线粒体分裂、线粒体自噬在烟草提取物诱导的支气管上皮细胞损伤模型中的作用

目的 探讨线粒体分裂、线粒体自噬在烟草提取物(CSE)诱导的支气管上皮细胞损伤模型中的作用.方法 支气管上皮细胞与5％ CSE共培养,使用线粒体分裂抑制剂Mdivi-1 (Md)和线粒体自噬促进剂Urolithin A(UA)进行预处理,分别检测细胞增殖活力、氧化应激、线粒体结构变化、炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-18、CXCL1、CXCL8)mRNA水平、细胞程序性坏死组分(RIPK1、RIPK3、MLKL) mRNA水平、线粒体分裂蛋白(DRP1、MFF)和线粒体自噬蛋白(p62/SQSTM1、LC3B)的水平.结果 5％ CSE诱导氧化应激、炎症因子mRNA增加、线粒体网络结构破坏、线粒体分裂蛋白表达增加、线粒体自噬蛋白p62/SQSTM1蛋白表达增高、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达下降、程序性坏死组分mRNA增加.Md/UA预处理可抑制氧化应激,抑制炎症因子、细胞程序性坏死组分mRNA表达,部分恢复线粒体网络结构,降低线粒体分裂蛋白水平.Md预处理增加线粒体自噬蛋白p62/SQSTM1蛋白水平,不影响LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达.UA预处理抑制线粒体自噬蛋白p62/SQSTM1蛋白水平,增加LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达.结论 抑制线粒体分裂或促进线粒体自噬可抑制烟草暴露诱导的氧化应激和炎症反应,部分恢复线粒体结构,其机制可能与抑制线粒体分裂、抑制细胞程序性坏死组分mRNA表达有关.     

容积激活性氯离子通道蛋白ClC-3表达下调促进H9c2心肌细胞肥大及其机制研究

目的 探讨容积激活性氯离子通道蛋白ClC-3表达下调对H9c2心肌细胞的影响及其机制.方法 用siRNA转染H9c2心肌细胞构建ClC-3表达下调的细胞模型;免疫荧光染色观察H9c2细胞表面积;qRT-PCR检测H9c2细胞心房利钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的mRNA表达水平;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP)水平,图像分析系统研究H9c2心肌细胞的调节性体积回缩能力(RVD);全细胞膜片钳技术检测H9c2细胞膜上氯电流的变化.结果 与空白组相比,siRNA转染H9c2细胞72 h能降低C1C-3 mRNA和蛋白的表达水平;而ClC-3下调与异丙肾上腺素相似,都增加H9c2心肌细胞表面积和心肌肥大标志性因子mRNA的表达,同时降低H9c2细胞的MMP和容积调节能力,抑制容积激活性氯离子电流的激活.结论 ClC-3表达的下调能诱导H9c2心肌细胞肥大,其机制可能与其损伤线粒体功能、降低细胞容积调节能力和抑制容积激活性氯离子电流的激活有关.     

小鼠孕晚期暴露脂多糖对老年期海马GSNOR含量及与认知功能损害相关性研究

目的 探讨海马S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)水平与孕晚期炎症暴露引起的老年母鼠空间学习记忆能力改变的相关性.方法 怀孕15 d的CD-1母鼠随机分为细菌脂多糖暴露组(LPS)和对照组(CON),连续4d经腹腔注射细菌脂多糖(LPS,50 μg/kg;LPS组)或等容积生理盐水(CON组).饲养母鼠至6月龄和18月龄时,Morris水迷宫(MWM)检测空间学习记忆能力、Western blot检测海马GSNOR水平.结果 18-CON组比6-CON组,在水迷宫中平均游泳路程延长(P＜0.01),靶象限游泳路程百分比和海马GSNOR水平均下降(P＜0.01),18-LPS组与18-CON组比较也具有相同结果.Pearson相关分析显示,GSNOR水平与平均游泳路程呈负相关,与靶象限游泳路程百分比呈正相关.结论 孕晚期炎症暴露加重小鼠海马GSNOR水平的年龄相关性改变,这可能与老年期空间学习记忆损害有关.     

糖酵解抑制剂通过抑制糖酵解和促进线粒体调节的途径诱导胃癌细胞凋亡

目的探究糖酵解抑制剂WZB117通过抑制糖酵解和促进线粒体调节的凋亡途径诱导人胃癌细胞系MGC-803的凋亡的机制。方法处于对数生长期的胃癌MGC-803细胞用于实验。根据实验要求,将培养的细胞分为2组:对照组（正常培养的胃癌细胞）,WZB117组（用20 μg/mL的葡萄糖运转蛋白抑制剂处理的胃癌细胞）。通过MTS测定试剂盒检测细胞的增殖能力;通过CCK-8测定细胞活力,TUNEL分析细胞细胞凋亡;通过测定ATP含量检测线粒体功能;通过免疫印迹分析Bcl-2、Bax、caspase-3和Cyt-c蛋白和糖酵解相关酶己糖激酶（HK）和磷酸果糖激酶（PFK）蛋白的表达。结果24 h时和48 h时WZB117组较对照组细胞增殖降低（P < 0.01）。WZB117组较对照组细胞凋亡率升高（P < 0.01）,WZB117组较对照组细胞活力降低（P < 0.01）。12 h时和24 h时WZB117组较对照组ATP含量均降低（P < 0.01）。WZB117组较对照组Bcl-2蛋白表达降低（P < 0.01）,WZB117组较对照组Bax、caspase-3和Cyt-c的蛋白表达升高（P < 0.01）。WZB117组较对照组HK和PFK表达降低（P < 0.01）。结论WZB117通过抑制糖酵解途径和减少线粒体的ATP产能诱导胃癌细胞系MGC-803的凋亡。     

低强度脉冲聚焦超声通过上调PGAM5蛋白表达促进软骨细胞线粒体自噬

目的 探讨低强度脉冲聚焦超声(focused low-intensity pulsed ultrasound,FLIPUS)对软骨细胞线粒体自噬活化的影响.方法 提取C57BL/6J乳鼠膝关节原代软骨细胞进行体外实验,IL-1β处理细胞模拟骨关节炎样软骨细胞损伤并进行验证.细胞分为对照组、IL-1β组和IL-1β+FLIPUS组.RT-PCR检测各组Col2α1 和MMP13 mRNA 表达;Western blot 检测各组Col2α1、MMP13、LC3B-Ⅱ、TOM20、TIM23、PGAM5、FUNDC1及p-FUNDC1(p-ser13)蛋白表达.结果 成功提取原代软骨细胞并模拟骨关节炎样软骨细胞损伤.与对照组比较,IL-1β组Col2α1 mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.01),MMP13 mRNA和蛋白表达明显增加(P＜0.01);与IL-1β组相比,IL-1β+FLIPUS组Col2α1表达明显上升(P＜0.05),MMP13表达明显下降(P＜0.01).与对照组相比,IL-1β组LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低(P＜0.05);与IL-1β组相比,IL-1β+FLIPUS组LC3B-Ⅱ、PGAM5蛋白表达显著上升(P＜0.01),TOM20、TIM23、p-ser13蛋白表达则明显下降(P＜0.05).结论 FLIPUS可能通过上调软骨细胞PGAM5蛋白表达,使FUNDC1第13位丝氨酸去磷酸化,活化线粒体自噬.     

蛇床子素通过PINK1/Parkin通路诱导HeLa细胞自噬

目的 探讨蛇床子素促进宫颈癌HeLa细胞发生自噬的潜在作用机制。方法 不同浓度蛇床子素(0、10、20、40、80、160、240、320 mg·L^-1)作用于HeLa细胞,MTT法检测蛇床子素对HeLa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察经蛇床子素干预的HeLa细胞形态;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)染色检测自噬水平;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western blot分析线粒体相关蛋白MFN1、DPR1表达水平;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化;建立裸鼠宫颈癌体内移植瘤模型探讨蛇床子素对宫颈癌的抑制作用;Western blot检测PINK1、Parkin和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平。结果 蛇床子素能明显抑制HeLa细胞增殖;通过透射电镜观察,经蛇床子素干预的HeLa细胞有典型的自噬小体形成;MDC染色荧光强度增强,细胞发生自噬;线粒体融合蛋白MFN1表达下调,分裂蛋白DRP1表达上调;JC-1显示线粒体膜电位下降;流式细胞术检测结果显示细胞内ROS水平升高,且能被自噬...     

Ca^(2+)与线粒体对于血小板功能影响的研究现状北大核心CSCD

血小板作为参与出血与止血、损伤反应和免疫调节等众多病理生理学过程的血液组成成分,其存活、能量代谢、活化和凋亡均受到Ca^(2+)和线粒体的调控。Ca^(2+)通道与Ca^(2+)传感器等多个方面共同调控血小板胞内Ca^(2+)的存储、释放及其稳态,从而影响血小板活化与聚集等功能。线粒体作为细胞进行有氧呼吸的主要场所,对于血小板的生理功能与生物活性具有重要意义。线粒体通透性转换孔的Ca^(2+)运输对于血小板的功能具有调控作用。本文综述了Ca^(2+)及线粒体对于血小板功能的影响,以期为相关血栓疾病的发病机制及治疗靶点提供新的思路。     

Drp1介导线粒体能量代谢拮抗大鼠缺血再灌注肾损伤

目的　探讨线粒体动力相关蛋白1（Drp1）介导线粒体能量代谢参与缺血再灌注肾损伤的分子机制。方法　实验时间2020年10月14日。8～10周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和Drp1抑制剂组,每组5只,每只体质量为0.25～0.30 kg。通过手术建立大鼠肾脏缺血再灌注急性肾损伤模型,Drp1抑制剂组大鼠腹腔注射线粒体分裂抑制剂（mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1）20 mg/kg体质量,其余各组大鼠注射等体积生理盐水,造模24 h留取血清及肾脏组织。比较组间大鼠血肌酐水平、肾组织病理学改变、肾组织细胞凋亡情况、线粒体超微结构、线粒体ATP酶活力,并建立体外HK-2细胞缺氧复氧模型,经处理后JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化。采用方差分析。结果　与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐明显升高［（41.12±1.895）µmol/L比（48.68±2.065）µmol/L］,肾小管损伤评分升高［（1.29±0.426）分比（6.50±0.577）分］,每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量增加［（2.40±0.547）个比（10.20±1.095）个］,电镜下线粒体损伤更明显,线粒体ATP酶活力降低［（6.38±0.321）U/mg prot比（4.18±0.198）U/mg prot］,HK-2细胞缺氧复氧模型中,模型组较假手术组线粒体膜电位降低的细胞比例增多［（9.81±0.251）%比（4.24±0.598）%］,差异均有统计学意义（均P<0.05）。与模型组相比,Drp1抑制剂组大鼠血肌酐下降［（48.68±2.065）µmol/L比（43.28±0.895）µmol/L］,肾小管损伤评分降低［（6.50±0.577）分比（4.50±0.578）分］,每高倍镜视野下大鼠肾组织细胞凋亡数量减少［（10.20±1.095）个比（6.60±1.140）个］,线粒体结构损伤减轻,细胞线粒体ATP酶活力增加［（4.18±0.198）U/mg prot比（5.16±0.628）U/mg prot］,HK-2细胞缺氧复氧模型中,Drp1抑制剂组较模型组线粒体膜电位降低的细胞比例减少［（5.90±0.360）%比（9.81±0.251）%］,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论　选择性抑制Drp1可通过抑制线粒体分裂,有效改善能量代谢障碍,减少细胞凋亡,减轻肾缺血再灌注损伤。     

从“线粒体-肠道菌群交互作用”探讨益气化痰通络法治疗缺血性中风

线粒体结构的完整性及功能被破坏是缺血性脑卒中的主要病理环节之一。"线粒体-肠道菌群交互作用"体现了中医整体观,是人体气与血,正与邪,气机运行和病理产物之间平衡与失衡的一个体现。线粒体功能障碍、肠道菌群失调与中医"气虚""痰浊""瘀血"的机理有相似之处。益气化痰通络法可通过保护线粒体、干预肠道菌群的作用调节机体的气血平衡,达到益气化瘀、补气化痰、活血通络、扶正祛邪的作用。