汉滩病毒S基因5''端311bp编码蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析

目的进一步了解汉滩病毒核蛋白氨基端的抗原特性. 方法构建汉滩病毒S基因5端311 bp片段的原核表达载体,并诱导表达和纯化了Mr 3.6×104的融合蛋白(汉滩病毒核蛋白氨基端Mr 1.0×104与Mr 2.6×104 GST融合);用mAb,以Western-blot和ELISA方法对该蛋白的抗原位点进行了鉴定. 结果与完整核蛋白反应的mAb中仅有部分与Mr 3.6×104融合蛋白反应,而与核蛋白氨基端Mr 2.6×104片段反应的5株mAb(1A8,A35,8E8,3A9,3G11)都能与Mr 3.6×104融合蛋白反应. 结论汉滩病毒核蛋白氨基端Mr 1.0×104以内存在一个或几个线性表位,而羧基端可能主要起着维持完整核蛋白立体构象的作用,并影响识别立体表位的mAb与该蛋白的结合.     

细胞自噬在病毒感染与免疫过程中的作用

自噬是细胞维持内环境稳态的一种保护机制,不仅调节细胞代谢,在应激条件下,自噬通过降解并回收利用细胞成分促进细胞存活。在病毒感染过程中,自噬作为监督机制将病毒抗原传递给富含免疫感应器的内体/溶酶体,激活固有免疫反应,自噬还可加工提呈病毒抗原激活适应性免疫反应,此外,自噬体本身就可降解病毒。然而,病毒为了逃避自噬,也进化出许多阻止自噬的方式。由于自噬的抗病毒作用,人们期望利用自噬对微生物感染进行治疗。本文对自噬在抗病毒免疫中的作用及其潜在应用价值的研究进展进行综述。     

利福平抗黄热病毒感染的效果及初步机制

目的 检测利福平抗黄热病毒(YFV)感染的效果并初步探索其机制.方法 用不同浓度(0.04、0.2、1、5、25、125、625μmol/L)的利福平处理人肝癌细胞Huh-724 h,通过CCK-8检测利福平的细胞毒性并计算其细胞半数毒性浓度(CC50).YFV感染Huh-7细胞的同时加入不同浓度(0.04、0.2、1...     

脑型疟小鼠小胶质细胞的活化特征分析

目的 利用血脑屏障分隔小胶质细胞与外周巨噬细胞,探讨小胶质细胞在实验型脑型疟(experimental cerebral malaria,ECM)发生中的活化特征.方法 利用依文思兰渗出法确定ECM小鼠血脑屏障开放时间,在不同感染时间点,采用流式细胞技术和间接免疫荧光法检测小胶质细胞的活化特征,采用实时荧光定量PCR技...     

汉滩病毒S、M基因部分片段嵌合基因原核载体的构建及表达产物的鉴定

目的　将汉滩病毒核蛋白 (NP)主要抗原位点活性片段与囊膜糖蛋白G2进行融合原核表达及鉴定 ,为该融合蛋白的真核表达及汉滩病毒基因工程疫苗研究打基础。方法　构建了汉滩病毒 76 - 118株M基因G2 片段与S基因 5’端70 0bp片段的嵌合片段原核表达载体pGEX - 4T1-G2 S0 7,诱导表达相应的融合蛋白 ,用Westernblotting和ELISA方法进行鉴定。结果　酶切结果显示成功构建了原核表达载体 pGEX - 4T1-G2 S0 7。IPTG诱导表达 4h后 ,Westernblotting显示诱导出分子量约 10 0kD的含GST的融合蛋白 (GST -G2 N0 7)。ELISA结果表明该融合蛋白与抗汉坦病毒NP特异性McAb有较高的结合活性 (P/N值为 0 71/ 0 0 7) ,与抗汉滩病毒糖蛋白特异性McAb也有较弱的结合活性 (P/N值为 0 2 1/ 0 0 8)。结论　S、M基因拼接方式是成功的 ,能够表达出有活性的汉滩病毒G2 糖蛋白与NP片段的融合蛋白。     

植物抗体及其应用

20世纪80年代末科学家将抗体基因转入烟草表达,标志着植物抗体的诞生.人类既可以以植物为生物反应器异源表达和生产具有药用及商业价值的蛋白质;也可用抗体在植物体中进行免疫调节,以研究植物生理代谢机制,或增加植物抵抗病虫害的能力.本文旨对植物抗体的优越性、表达生产及其在医药学、植物抗病及代谢等领域的进展进行综述和讨论.     

汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定

目的在本室前期工作的基础上构建汉滩病毒M基因G1片段与S基因0.7kb片段嵌合基因的重组腺病毒。方法构建含有汉滩病毒G1S0.7嵌合基因的转移载体pShuttle-G1S0.7,然后通过特异性的酶切将嵌合基因与腺病毒DNA相连,电转化E.coli JM109,获得重组腺病毒Adeno-G1S0.7 DNA,转染HFX293细胞得到重组腺病毒。进一步对重组腺病毒的滴度和表达产物进行鉴定。结果构建的含G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒,滴度可达10^13～10^15 PFU／L;该重组腺病毒感染Vero-E6细胞后,表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1的特异性单抗（mAb）所识别的融合蛋白。结论利用腺病毒表达系统,成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G1生物学活性的融合蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。     

电教片与医学生素质教育

素质教育是现代教育科学中的一个组成部分，在医学教学中显得尤为重要，而电教片具有直观性、生动性、浓缩性等优点，因而它的制作与使用已经成为全面提高医学生综合素质的一种不可替代的教学手段。     

神经营养素-3重组腺病毒Ad-NT-3的培养和鉴定

目的 培养和鉴定重组腺病毒载体Ａｄ－ＮＴ－３。方法 在２９３细胞中培养扩增Ａｄ－ＮＴ－３，用组织培养半数感染量测测定其滴度。从病毒培养上清中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应技术扩增ＮＴ－３部分基因片段，将扩增产物克隆并进行序列分析以测定Ａｄ－ＮＴ－３中ＮＴ－３的存在及种属。结果 Ａｄ－ＮＴ－３扩增后获得了较高滴度的病毒。从形态学证实Ａｄ－ＮＴ－３扩增后获得了较高滴度的病毒。从形态学证实Ａｄ－ＮＴ－３含有