“标本配穴”电针对慢性心肌缺血模型大鼠线粒体结构及呼吸酶活性的影响

目的:以心肌线粒体为切入,观察“标本配穴”电针对慢性心肌缺血模型大鼠心肌线粒体结构、GAPDH、CS、CCO的酶活性及心肌组织ATP含量的影响,探讨“标本配穴”电针对慢性心肌缺血模型大鼠心肌线粒体的保护机制。方法:将30只Wistar雄性大鼠随机分为空白组、模型组、标本配穴组,每组10只。模型组、标本配穴组大鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素制备慢性心肌缺血大鼠模型。标本配穴组在造模结束后取“内关”“足三里”“关元”电针干预10 min,疏密波,2~100 Hz,1 mA,连续21天。运用透射电镜观察心肌线粒体结构变化,采用试剂盒检测3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、柠檬酸合成酶(CS)、细胞色素C氧化酶(CCO)的酶活性及心肌组织ATP含量。结果:与空白组比较,模型组线粒体结构破坏明显,大部分线粒体出现变形空泡化;而与模型组比较,标本配穴组线粒体结构损伤程度明显减轻。与空白组相比,模型组、标本配穴组心肌组织ATP含量、GAPDH、CS、CCO活性均明显降低(P<0.01)。但与模型组相比,标本配穴组4指标均显著增高(P<0.01),且心肌组织ATP含量与GAPDH、CS、CCO活性成线性相关。结论:在慢性心肌缺血状态下,标本配穴电针可提升线粒体呼吸酶活性,增加有氧呼吸产能效率,改善心脏能量代谢,从而减轻心肌细胞的结构破坏,对心肌组织起到保护作用。     

人参皂苷Rb1在Aβ损伤的PC12细胞中激活线粒体自噬的机制研究＊

目的 基于Aβ损伤的PC12模型，观察人参皂苷Rb1对线粒体自噬的调节作用。方法 用Aβ损伤PC12细胞建立体外AD模型，采用人参皂苷Rb1进行干预后，利用透射电镜观察自噬情况，Western blot检测LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、PINK1、parkin、NDP52和OPTN蛋白的表达，荧光实时定量PCR检测LC3、p62、PINK1、parkin、NDP52、OPTN mRNA水平。结果 人参皂苷Rb1高剂量促进细胞中自噬小体包裹受损线粒体，升高LC3Ⅱ/Ⅰ比值（P < 0.05），减少p62蛋白水平（P < 0.05）；同时，人参皂苷Rb1显著增加了PINK1蛋白表达（P < 0.01），同时减少OPTN及NDP52蛋白水平（P < 0.05）；此外，人参皂苷Rb1高剂量组parkin、OPTN mRNA表达显著上调（P < 0.01），低剂量组PINK1、NDP52 mRNA表达也显著上调（P < 0.05）。结论 人参皂苷Rb1神经保护作用与调节线粒体自噬相关，通过激活PINK1/parkin通路促进线粒体自噬而改善体外AD模型损伤情况。     

琥珀酸脱氢酶复合物变异在肿瘤病理诊断中的意义

琥珀酸脱氢酶(SDH)是三羧酸循环和电子传递呼吸链的关键复合物酶。目前研究认为SDHx基因突变导致线粒体功能障碍,进而激活假缺氧信号通路而致瘤。SDHx包括A、B、C、D 4个编码基因,其中任一亚基突变是SDH缺陷型(dSDH)肿瘤的最常见原因;少数可能与SDHC表观异常有关。dSDH肿瘤是一类以能量代谢缺陷为主要机制的少见肿瘤,见于胃肠间质瘤、嗜铬细胞瘤/副神经节瘤、肾细胞癌、垂体腺瘤等。大量研究证实不同的SDHx亚基突变具有不同的肿瘤表型效应;免疫组织化学SDHB表达缺失是SDHx突变的可靠提示,但不能取代遗传分析,需辅以适当的基因检测确诊。在临床实践中,特定亚基突变与恶性肿瘤风险之间的相关性具有重要的诊断及预后意义,将为精准治疗提供新靶点及SDHx突变无症状携带者的个体化管理提供新策略。     

姜黄素通过上调PPARγ抑制糖基化终末产物诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤

目的观察姜黄素(curcumin)对糖基化终末产物(AGEs)诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤的作用,并探讨相关机制是否与姜黄素上调过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)相关。方法原代培养家兔膝关节软骨细胞;TUNEL染色法检测细胞凋亡;Rhodamine-123试剂盒检测线粒体跨膜电位(△Ψm);ATP试剂盒检测线粒体ATP生成;分光光度法检测caspase-3活性;Western blot检测PPARγ、细胞色素C、Bax及Bcl-2蛋白表达;real-time PCR检测PPARγmRNA含量;DNA-binding法检测PPARγ活性。结果 AGEs(200 mg·L-1)可明显诱导兔软骨细胞凋亡,同时线粒体跨膜电位(△Ψm)降低、ATP生成减少,caspase-3活性增加,细胞色素C释放增加,Bax/Bcl-2的比值增加;线粒体通透性转换孔的抑制剂环孢霉素A(Cs A,100 nmol·L-1)可以明显抑制AGEs诱导的细胞凋亡;PPARγ特异性激动剂吡格列酮及姜黄素均可明显抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡及线粒体功能损伤,给予PPARγ特异性抑制剂GW9662 10μmol·L-1预处理后,可以明显拮抗姜黄素的保护作用。同时,姜黄素可以明显上调AGEs诱导的PPARγ活性的降低,并伴随PPARγ相应的mRNA及蛋白表达水平的升高。结论姜黄素通过上调PPARγ,有效地保护AGEs诱导的软骨细胞线粒体损伤,从而抑制AGEs诱导的软骨细胞凋亡。     

腺苷酸活化蛋白激酶促胰岛β细胞凋亡机制的研究进展

腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)是调节细胞能量代谢的关键酶。近几年深入研究发现其具有促胰岛β细胞凋亡的作用,研究发现其可通过线粒体凋亡途径、内质网应激凋亡途径及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路等诱导细胞凋亡,本文就AMPK促进胰岛β细胞凋亡的作用及可能的机制作一简要综述。     

多囊卵巢综合征患者卵母细胞超微结构观察

目的 对多囊卵巢综合征（PCOS）患者卵母细胞的超微结构和线粒体DNA（mtDNA）拷贝数进行分析,探讨PCOS患者卵母细胞质量下降的原因。方法 根据临床指征,选取2017年1～12月于中国科学技术大学附属第一医院生殖医学中心因男方因素行卵胞质内单精子注射技术（ICSI）助孕的患者115例,根据是否患有PCOS分为试验组和对照组,其中试验组为PCOS患者57例,对照组为非PCOS患者58例。所有患者均接受标准长方案控制性促排卵,共收集187枚卵母细胞用于透射电镜（TEM）的超微结构分析和mtDNA拷贝数的荧光实时定量PCR检测。其中试验组52枚用于超微结构观察,另38枚用于mtDNA拷贝数检测;对照组57枚和40枚分别用于超微结构观察和mtDNA拷贝数检测。对比观察试验组与对照组来源的卵母细胞超微结构各指标：透明带、卵周隙、微绒毛、皮质颗粒、高尔基体和内质网的形态和分布、线粒体的结构与数量。结果 与对照组相比,试验组卵母细胞的透明带、卵周隙、微绒毛、皮质颗粒、高尔基体、内质网等细胞结构和细胞器没有变化。但试验组卵母细胞内异常线粒体比例（58.7%高于对照组17.7%（P<0.05）,且线粒体数量试验组（44.3±9.6）个/切片低于对照组（65.4±12.7）个/切片（P<0.05）。同时,试验组卵母细胞所含的mtDNA拷贝数为（54 390±19 139）个,低于对照组的（88 135±44 235）个（P<0.05）。结论 PCOS患者卵母细胞内线粒体结构和数量均出现改变,可能与其卵母细胞质量受损有关。     

非酒精性脂肪肝与钙稳态关系的研究进展

钙离子（Ca²⁺）是细胞内重要的第二信使,其主要储存在内质网和线粒体中,参与调控细胞多种生理功能及维持内质网、线粒体功能。内质网和线粒体对钙离子的摄取与释放直接影响胞内钙离子水平的变化,继而影响细胞正常生理功能。病理条件下,细胞内钙离子稳态失衡,可引发细胞生理功能异常并进一步影响内质网、线粒体功能。非酒精性脂肪肝（NAFLD）是临床常见病和多发病,其主要病理特征是：肝脏脂肪样变性、内质网应激、线粒体损伤和非特异性炎性反应等。其中持续的内质网应激及线粒体功能障碍是NAFLD发生发展的重要诱因。而细胞内钙稳态的变化可直接导致内质网及线粒体功能异常,继而影响NAFLD的发生发展。本文主要从钙稳态的主要影响因素以及钙稳态变化与NAFLD的关系两方面进行阐述,为寻求和研发防治NAFLD的药物提供新的方向。     

哌唑嗪对去甲肾上腺素诱导心肌细胞凋亡的影响

目的：研究α受体拮抗剂哌唑嗪对去甲肾上腺素诱导的原代培养心肌细胞凋亡的影响。方法：采用噻唑蓝（MTT）法分析原代培养心肌细胞存活率;乳酸脱氢酶（LDH）外漏实验和吉姆萨染色实验观察原代心肌细胞损伤;JC-1免疫荧光实验检测线粒体膜电位变化;Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：NE（100 μmol·L^-1）作用于原代培养心肌细胞48 h,细胞存活率降低;LDH外漏增加;细胞形态改变,细胞数减少、胞体膨大、胞核居中、胞间间隙增大,呈明显病理学特征;线粒体膜电位降低;心肌细胞凋亡率增加。哌唑嗪明显改善去甲肾上腺素诱导的原代培养心肌细胞损伤,增加MTT值、降低LDH外漏量、改善心肌细胞病理形态、增加心肌细胞线粒体膜电位、降低心肌细胞凋亡率（P<0.05或P<0.01）。结论：哌唑嗪能显著抑制去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,本实验为α受体阻断剂改善高交感诱导心肌细胞凋亡提供实验基础与理论指导。