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为了更加全面、客观地检测国产丙型肝炎诊断试剂的质量,特别是对用于筛查献血员的诊断试剂进行严格的质量控制,在建立第一代丙型肝炎诊断试剂质控参考品的基础上,用雅培、联合生物技术公司、北京生物制品研究所等国内外试剂对400份血浆进行检测,选出198份血浆,用多种试剂及不同的方法(酶联免疫吸附试验、免疫斑点试验、聚合酶链反应)对其进行了反复的核验,建立了我国第二代丙型肝炎诊断试剂质量控制参考品。用此参考品对国产试剂进行了检定并制定了相应的检定标准,此套参考品及检定标准已获卫生部批准。 相似文献
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目的分析HBVDNA载量与血清学标志物的相关性。方法应用乙型肝炎病毒核酸试剂定量检测468份献血员样本HBVDNA含量,并分别定性或定量检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc及抗-HBcIgM血清学标志物,计算不同病毒核酸水平样本中5个乙肝血清学标志物阳性率及HBsAg、抗-HBs水平的分布情况。结果HBVDNA阴性样本中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc阳性率分别为12.8%、39.8%、0、21.1%、49.6%,而HBVDNA阳性样本中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc血清学标志物阳性率分别为91.3%、0.7%、20.9%、65.0%、88.6%,血清学指标在不同HBVDNA水平的阳性率差异具有统计学意义(χ2=197.4,P<0.01)。HBVDNA载量与HBsAg水平成正相关性,与抗-HBs水平成负相关性。结论低水平的HBsAg在不同HBVDNA载量水平的样本均有分布,HBsAg检测能力需要进一步提高,另外在我国人群中存在低乙型肝炎病毒核酸水平携带者,乙型肝炎病毒核酸可以弥补血清学检测试剂的不足。 相似文献
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戊型肝炎病毒Ⅳ型全基因序列的分析 总被引:16,自引:0,他引:16
目的 分析戊型肝炎病毒(HEV)Ⅳ型的全基因序列以比较与其他基因的差异。方法 设计PCR引物对全基因进行分自然扩增,并两个末端采用末端快速扩增方法(RACE)进行扩增,对扩增产物进行克隆及测序。结果 HEV-T1全序与Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的核苷酸同源性分别为(74.8-75.5)%、74.5%和(75.3-76.3)%。ORF1与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型氨基酸同源性分别为(85.0-86.7)%、85.0%和(88.5-88.7)%;ORF2与已报道的Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型的氨基酸同源性分别为(91.6-92.4)%、90.1%和(91.9-93.0)%。ORF3与已报道的Ⅰ型、Ⅱ和Ⅲ型的氨基酸同源性分别为(75.9-77.8)%、75.0%和(79.6-83.3)%。结论 这一研究为今后发展戊型料诊断试剂及戊型肝炎疫苗提供了新的、重要的分子生物学基础。 相似文献
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新型戊型肝炎病毒ORF2部分基因的构建表达及表达产物的抗原性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的对新型戊型肝炎病毒ORF2的3′端部分基因进行重组质粒构建及融合表达,并对表达蛋白进行抗原性分析。方法用PCR方法从含有HEVORF2基因的pGEM-T载体上扩增表达片段,双酶切后与原核表达载体pThioHisA构建重组质粒pThioHisA-T11。诱导表达后进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。并用纯化的融合蛋白建立EIA检测方法,对40份抗-HEVIgG国家参比血清进行检测。结果含有pThioHisA-T11重组质粒的菌株表达相对分子质量为40×103的可溶性融合蛋白T11,免疫印迹证明融合蛋白T11能与抗HEVIgG发生特异反应。EIA检测结果显示,阳性参比血清符合率为80%(8/10),阴性参比血清符合率为87%(26/30),总符合率为85%。结论表达了新型HEVORF2羧基端278氨基酸并证明有抗原活性,为今后提高HEV检出率奠定了基础。 相似文献
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新的病毒致病原出现后,其检测方法的建立就大量使用最新技术和最新材料,使得诊断试剂能够快速诊断或得到高通量的信息,这是病毒学诊断试剂的发展趋势之一。具体体现在:①大型化、集约化、规模化、自动化、高通量筛选。一次获得多个相关病原体信息,并能分析、鉴别所获得的检测结果。②家庭化、快速化、简便化。适合家庭保健和自我防护,适应早期、快速诊断的要求。③从宏观向微观方向发展,从定性到定量直至微量方向发展,在分子生物学水平进行检测,以获得更准确的病毒基因信息。这些发展又是相辅相成、互相融合的。 相似文献
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乙型肝炎病毒全基因克隆及序列分析发现一D/C基因型重组株 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 构建含有adr、adw、ayw3个血清型的HBV全基因组质粒,并进行测序及序列分析。方法 从HBsAg携带者的血清中扩增出S区克隆,筛选出adr、adw、ayw血清型的血清,然后扩增HBV的全基因组,对扩增产物进行克隆测序。利用DNAStar的MegAlign,Phylogenetic tree对HBV全基因序列以及分段序列进行比较和进化树分析。结果 构建了含有adw、adr、ayw 3种血清型的HBV全基因组质粒,代码分别为:H1、H2、H3,对3株完成序列测定,按照S区核苷酸顺序划分基因型分别为B、C、D,全序列分型显示H1、H2为B、C基因型,与按S区的分型一致,但H3为C基因型,与按S区的分型不同,进一步的序列分析表明H3为一株异常的基因型,按照S区和preS2区分型为D基因型,但是全基因组/C/P/X区的进化树分析,H3株均位于C基因型,提示该异常的基因型可能是由于D/C基因型间基因重组引起,对重组位点进行了分析:3181nt-10nt、799-834nt为可能的重组位点所在区。结论 H3病毒株的发现进一步证明了HBV基因型间的基因重组,但澄清该问题需要在HBV感染的高流行区进一步的积累HBV异常基因型的全序列,以及发现新的基因型资料。 相似文献
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猪戊肝病毒的克隆和部分序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:调查戊型肝炎病毒(HEV)对猪的感染情况。方法:用HEV抗体试剂盒检测猪血清中的抗体;用逆转录聚合酶链方法(RT-PCR)检测猪血清中的HEV RNA,对PCR阳性产物进行克隆测序,并对序列进行分析。结果:10份猪血清中有1份为HEV抗体阳性,2份为HEV RNA阳性,其中1份为抗体和RNA均阳性。序列分析显示,从猪中克隆的2株序列(G6和G8)之间在ORF1(102-387bp)和ORF2(6007-6354bp)区域的核苷酸序列的同源性分别为94%和93%,该2株序列在ORF1区在HEVⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ型的同源性分别为76%-79%、80%、79%-80%、88%-90%、75%-76%、79%、78%-79%和75%-78%;在ORF2区与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型的同源性为75%-77%、74%-77%、77%-78%和84%-99%,与ⅣA亚型的同源性为93%-97%。结论:猪感染的HEV的基因序列与人群中散发性戊型肝炎病毒的ⅣA亚型同源性最高。 相似文献