人涎腺多形性腺瘤细胞体外培养及其生物学特性

目的 建立人涎腺多形性腺瘤细胞系。方法 取自腮腺多形性腺瘤患者的原发肿瘤进行体外培养。对培养的细胞进行活细胞观察和组织学染色。观察细胞生长状况，绘制生长曲线。采用免疫细胞化学检测细胞内特异性抗原标记物对细胞进行鏊定，并对肿瘤的致瘤性进行裸鼠异种移植实验。结果 多形性腺瘤体外培养细胞呈多边形或梭形，有的细胞围成腺腔结构，胞浆内富含粘液，形成空泡。有的成片排列，细胞外有粘液样物质。细胞的生长曲线较平缓，无明显快速生长期。肿瘤性腺上皮细胞角蛋白阳性，肿瘤性肌上皮细胞肌动蛋白阳性。结论 建立的涎腺多形性腺瘤有限细胞系(SPA-02)，保留了原代细胞的特点，并与原发肿瘤的组织学特征相似。     

肿瘤抗血管生成及其与免疫治疗关系的研究进展Research progress in relationship between tumor anti-angiogenesis and immunotherapy

免疫治疗是肿瘤治疗的重要方法之一,通过阻断特定的信号传导通路,增强免疫系统对肿瘤抗原的反应能力进而识别和破坏肿瘤细胞,用于多种恶性肿瘤的治疗。促血管生成因子和抗血管生成因子失衡可促进肿瘤异常血管的形成,是恶性肿瘤的常见特征,可产生低氧、酸性和间质压升高等微环境改变,使促进肿瘤免疫的细胞（如树突状细胞和淋巴细胞等）相对缺乏,抑制肿瘤免疫的细胞（如调节性T细胞、髓源性抑制细胞和肿瘤相关巨噬细胞等）增多,从而降低免疫治疗疗效。对恶性肿瘤患者行抗血管生成治疗不但可促进异常血管正常化和重塑肿瘤微环境,还可增加免疫效应细胞对肿瘤的浸润,提高免疫治疗的有效性。二者联合应用可起到协同增效作用,在肺癌、肝癌、肾癌和乳腺癌等多种肿瘤患者治疗中均观察到明显获益,且总体安全性可控。现就血管内皮生长因子（VEGF）与免疫细胞之间的相互作用、血管异常对肿瘤免疫的影响和抗血管生成联合免疫治疗的临床应用进行简要综述。     

胰腺导管腺癌微环境的研究进展

胰腺导管腺癌(PDAC)是一种恶性程度极高的消化系统实体肿瘤,具有起病隐匿、进展迅速、多种治疗效果不佳等特点.近年来,虽然PDAC在手术治疗、化疗、靶向治疗等方面取得一定进展,但PDAC患者的远期生存仍不理想.据2018年国际癌症研究机构统计,胰腺癌是全球癌症死亡的第七大原因,我国的发病率也正在逐年上升,其疾病负担不断加重.越来越多的研究显示,PDAC较差的预后与其肿瘤微环境的特点息息相关,PDAC肿瘤微环境研究是寻找新的治疗靶点极有潜力的方向.该文就近年PDAC微环境的研究进展作一综述,旨在为PDAC的研究提供一定的参考.     

新辅助同步放化疗对直肠癌微环境浸润免疫细胞的影响

目的 检测新辅助同步放化疗（CRT）前后直肠癌组织中肿瘤浸润免疫细胞数量和表型的变化,并分析它们与患者临床病理参数之间的相关性。方法 采用免疫组织化学染色ElivisionTM Plus法,检测20例直肠癌患者新辅助CRT前后的活检标本和术后病理标本组织中CD3、CD4、CD8、CD56、Foxp3蛋白的表达水平。结果 新辅助CRT后直肠癌肿瘤组织中CD3（21.8% vs 48.8%,P<0.001）、CD4（16.5% vs 42.2%,P<0.001）、CD8（8.3% vs 33.4%,P<0.001）和CD56（0 vs 7.6%,P=0.012）的表达均较前升高;Foxp3（26.0% vs 15.3%,P=0.005）表达较前下降;CD4/CD8（2.7 vs 5.1）比值较前无明显变化。多因素分析显示新辅助CRT后CD3（HR= 0.16,P=0.028）、CD8（HR= 0.03,P=0.001）阳性细胞的增加与患者术后无复发生存期正相关。结论 直肠癌新辅助CRT后肿瘤组织中CD3、CD4、CD8、CD56阳性浸润免疫细胞比例较治疗前明显增加,Treg淋巴细胞比例则明显下降,CD3、CD8阳性T淋巴细胞数量增加的患者其术后无复发生存期延长。     

中医药治疗原发免疫性血小板减少症免疫细胞调节作用的研究进展

原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种获得性自身免疫性出血性疾病,T淋巴细胞、B淋巴细胞活性的失调和细胞因子异常是ITP的主要发病机制。中医药通过调控辅助性T细胞、调节性T细胞、细胞毒性T细胞以及B细胞等免疫细胞,调节其相关细胞因子,降低血小板相关抗体,减少血小板破坏,改善机体免疫功能,以发挥治疗ITP作用。本文就近年来中医药治疗ITP免疫细胞调节作用机制的研究进展进行综述。     

基于癌症基因组图谱肺鳞状细胞癌免疫细胞浸润图景及预后分析

目的 探讨肺鳞状细胞癌组织免疫细胞浸润全景,构建预后风险评估模型,分析并评估患者的预后.方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库肺鳞状细胞癌全转录组数据,通过R 4.0.3软件利用CIBERSORT反卷积算法计算不同免疫细胞浸润相对含量,用单因素和多因素Cox回归分析建立预后风险评估模型,并用ROC曲线评估模型效能,结合临床变量绘制预测患者3、5、10年生存率列线图.结果 共涉及22种免疫细胞类型.正常组织中的8种免疫细胞亚群(初始B细胞、浆细胞、激活记忆CD4T细胞、滤泡辅助性T细胞、调节性T细胞、M0型巨噬细胞、M1型巨噬细胞、休眠树突状细胞)浸润相对含量均低于肺鳞状细胞癌组织(P＜0.05或P＜0.01),正常组织中的另外8种免疫细胞亚群[休眠记忆CD4T细胞、休眠自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、M2型巨噬细胞、激活树突状细胞、休眠肥大细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞]浸润相对含量均高于肺鳞状细胞癌组织(P＜0.01或P＜0.05),其余免疫细胞亚群(记忆性B细胞、CD8T细胞、初始CD4T细胞、γ/δT细胞,激活NK细胞、激活肥大细胞)在两组间差异均无统计学意义(P均＞0.05).初始CD4T细胞、休眠记忆CD4T细胞对肺鳞状细胞癌患者是危险因素(HR＞1),而激活记忆CD4T细胞、滤泡辅助性T细胞、休眠树突状细胞则是保护因素(HR＜1).激活记忆CD4 T细胞、休眠树突状细胞浸润相对含量高的肺鳞状细胞癌患者预后较相对含量低的患者好(P＜0.05).用激活记忆CD4T细胞、滤泡辅助性T细胞、休眠树突状细胞构建的肺鳞状细胞癌患者预后风险评估模型的效能良好,ROC曲线的AUC为0.678.结论 休眠树突状细胞、激活记忆CD4T细胞与肺鳞状细胞癌的发生、预后有关,并且可以作为独立的预后因子.预后相关免疫细胞亚群构建的预后风险评估模型效能良好.     

补体C3a受体1与低级别胶质瘤预后及免疫细胞浸润的关系

目的 借助癌症基因组图谱(TCGA)数据库研究低级别胶质瘤(LGG)组织中补体C3a受体1(C3AR1)的表达水平及其与LGG患者预后及肿瘤免疫细胞浸润的关系.方法 从TCGA数据库下载514例LGG患者的基因表达谱数据和临床信息.比较C3AR1基因在LGG组织和正常组织中的表达水平,分析不同WHO分级LGG组织样本中C3AR1基因的表达量及与患者预后的关系,分析LGG患者临床特征和C3AR1基因表达水平对患者预后的影响,分析LGG组织中C3AR1基因表达与肿瘤免疫细胞浸润的相关性及免疫细胞浸润水平对患者预后的影响.对与C3AR1基因表达呈正相关的基因群进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果 LGG组织中C3AR1基因表达水平高于正常组织(P<0.05).C3AR1基因在WHOⅢ级LGG组织中的表达高于WHOⅡ级(P<0.05),C3AR1基因低表达组患者的预后优于高表达组(HR=1.7,95％CI 1.1～2.4,P=0.0036).患者年龄、LGG级别和C3AR1基因表达水平是LGG的独立预后因素(P均<0.01).C3AR1基因的表达水平与LGG的免疫细胞浸润水平呈正相关(P均<0.01),且后者影响LGG患者预后.与C3AR1基因表达呈正相关基因群的干扰素 γ介导的信号通路、Ig/主要组织相容性复合体(MHC)保守位点、Ig样Cl型结构域、MHCⅠ/Ⅱ类抗原识别蛋白、连接肽特定区域、Toll样受体信号通路等多条通路参与调控LGG.结论 C3AR1与LGG的预后和免疫细胞浸润有关,可能成为LGG分级诊断、免疫治疗和预后判断的生物标志物.     

基于生物信息学分析肾透明细胞肉瘤核心基因及免疫细胞浸润

目的 基于基因表达汇编(GEO)数据库挖掘肾透明细胞肉瘤(CCSK)的核心基因并分析肿瘤和正常组织间免疫细胞浸润情况,为CCSK的诊疗提供新方向.方法 对GEO数据库中GSE49972及GSE2712数据集进行联合分析,筛选CCSK和正常胚肾组织间的差异表达基因,并对差异表达基因进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,鉴定CCSK的核心基因,同时对CCSK及正常胚肾组织进行免疫细胞浸润分析.结果 共筛选出740个差异表达基因,GO功能富集分析结果显示这些差异表达基因集中在细胞外结构组织、细胞外胶原基质、细胞黏附分子结合等功能模块.KEGG信号通路分析结果显示差异表达基因参与的主要信号通路富集于PI3K/Akt信号通路、肿瘤转录失调、黏着斑、钙离子信号通路及肿瘤蛋白多糖等.蛋白质-蛋白质相互作用网络分析发现核心模块中密封蛋白家族和钙黏着蛋白家族权重较大.免疫细胞浸润分析发现大多数免疫细胞在CCSK组织中浸润程度低,但CD4 T细胞浸润程度较高.结论 密封蛋白和钙黏着蛋白等相关通路及核心基因在CCSK中发挥重要作用,可作为潜在的治疗靶点.免疫检查点与特定激酶抑制剂的联合应用可能提高对CCSK的免疫治疗效果.     

免疫效应细胞增殖与细胞毒性功能检测3种方法的比较

目的：对比研究用于检测免疫效应细胞增殖与细胞毒功能的方法。方法：分别采用CCK?8法、EdU标记法、CFSE标记法检测不同培养条件下NK92细胞增殖［组1：100 U/mL白细胞介素（interleukin,IL）?2;组2：100 U/mL IL?2+10 U/mL IL?15］。用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放法、活细胞染料双标流式法、荧光素酶法检测两组NK92对K562细胞的杀伤。结果：CCK?8法检测结果提示组2增殖能力强于组1,但差异无统计学意义（P＞0.05）,而EdU和CFSE标记法均提示两组间增殖能力有显著差异（P＜0.05）。活细胞染料双标流式法与荧光素酶法均能够检测出不同效靶比下两组NK92细胞毒功能的差异（P＜0.05）,LDH释放法在低效靶比下未检测出两组细胞毒性的差异（P＞0.05）。以双标流式法的检测值为标准参照,荧光素酶法和LDH释放法的检测值与其呈显著相关性（rS=0.979 4,P＜0.001;rS=0.973 2,P＜0.001）。结论：CCK?8法更侧重于检测代谢活性,EdU和CFSE标记法更适用于悬浮类免疫细胞的增殖检测。3种细胞毒功能检测具有一致性,活细胞染料双标流式法适合检测对悬浮类靶细胞的杀伤,荧光素酶法比LDH释放法更适用于检测对贴壁细胞的杀伤作用。     

免疫细胞化学标记在积液细胞学鉴别诊断中的应用

目的 探讨免疫细胞化学特异性标记非肿瘤性增生的间皮细胞、转移性腺癌及恶性间皮瘤细胞在积液细胞学鉴别诊断中的意义。方法 浆膜腔积液标本170例，苏木素-伊红（HE）染色，镜检细胞学形态，免疫细胞化学标记一系列单克隆抗体：癌胚抗原（CEA）、上皮细胞膜抗原（EMA）、细胞角蛋白（CK）、上皮相关抗原（MOC-31）、上皮细胞钙粘蛋白E、波形蛋白（VIM）和结蛋白。酶染色采用生物素化酶二步法。采用双盲法阅读免疫细胞化学染色结果。结果 上述几种抗体在反应性增生的间皮细胞、癌和恶性间皮瘤3组标本中表达差异有统计学意义（P〈0．01）。其中癌症组的CEA、EMA、MOC-31、钙粘蛋白E和CK阳性表达率分别为88％、97％、89％、92％和94％，而VIM和结蛋白呈现低表达，阳性表达率分别为6％和11％。良性间皮细胞标本组中，VIM和结蛋白阳性表达率分别为84％和91％，而CEA、EMA、MOC-31、钙粘蛋白E显示低表达，阳性表达率分别为13％、16％、9％和6％。恶性间皮瘤标本组中，CK、VIM、结蛋白呈现强阳性表达，阳性率为100％，而CEA、EMA、MOC-31、钙粘蛋白E表达呈阴性。结论 选择一组特异性免疫细胞化学标记，可帮助传统的细胞形态学检查，对良、恶性浆膜腔积液的鉴别诊断起重要作用。