湖北汉族人群2型糖尿病患者线粒体基因突变检测及临床意义

目的研究线粒体DNA(mtDNA)16S rRNA基因(T3200C、C3206T)和ND1基因(A4136G、A4164G和T4216C)突变在湖北汉族2型糖尿病人群中的发生率及临床意义。方法采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)、PCR-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)分析及PCR产物直接测序,对175例2型糖尿病患者和200例正常对照的线粒体基因突变进行检测,并用Primer、Antherprot和Mfold软件对检出的突变位点进行分析,对RNA突变后最小自由能下的二级结构变化和ND1基因突变后蛋白质的二级结构改变进行预测。结果2型糖尿病组检出3200(T→C)突变2例(1．14％),3206(C→T)突变11例(6．28％),4216(T→C)突变3例(1．71％),4136位点未发现突变。发现2个未曾报道的新突变位点4164(A→G)7例(4．00％),4200(A→T)1例(0．57％)。对照组中检出3206(C→T)突变8例(3．92％),4164(A→G)突变5例(2．45％),两位点突变率在两组中比较差异无显著性(P>0．05)。RNA二级结构预测显示3200(T→C)突变引起16S rRNA基因最小自由能和二级结构的改变,可能引起疾病。4164(A→G)和4200(A→T)突变分别为Met和Leu的无义突变,4216(T→C)突变可使线粒体呼吸链中一个中性酪氨酸被亲水性组氨酸取代,蛋白质二级结构预测显示该突变可引起NDl蛋白质二级结构改变。研究还显示线粒体基因突变率在≥40岁个体呈上升趋势。结论mtDNA 3200(T→C)和4216(T→C)突变可能增加糖尿病的易感性;3206(C→T)和4164(A→G)为基因多态性改变;4136位点未发现突变。以上结果提示糖尿病的发生在线粒体基因突变上存在一定的异质性。     

脂蟾毒配基对人胃癌BGC-823细胞系细胞生长的干预效应

目的：观察中药蟾酥主要成分之一——脂蟾毒配基对体外培养人胃癌BGC-823细胞系细胞生长的干预及其与细胞色素C和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活化的关系。 方法：实验于2004—09／2005—12在北京大学医学部细胞生物学系实验室完成。体外培养人胃癌BGC-823细胞系，脂蟾毒配基各组加入不同浓度的脂蟾毒配基（先用二甲基亚砜溶解，再经RPMI-1640培养液稀释至终浓度。细胞增殖及增殖抑制实验、细胞核形态观察及核DNA含量测定实验中脂蟾毒配基浓度分别为0．1，1，10μmol／L；细胞周期分布实验、细胞凋亡率实验、线粒体膜电位实验中脂蟾毒配基浓度分别为0，1,2．5，5μmol／L）。空白对照组加入RPMI-1640培养液。盐酸阿克拉霉素组加入5μmoL／L盐酸阿克拉霉素。采用酸性磷酸酶法检测细胞增殖抑制作用；细胞荧光分光光度仪观察细胞核形态及核DNA含量测定；流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及其线粒体膜电位变化；Western blot检测与细胞凋亡相关基因蛋白表达的变化。 结果：①经0．1，1，10μmol／L脂蟾毒配基分别作用24，48，72h后，细胞生长显著抑制，脂蟾毒配基对癌细胞的生长抑制百分率与剂量、时间呈正相关，其IC50分别为3．9，2．0，1．5μmol／L。②随脂蟾毒配基作用浓度和时间的延长，癌细胞核荧光强度减弱，细胞核DNA含量明显降低。③0．1，1μmol／L脂螗毒配基作用24～48h后癌细胞阻滞在S期，5μmol／L脂蟾毒配基作用72h时，细胞阻滞在G2＋M期；盐酸阿克拉霉素与癌细胞作用24～48h，细胞阻滞在S期，作用72h时细胞阻滞在G2＋M期。④脂蟾毒配基作用后，细胞凋亡率明显高于对照组。⑤脂蟾毒配基引起细胞线粒体膜电位下降，释放人胞质中的细胞色素C增多，促进半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白活化，抑制Bel-2蚤白表达，诱导细胞凋亡。 结论：体外实验条件下，脂蟾毒配基抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导细胞发生凋亡，其诱导凋亡作用机制与线粒体通路有关。     

Aβ25-35致PC12细胞模线粒体损伤及人参皂甙对其影响

目的　探讨Aβ2 5-3 5致PC12细胞损伤后线粒体COX活性和ATP合成的改变及人参皂甙对它们的影响。方法　Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞 ,人参皂甙处理前后紫外分光光度计测定线粒体COX活性 ,高效液相色谱仪测定线粒体能荷。结果　Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞后 ,线粒体COX活性降低 ,线粒体ATP、ADP含量降低 ,人参皂甙能提高线粒体COX活性及ATP、ADP含量。结论　人参皂甙通过抗氧化作用可以减轻Aβ2 5-3 5致PC12细胞线粒体的氧化损伤。     

牛磺酸对反复力竭运动大鼠骨骼肌线粒体的保护作用

目的 探讨牛磺酸对反复力竭运动大鼠骨骼肌线粒体的保护作用.方法 雄性SD大鼠30只随机分为安静对照组、力竭对照组、牛磺酸组,每组10只.安静对照组和力竭对照组大鼠每天按0.8 mL/kg灌喂生理盐水1次;牛磺酸组大鼠每天用200 mg/L牛磺酸按200 mg/kg灌喂1次.力竭对照组和牛磺酸组大鼠运动前先连续灌喂15d,力竭运动期间(30 d)每天继续灌喂.安静对照组大鼠整个实验过程中不运动,只灌喂生理盐水,灌喂时间与力竭对照组和牛磺酸组一样,共45 d.运动后,处死大鼠,切取股四头肌,并对大鼠体质量及股四头肌湿重进行比较;行透射电镜观察,着重观察股四头肌线粒体形态.结果 力竭对照组体质量、股四头肌湿重显著低于安静对照组和牛磺酸组,力竭对照组大鼠骨骼肌肌丝排列紊乱,线粒体肿胀和空泡变性,牛磺酸组大部分骨骼肌超微结构图接近正常.结论 口服牛磺酸对反复力竭运动大鼠骨骼肌线粒体具有保护作用,它减少反复力竭收缩骨骼肌的坏死丢失.     

NS5 ATP9抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡

目的探讨HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响。方法将NS5ATP9基因表达质粒、NS5ATP9干扰RNA质粒及各自的对照空质粒转染到HepG2细胞中,48h后换无血清培养基培养24h诱导细胞凋亡,采用实时荧光定量PCR验证转染后NS5ATP9mRNA表达水平的变化,采用Annexin V/7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡情况,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测Bax蛋白表达,综合观察NS5ATP9对HepG2细胞血清饥饿诱导凋亡的影响。结果 Annexin V/7-AAD检测结果显示,和对照组细胞相比NS5ATP9过表达组早期凋亡和总凋亡率显著减少(P0.05);而NS5ATP9干扰RNA组细胞的早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率均显著增加(P0.05)。JC-1检测结果显示,和对照组相比NS5ATP9过表达组细胞线粒体膜电位保持正常形式的比例增加,而出现去极化电位形式的比例显著减少(P0.05);而NS5ATP9干扰RNA组线粒体膜电位保持正常形式的比例显著减少(P0.05)。Western blot检测结果显示,NS5ATP9干扰RNA组促凋亡分子Bax表达量显著升高(P0.05),NS5ATP9过表达组Bax表达量则有下降趋势。结论 NS5ATP9基因抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能是通过线粒体途径实现。     

中波紫外线对人血小板线粒体DNA影响的初步观察

目的:观察中波紫外线对人血小板线粒体活性及线粒体DNA的影响,探讨其作为评测光损伤敏感系统的可行性。方法:以不同能量的中波紫外线照射人血小板,观察血小板线粒体活性及线粒体DNA光化产物环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)含量的变化。结果:接受不同能量中波紫外线照射的血小板,线粒体活性明显降低(P<0.05),环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)含量则明显增加(P<0.05)。结论:人血小板线粒体活性与环丁烷嘧啶二聚体含量对中波紫外线的照射敏感,并与其剂量呈依赖关系,可很好反映中波紫外线对生物体光损伤作用。     

山莨菪碱对皮瓣缺血再灌注损伤保护机制的研究进展

临床上由于创伤、肿瘤、感染等引起的组织缺损常需皮瓣修复,虽然皮瓣外科技术过去几十年中已获得巨大发展,但皮瓣手术仍面临坏死的风险。某些类型皮瓣的部分坏死率或脂肪液化率可达30%,究其原因,主要由缺血再灌注损伤引起。因此,缺血再灌注损伤对于整个皮瓣的存活起着决定性的作用。大量研究资料表明缺血再灌注损伤是多细胞参与、多因子介导的一系列复杂病理生理过程,根据对已知缺血再     

复方天葡片对高+Gz应激致大鼠肾损伤的保护作用

目的:观察模拟高正加速度(+Gz)暴露对大鼠肾脏损伤、中药复方天葡片对肾脏损伤的保护作用。方法:雄性SD大鼠随机分为空白对照、高+Gz应激、复方天葡片治疗组(n=12),提前给予复方天葡片(3.0 g/kg)14 d后进行+10Gz持续5 min,增长率为1 G/s的暴露。检测血常规,血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,观察肾组织ATP酶活性及电镜下肾脏超微病理改变。结果:高+Gz应激后大鼠白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白含量及血细胞比容升高(P<0.05),Scr、BUN水平显著升高(P<0.01),血清SOD活性显著减低(P<0.05),肾组织ATP酶活性显著降低,电镜下肾组织内细胞核周围线粒体数量与空白对照组相比无显著变化。给予复方天葡片干预后大鼠上述肾脏损伤及氧化应激指标改善,电镜下肾组织细胞核周围线粒体数量增加。结论:高+Gz暴露应激可导致大鼠抗氧化能力减弱,肾脏功能受损和超微结构变化。复方天葡片可改善肾组织有氧代谢,减少氧化产物的生成,促进肾内线粒体新生,有利大鼠高+Gz应激引起肾损伤修复。     

山刺玫果对D-半乳糖致衰小鼠心肌线粒体能量代谢的影响

山刺玫为蔷薇科蔷薇属植物,广泛分布于我国东北、华北、内蒙等地,果实具有治疗消化不良等功效.山刺玫果富含黄酮、维生素、有机硒等多种抗氧化营养成分〔1〕.实验表明,山刺玫果具除自由基〔2〕、抗衰老、防治心血管疾病等作用.     

二硫化碳对大鼠睾丸组织细胞凋亡线粒体通路的影响及环孢素A的干预作用

[目的]研究二硫化碳(carbon disulfide,CS2)对大鼠睾丸生殖细胞凋亡线粒体通路的影响及其可能的分子机制,同时观察环孢素A(cyclosporin A,Cs A)对细胞凋亡的干预作用。[方法]选取清洁级雄性SD大鼠48只并随机分为6组:对照组、3个CS2染毒组(50、250、1 250 mg/m3)、干预组[CS2(1 250 mg/m3)+Cs A(12.5 mg/kg)]和Cs A(12.5 mg/kg)组。静式吸入染毒,每天2 h,每周5 d,共10周,对照组仅吸入新鲜空气,Cs A则依据大鼠体重并按相应比例先溶解在牛奶中然后灌胃。染毒结束后取睾丸组织做HE染色,观察其形态学改变;TUNEL荧光法检测大鼠睾丸组织细胞凋亡情况;Western Blot法检测各组细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸酶原9(Procaspase-9)、Procaspase-3、Bcl-x L抗凋亡和促凋亡蛋白Bad的表达含量。[结果]随着CS2染毒浓度的增加,HE染色大鼠睾丸组织形态损伤情况不断加剧,中、高浓度组的凋亡指数高于对照组(P<0.05),Cs A干预对大鼠睾丸组织形态损伤有一定缓解;与高浓度CS2染毒组相比,干预组的凋亡指数明显下降(P<0.05),但仍高于Cs A组(P<0.05)。CS2染毒组Cyt C、Bad蛋白含量与对照组比较有所增加,而Procaspase-9、Procaspase-3和Bcl-x L蛋白含量则有下降的趋势(P<0.05)。Cs A干预后与高浓度CS2染毒组比较,干预组Cyt C蛋白含量下降(P<0.05),Bcl-x L蛋白含量则提高(P<0.05);Procaspase-9、Procaspase-3和Bad蛋白含量均有不同程度的变化,但与CS2高浓度组相比差异无统计学意义。[结论]CS2染毒可影响细胞凋亡线粒体通路继而诱导大鼠睾丸生殖细胞凋亡,而细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的表达可能与Cs A的干预有关。