间接免疫荧光试验在生殖器疱疹诊断中的应用

目的评价间接免疫荧光试验(IFA)在生殖器疱疹(GH)诊断中的应用价值。方法采用以单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体为夹心的IFA方法,检测了120例临床诊断为GH患者皮疹中的HSV,并与病毒培养法进行比较。结果 IFA检测HSV的总阳性率为85.8%,高于病毒培养法的阳性率(70.8%,χ2=12.04,P0.01)。两种方法检测GH患者皮肤水疱内的HSV阳性率分别为93.3%和90.0%,差异无统计学意义(χ2=1.96,P0.05);而检测糜烂和结痂性皮疹内的HSV时,IFA的阳性率分别为92.6%和69.4%,均分别高于病毒培养法(75.9%,χ2=5.82,P0.05;47.2%,χ2=14.17,P0.01)。结论 IFA具有简单、快速、敏感性高的优点,适用于检测GH患者皮疹内HSV,有临床实用价值。     

尼古丁调控人牙周膜细胞自噬水平的实验研究

目的 探讨尼古丁对人牙周膜细胞（hPDLCs）自噬水平的影响。方法 选取因正畸治疗而拔除的前磨牙,采用组织块法分离培养hPDLCs。通过Western blot法筛选尼古丁影响hPDLCs自噬的最佳作用时间及浓度,使用透射电子显微镜（TEM）和免疫荧光染色法检测该作用时间及浓度下hPDLCs自噬体形成情况和自噬标志蛋白LC3的表达情况。结果 LC3Ⅱ蛋白表达在尼古丁作用的12 h内持续升高,从而确定12 h为最佳作用时间;LC3Ⅱ蛋白表达上调具有尼古丁浓度依赖性,1×10^-5 mol·L^-1为尼古丁最佳作用浓度。TEM和免疫荧光染色证实尼古丁在此浓度及作用时间下hPDLCs细胞质内自噬体的数量增加,自噬标志蛋白LC3表达升高。结论 在一定条件下,尼古丁能够上调hPDLCs自噬水平,为进一步研究细胞自噬与吸烟相关牙周炎的关系奠定了基础。     

115例复治涂阳肺结核患者耐药状况及耐药原因分析

目的 探讨115例复治涂阳肺结核患者的耐药状况并分析耐药形成的原因。方法 于2014年1月至2017年3月收集陕西省结核病防治研究所及西京医院门诊新登记的所有复治涂阳肺结核患者,共115例,将其痰标本进行分枝杆菌分离培养及菌种鉴定,经培养分离出分枝杆菌97株,其中获得药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果者93株,菌种鉴定为非结核分枝杆菌2株,结核分枝杆菌91株;将此91例肺结核患者作为研究对象,对6种抗结核药物[利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(Sm)、乙胺丁醇(EMB)、左氧氟沙星(Lfx)、卡那霉素(Km)]进行药敏试验,分析耐药情况并进一步调查分析耐药形成的原因。结果 91例复治涂阳肺结核患者总耐药率为42.86%(39/91),单耐药率为30.77%(28/91),多耐药率为6.59%(6/91),耐多药率为4.40%(4/91),广泛耐药率为1.10%(1/91);单耐药率顺位由高到低依次为Lfx(12.09%,11/91),Sm(7.69%,7/91),RFP(5.49%,5/91),INH(2.20%,2/91),EMB(2.20%,2/91),Km(1.10%,1/91)。耐药原因分析发现,医原性因素占57.14%(16/28),患者自身因素占28.57%(8/28),药物因素占14.29%(4/28)。结论 115例复治涂阳肺结核患者总耐药率较高,不规范的抗结核药物治疗是耐药形成的主要原因。     

抗汉坦病毒单链抗体基因向拟南芥遗传转化的初步研究

目的构建抗汉坦病毒mAb1A8scFv的转基因拟南芥植株。方法从含有1A8scFv基因的重组质粒中酶切获得携带Nos终止子的抗体基因片段,将其与CaMV35S启动子相连克隆入载体pCAMBIA2301,构建1A8scFv基因的植物表达载体1A8scFv-pCAMBIA2301。通过农杆菌介导的花粉管法将其转入拟南芥,PCR及Dotblot检测是否获得转基因植株,ELISA和固相酶联斑点实验检测表达产物的生物学活性。结果酶切鉴定结果证明1A8scFv基因被成功克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建获得1A8scFv-pCAMBIA2301重组质粒。PCR及Dotblot检测证明获得抗汉坦病毒mAb1A8scFv的转基因拟南芥植株。ELISA和固相酶联斑点实验结果证明在转基因拟南芥中成功表达了具有生物学活性的抗汉坦病毒mAb1A8scFv片段。结论成功地将外源基因转入拟南芥中并表达,为进一步研究利用植物表达医用抗体奠定了基础。     

汉滩病毒S、M基因部分片段嵌合基因原核载体的构建及表达产物的鉴定

目的　将汉滩病毒核蛋白 (NP)主要抗原位点活性片段与囊膜糖蛋白G2进行融合原核表达及鉴定 ,为该融合蛋白的真核表达及汉滩病毒基因工程疫苗研究打基础。方法　构建了汉滩病毒 76 - 118株M基因G2 片段与S基因 5’端70 0bp片段的嵌合片段原核表达载体pGEX - 4T1-G2 S0 7,诱导表达相应的融合蛋白 ,用Westernblotting和ELISA方法进行鉴定。结果　酶切结果显示成功构建了原核表达载体 pGEX - 4T1-G2 S0 7。IPTG诱导表达 4h后 ,Westernblotting显示诱导出分子量约 10 0kD的含GST的融合蛋白 (GST -G2 N0 7)。ELISA结果表明该融合蛋白与抗汉坦病毒NP特异性McAb有较高的结合活性 (P/N值为 0 71/ 0 0 7) ,与抗汉滩病毒糖蛋白特异性McAb也有较弱的结合活性 (P/N值为 0 2 1/ 0 0 8)。结论　S、M基因拼接方式是成功的 ,能够表达出有活性的汉滩病毒G2 糖蛋白与NP片段的融合蛋白。     

日本脑炎病毒DNA疫苗和基因工程亚单位颗粒疫苗的动物保护实验研究

目的　评价 3种日本脑炎病毒 (JEV)新型疫苗 ,即E蛋白病毒样颗粒 (VLPs)、DNA疫苗 (pV/JE)以及E蛋白颗粒 (Eps)的动物免疫效果。方法　BALB/c小鼠经 2次接种疫苗后 ,测定其病毒特异性的CTL活性、结合抗体、中和抗体 ,并以10LD5 0JEV攻击免疫小鼠 ,观察其保护效果。结果　各新型疫苗组的CTL活性为 33%～ 5 6 % ,灭活疫苗组为 2 2 % ,而载体和PBS对照组的CTL活性分别为 17%和 18%。一次免疫后 ,实验组小鼠血清结合抗体阳转率为 90 %。除DNA疫苗组外 ,各组小鼠的二次免疫血清抗体效价高于一次免疫的抗体效价 (P <0 0 5 ) ,且以VLPs加佐剂组小鼠血清抗体效价最高 ,Eps加佐剂组次之 ,均高于 pV/JE组和灭活疫苗组 (P <0 0 5 )。三种疫苗可诱发小鼠产生中和抗体。各实验组小鼠能够抵抗JEV的攻击 ,而对照组小鼠的死亡率为 37 5 %。结论　三种新型疫苗可以正确表达JEV的E蛋白表位 ,可诱发免疫小鼠产生抗JEV的中和抗体并有保护性作用 ,免疫效果优于灭活疫苗 ,有可能成为候选的JEV新型疫苗。     

神经营养素-3重组腺病毒Ad-NT-3的培养和鉴定

目的 培养和鉴定重组腺病毒载体Ａｄ－ＮＴ－３。方法 在２９３细胞中培养扩增Ａｄ－ＮＴ－３，用组织培养半数感染量测测定其滴度。从病毒培养上清中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应技术扩增ＮＴ－３部分基因片段，将扩增产物克隆并进行序列分析以测定Ａｄ－ＮＴ－３中ＮＴ－３的存在及种属。结果 Ａｄ－ＮＴ－３扩增后获得了较高滴度的病毒。从形态学证实Ａｄ－ＮＴ－３扩增后获得了较高滴度的病毒。从形态学证实Ａｄ－ＮＴ－３含有     

阿霉素毫微粒肝动脉灌注后在荷肝肿瘤鼠体内的分布研究

目的 检测阿霉素毫微粒（ＮＡＤＭ）与游离阿霉素（ＦＡＤＭ）经肝动脉灌注后荷肝肿瘤鼠体内的药物分布，并比较其差异。方法 ＳＤ纯系大鼠３０只，建立Ｗ２５６移植性肝癌模型并随机分为两组，每组各１５只动物，经肝动脉以２ｍｇ／ｋｇ药物剂量分别注入ＮＡＤＭ与ＦＡＤＭ，每组于给药后１小时，５小时，１５小时各处死５只大鼠，分别提取血浆，肝，心，脾，肺，肾，肝肿瘤样品，采用反相高效液相色谱荧光检测法（ＲＰ－ＨＰＬＣ     

单克隆抗体技术创立的辩证思维过程及其研究方法的探讨

1984年诺贝尔医学奖金获得者为三位免疫学研究的开创人,英国剑桥大学分子生物学研究室的C. Milstein和瑞士巴塞尔免疫研究所的N. K. Jerne及G. K(?)hler。他们的卓越贡献主要在于1975年首次应用淋巴细胞杂交瘤技术,制造出了高纯度、高度特异性的单克隆抗体(McAb)。这种McAb技术现已在世界各国生物医学领域内得到了广泛的应用,取得了巨大的研究成果,发挥了令人瞩目的社会效益和经济效益。被誉为80年代生物学和医学研究领域里的一场技术革命。     

肾综合征出血热血凝抑制试验对高岭土去除血清中非特异性抑制物方法的改进

在用微量HIT检测HFRS病人血清中血凝抑制抗体时,对高岭土去除血清中非特异性血凝抑制的方法进行了改进,并与血球吸收去除血清中非特异性凝集物同步进行。试验表明,这种改良的高岭土一步法处理血清的效果与氯仿法相似。但本法操作简便,需时短,经检测病人血清并与IFA比较,两者无显著差异。