三氧化二砷对哮喘小鼠肺组织IκB-α表达和核因子κB激活的作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对哮喘小鼠肺组织核因子κB(NF-κB)激活和抑制蛋白IκB-α表达的影响,探讨As2O3抗炎作用的可能机制以及哮喘防治的新思路。方法BALB/c小鼠36只随机分为对照组、哮喘组(卵蛋白末次激发后1,4,12和24h)和As2O3治疗组(4mg/kg),每组6只。Diff-Quick染色观察支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)中嗜酸细胞募集特点,电泳迁移率实验和免疫印迹实验分别检测肺组织NF-κB活性和IκB-α表达水平。结果①哮喘组BALF中嗜酸细胞募集[(48.72±5.38)%]较对照组[(0.56±0.21)%]增加(q=33.46,P<0.01),治疗组较哮喘组减少(q=34.65,P<0.01)。②哮喘组肺组织NF-κB活性均较对照组增加(q=41.84,72.75,61.61,16.32,P<0.01或0.05),以4h活性最高,治疗组较哮喘组减少(q=89.48,P<0.01)。③哮喘组肺组织IκB-α表达较对照组减少(q=30.94,P<0.01),治疗组较哮喘组增加(q=23.67,P<0.01)。④BALF中嗜酸细胞募集、肺组织NF-κB活性与IκB-α表达水平均呈负相关(r=-0.82,-0.94,P<0.01)。结论肺组织NF-κB过度激活可能是哮喘慢性气道炎症持续存在的基础;诱导肺组织IκB-α表达和抑制NF-κB激活,可能是As2O3发挥广泛抗炎作用的重要机制。     

大量活性神经元细胞核的分离技术

背景：细胞分化、细胞融合乃至克隆均需要应用分离细胞核的方法以获得大量有活性的细胞核，但是目前很难在数量和质量上同时达到较高的水准。 目的：探索简单易行的分离细胞核的方法，为神经元细胞核移植、细胞拆合以及细胞核成分的研究提供大量完好有活性的细胞核。 设计、时间及地点：对比实验，于2006-09／2007-01在南京医科大学基础医学院卫生部抗体技术重点实验室完成。 材料：Cytochalasin B为Sigma公司提供，清洁级SD孕大鼠来源于南京医科大学动物实验中心。 方法：取胎鼠大脑皮质，进行神经元的培养并鉴定。用Cytochalasin B结合梯度离心法及细胞核分离液法两种方法进行细胞核分离的对比观察。 主要观察指标：用碘化丙啶标记后进行流式细胞仪检测凋亡率并用免疫荧光染色对细胞核进行形态学观察。 结果：两种方法均成功地分离出大量有活性神经元细胞核，且梯度离心法可以得到较为完整的胞质体，与完整细胞细胞核荧光强度比较无显著性差异（P〉0．05）。 结论：Cytochalasin B结合梯度离心法及细胞核分离液法均能够有效地进行神经元细胞核的分离，且细胞核在短期内有较高的活性。     

人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定

目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附-洗脱-扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆FabG2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定。结果构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆。选取的FabG2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合。结论成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆。hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础。     

伴巨块性淋巴结肿大的窦组织细胞增生症一例

伴有巨块性淋巴结肿大的窦组织细胞增生症(sinus histiocytosis、with massivelymphadenopathy,简称SHML)是一种特发性的、以双侧颌颈部淋巴结无痛性缓慢肿大为主要特点的良性病变。患者伴有发热、中性白细胞增高、血沉加速、多克隆γ-球蛋白血症等征候。本病较罕见,临床易误诊为恶性淋巴瘤。现报告1例如下。患者大,12岁。因双侧颈部肿块进行性肿大1年半,伴鼻塞、呛咳、呼吸困难2月,于1988年9月29日入院。体检:双侧颌     

细胞移植对脑出血脑损伤的保护作用

目前用于脑出血治疗研究的主要细胞有：神经干细胞、遗传工程神经干细胞、骨髓间质干细胞、脐血细胞、胚胎干细胞、重组细胞、微囊化人工细胞等，本文就前5种细胞移植在出血性脑损伤中的保护作用进行综述。干细胞移植在脑出血性动物身上的实验所取得的良好效果，显示细胞移植重建损伤的脑组织、改善脑功能成为治疗脑出血疾病的必然途径。临床实验也取得了一定效果，但要真正应用于临床目前还有许多问题要解决：要想准确的定向诱导细胞分化，需要更深入的研究局部微环境，细胞因子及基因对干细胞分化的作用；细胞移植促进脑出血功能的恢复，其确切的机制还需要进一步研究 ；诱导分化的神经干细胞是否能象正常神经细胞一样能分泌神经递质，是否具有复杂的电生理等。     

血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在乳房外Paget病中的表达和意义

目的:研究在乳房外Paget 病(extramammary Paget disease,EMPD)组织及相应病灶旁正常皮肤黏膜组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)蛋白表达之间的差异,并探讨它们在EMPD组织血管形成中的相互关系?方法:采用免疫组化法研究9例EMPD组织及相应病灶旁正常皮肤黏膜组织中VEGF及bFGF蛋白的表达,并结合临床资料进行统计分析?结果:通过配对t检验分析免疫组化染色检测结果,发现EMPD 组织中VEGF 及bFGF蛋白染色信号(信号评分)均显著强于癌旁正常皮肤黏膜组织(P < 0.05)?以bFGF 和VEGF基因蛋白免疫组化染色“信号评分比值”(bFGF/VEGF)进行配对t检验发现,EMPD 组织两基因蛋白“信号评分”比值显著高于癌旁正常黏膜组织(t = 2.630,P = 0.030)?结论:VEGF 和bFGF 基因的表达产物是EMPD肿瘤血管形成中的关键信号蛋白,其相互作用提供的刺激信号在EMPD的发生?发展中起着促进作用,尤其是bFGF基因的高表达可能起到更为关键的作用?     

抗炭疽毒素保护性抗原单克隆抗体的制备及功能分析

目的:原核表达炭疽杆菌保护性抗原PA10蛋白,制备单克隆抗体,并进行功能分析?方法:人工合成炭疽杆菌保护性抗原PA10编码基因并克隆入pUC57载体,酶切鉴定后,将PA10编码基因插入原核表达载体pColdⅡ中,测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG和低温条件下诱导蛋白表达,SDS-PAGE验证产物;用HiTrap IMAC HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步验证?以纯化获得PA10重组蛋白为抗原,常规程序免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,并检测所制备抗体的中和活性?结果:获得的PA10重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,最终获得了4株特异性的单克隆抗体(分别命名为2G8?5A8?7B3? 9C9)?经体外炭疽毒素保护试验证实,其中1株单抗(7B3)具有较强的中和活性,其保护率可高达96%?结论:本文成功构建并表达炭疽杆菌保护性抗原PA10,制备了具有中和活性的抗PA单克隆抗体,为构建人源化的抗PA中和抗体奠定基础,从而有望用于炭疽病的治疗?     

全人源抗狂犬病病毒G蛋白单链抗体制备及中和活性鉴定

目的:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,筛选针对狂犬病病毒G蛋白不同表位的单链抗体(scFv)并鉴定其中和活性?方法:分离130例经狂犬病疫苗免疫接种志愿者的外周血淋巴细胞,提取总RNA,逆转录制备cDNA,构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库?以纯化的狂犬病病毒G蛋白包板筛选,对阳性克隆进行可溶性表达,并鉴定中和活性?结果:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,库容为5.0 × 107,经核酸序列分析,证实插入片段为scFv?经过5轮筛选,从富集的次级抗体库中随机挑出140个克隆,通过phage-ELISA鉴定得到4株核酸序列不同的scFv抗体?经His-Trap纯化后进行中和活性鉴定,获得1株有中和活性的scFv,其中和效价为0.13 IU/mg?结论:构建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,获得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗体,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础?     

p16基因在口腔鳞癌中的缺失及其临床意义

目的 探讨ｐ１６基因的缺失表达与口腔鳞状细胞癌（ＳＣＣ）发生发展的关系。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ及免疫组化方法检测３０例口腔鳞癌中ｐ１６基因的缺失表达。结果 ３０例口腔鳞癌患者中１６例存在ｐ１６的缺失,缺失率为５３．３％。ｐ１６基因的缺失表达与口腔鳞癌的临床分期及淋巴结有无转移有关系（Ｐ〈０．０５）。结论 ｐ１６基因缺失可能参与了口腔鳞癌的癌变过程,ｐ１６基因的缺失表达可作为估计口腔鳞癌患者预后的一