子宫内膜细胞线粒体DNA(mtDNA)缺失及能量变化与不孕症发生的关系。方法收集原发性不孕症(n=30)、继发性不孕症(n=27)及对照组(n=26)的子宫内膜组织,采用巢式多聚酶链反应(PCR)检测各组子宫内膜细胞中mtDNA缺失差异;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组mtDNA拷贝数变化;最后,比较各组子宫内膜组织的ATP含量差异。结果巢式PCR检测显示,原发和继发性不孕症患者子宫内膜细胞mtDNA 4 977bp缺失率分别为86.67%和78.78%,均显著高于对照组(38.46%)(P0.05);原发和继发性不孕症子宫内膜细胞mtDNA拷贝数明显增加,分别比对照组高48.49%和51.01%(P0.01),而ATP含量显著下降,分别比对照组低57.00%和61.29%(P0.01)。结论子宫内膜mtDNA缺失率增加,mtDNA拷贝数增加,引起子宫内膜能量代谢失调进而参与不孕症的发生。     

线粒体乙醛脱氢酶2对β淀粉样蛋白所致神经元损伤的作用及机制

目的探讨线粒体乙醛脱氢酶(ALDH)2对β淀粉样蛋白(Aβ)所致神经元损伤的作用及机制。方法应用HT-22小鼠海马神经元细胞系,MTT法检测明确Aβ25~35负载浓度制成Aβ神经元损伤模型;ALDH2激活剂Alda-1、ALDH2抑制剂Daidzin干预后,Western印迹检测ALDH2蛋白表达水平;并采用ELISA检测4-HNE含量、以荧光素酶法检测细胞内的ATP含量。结果 HT22细胞负载Aβ25~35(浓度50μmol/L)时细胞生存率有显著降低;ALDH2激活剂Alda-1、ALDH2抑制剂Daidzin干预后,ALDH2蛋白表达水平并未发生变化,也并未导致细胞生存率改变;加入Alad-1后负载Aβ25~35的HT22细胞4-HNE含量显著减少,细胞内ATP含量明显提高,与Aβ组相比较有显著差异(P0.05)。结论 ALDH2激活后能有效减轻Aβ导致的神经元损伤,可能通过减少细胞内4-HNE含量、增加ATP含量实现其细胞保护的作用。     

姜黄素抑制硝普钠诱导的大鼠软骨细胞凋亡机制研究

目的 探讨姜黄素抑制硝普钠(SNP)诱导的大鼠软骨细胞凋亡的机制研究。 方法 每组取4只SD大鼠关节软骨，细胞进行原代培养，将软骨细胞分成6组，分别为空白对照组(A组)，SNP损伤组(B组)，SNP+5 μmol/L姜黄素组(C组)，SNP+10 μmol/L姜黄素组(D组)，SNP+20 μmol/L姜黄素组(E组),SNP+30 μmol/L姜黄素组(F组)。用CCK8法检测不同浓度的姜黄素对软骨细胞增殖的影响，同时检测各组中软骨细胞的活性；用RtPCR检测软骨细胞MMP-13、caspase-3、Bax和Bcl-2基因的表达情况；用Hoechst 33342染色观察软骨细胞核凋亡情况；Western Blotting检测线粒体凋亡途径相关蛋白的表达情况。 结果 ①当姜黄素的浓度为20 μmol/L时，姜黄素对软骨细胞的促增殖作用最为明显；②CCK8法检测各组细胞的活性率从大至小依次为A组＞E组＞D组＞C组＞F组＞B组；③RtPCR检测软骨细胞caspase-3、Bax和Bcl-2表达量经姜黄素处理后均有显著变化；④Hoechst 33342染色结果表明姜黄素能改善SNP诱导的软骨细胞核染色质的损伤，减少软骨细胞中的线粒体膜电位；⑤Western boltting检测各组软骨细胞中caspase-3、Bax、蛋白的表达情况，表达量依次为B组＞E组＞A组；Bcl-2蛋白的表达情况，表达量依次为A组＞E组＞B组。 结论 姜黄素通过抑制线粒体凋亡途径，从而减少SNP诱导的大鼠软骨细胞的凋亡。      

运动通过线粒体介导发挥神经保护作用研究进展

<正>随着人口老龄化的日益加深,年龄相关的认知功能障碍以及神经退行性疾病日益增多,神经保护成为医学界关注的热门话题。大量文献证明,运动具有神经保护作用,在缓解衰老过程中出现的认知功能障碍以及神经退行性疾病方面起到至关重要的作用。其内在机制非常复杂,本文从线粒体与神经元的关系入手,通过运动对线粒体结构功能的影响来阐述运动的神经保护作用。     

激动线粒体乙醛脱氢酶2可降低高糖诱导的A549细胞炎性小体生成

目的探讨激动线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)对高糖诱导的A549细胞炎性小体生成的影响。方法 25 mmol/L高糖完全培养基体外培养肺泡上皮A549细胞,实验分为4组:对照组,ALDH2激动剂20μmol/L Alda-1组,ALDH2阻断剂60μmol/L Daidzin组,20μmol/L Alda-1+60μmol/L Daidzin组。干预处理24 h后,四甲基噻唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测细胞增殖活力,二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)荧光染色检测细胞活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测ALDH2及炎性小体主要成员核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific protease-1,caspase-1)蛋白的表达。结果与对照组相比,Alda-1特异性激动ALDH2后,细胞增殖活力无明显变化,细胞ROS水平和细胞迁移率均明显降低(P<0.05),ALDH2蛋白表达增加(P<0.05),炎性小体主要成员NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05);Daidzin特异性阻断ALDH2后,细胞增殖活力、细胞ROS水平、细胞迁移率、ALDH2蛋白和ASC蛋白表达无明显变化,NLRP3蛋白表达明显升高(P<0.05),caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与Alda-1组相比,Alda-1+Daidzin组细胞增殖活力及ROS水平无明显变化,细胞迁移率明显增高(P<0.05),ALDH2蛋白表达降低(P<0.05),NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论提高ALDH2在肺泡上皮A549细胞中的表达可减轻高糖诱导的细胞炎症反应,可能是通过降低细胞ROS水平、降低炎性小体的表达来实现。     

针灸调节阿尔茨海默病患者线粒体SIRT3机制初探

AD发病机制非常复杂,可严重威胁人类的健康,给家庭和社会带来沉重的负担。线粒体功能障碍与AD的发病有密切关系。沉默信息调节因子3(SIRT3)作为一种依赖NAD+的去乙酰化酶,与线粒体多种生物学功能密切相关。已有的证据表明,SIRT3可以通过其去乙酰化作用在AD的发生和发展中具有重要作用。本文对SIRT3的线粒体定位,调节作用等进行阐述,以进一步探讨其在AD中的保护作用及可能的机制,为针刺更好地防治AD提供理论依据。     

线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作的发病机制、诊断和治疗研究进展

线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作(MELAS)是线粒体脑肌病(ME)中最常见的一种类型。其发病机制尚不明确,多考虑是基因突变、能量缺乏、血管病变和NO缺乏等多种因素相互作用的结果。MELAS可累及以脑和肌肉组织为主的全身多个系统,临床表现复杂多样,其诊断依据尚无统一标准,且缺乏根治的方法,极易误诊、漏诊,预后差。本文就MELAS的发病机制、诊断及治疗进展进行综述。     

高乳酸血症-卒中样发作综合征型线粒体脑肌病一家系两代四例报告

线粒体脑肌病属于罕见性母系遗传病，本文回顾性分析了1家4例高乳酸血症-卒中样发作综合征（MELAS）型线粒体脑肌病患者，其主要表现为卒中样发作、头痛、癫痫、高乳酸血症、肌肉不耐受疲劳、高级智能下降、听力下降和身材矮小等，结合特征性影像学变化、基因检测及肌肉活检明确诊断，并结合文献对只有女儿能将其线粒体DNA（mt-DNA）传递给下一代的母系遗传MELAS型线粒体脑肌病临床特点进行了总结分析，旨在帮助临床认识此病，进一步提高MELAS型线粒体脑肌病的临床诊断率。