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乙型肝炎患者外周血单个核细胞中乙肝病毒前S/S基因片段的检测 总被引:2,自引:0,他引:2
1. 资料与方法:(1)研究对象:19例慢性乙型肝炎患者均符合1995年第6次全国病毒性肝炎会议诊断标准,为瑞金医院1998年门诊及住院患者,年龄12~46岁,平均32.79岁,女4例,男15例。同时收集PBMC和配对血清,并记录病程及ALT浓度。(2)分离PBMC及提取DNA:抽取肝素抗凝血7ml,用比重1.077的聚蔗糖-泛影葡胺液分离淋巴细胞,2500r/min,15min,吸出淋巴细胞,用HanKs液将细胞清洗5次,以去除可能残留的血浆DNA,分别收集第5次洗涤液(500μl)及细胞,提取PBMC DNA,DNA溶于500μl TE缓冲液。(3)血清及洗液中DNA的抽提:从500μl PBMC洗液及100μl血清中提取DNA后,分别溶于30μl及20μl TE缓冲液。 相似文献
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ExperimentalstudyonpathogenicityofprecoremutantsinHepadnaviridaeMaZhangmei马张妹,WenYumei闻玉梅,XiongSidong熊思东,ZhaiWeirong翟为溶,HeLif... 相似文献
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目的 评价小鼠重组乙肝病毒表面抗原(HBsAg)鼻腔黏膜免疫效果,寻找非注射乙肝免疫途径.方法 Balb/c小鼠分别经鼻腔、舌下及肌注给予重组HBsAg免疫3次,以支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清抗HBsAg抗体水平评价3种途径的免疫效果.结果 经鼻腔免疫小鼠BALF可检测到IgA抗体,提示产生黏膜免疫:与肌注免疫类似,经鼻腔免疫小鼠血清IgG滴度大于1:500,提示产生体液免疫.结论 重组HBsAg经鼻腔免疫小鼠可同时产生体液免疫和黏膜免疫,提示鼻腔黏膜免疫可能是有效的非注射乙肝免疫途径. 相似文献
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乙型肝炎病毒S基因129Leu和145Arg变异株的抗原表达与DNA免疫研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究我国发现的乙肝病毒S基因突变株(129Leu和145Arg)表达HBsAg及DNA免疫的特性. 方法 用自乙肝疫苗免疫无保护婴儿血清中克隆的2株变异S基因(其中"a"决定簇突变,分别为nt540A→T,aa129Gln→Leu和nt587G→A,aa145Gly→Arg)片段,置换已知核苷酸序列并可表达及复制的HBV1.2个拷贝全基因野毒株重组质粒p3.8Ⅱ的S基因.将重组质粒转染HepG2细胞,用Abbott试剂和24种单抗检测转染细胞培养上清中HBsAg的结合力.用重组质粒DNA肌肉免疫小鼠. 结果 129Leu变异株转染细胞上清对HBsAg酶联免疫反应检测的吸光度(A)值高于p3.8Ⅱ野毒株,而145Arg变异株的A值低于p3.8Ⅱ;用24种单抗测定的总趋势为129Leu表达的HBsAg 的S/C值高于p3.8Ⅱ,而145Arg的结果则低于p3.8Ⅱ.三者表达的HBeAg水平相似.用DNA免疫经129Leu诱生的抗-HBs水平低于野毒株p3.8Ⅱ,但略高于145Arg. 结论 129Leu变异株表达的HBsAg与HBs多抗及单抗的结合力较野毒株明显增高,但129Leu 变异株DNA免疫诱生的抗-HBs水平却低于野毒株p3.8Ⅱ.免疫原性低下可能有利于129Leu致持续性感染. 相似文献