实现慢性乙型肝炎治愈的战略计划及路径研究(美国国立卫生研究院2019年11月)

尽管高效的乙型肝炎预防性疫苗已经普及了30多年,但HBV感染仍在继续蔓延。每年约有90万人死于暴发性肝炎(急性肝功能衰竭)和慢性HBV感染导致的肝硬化(肝脏瘢痕形成)、肝功能衰竭和肝细胞癌(HCC)等。HCC作为一种主要由HBV慢性感染所导致的癌症,其发病率在世界范围内也在逐步上升。     

蛋白质乙酰化对HBV复制的影响

目的探讨宿主细胞蛋白质乙酰化修饰对HBV复制的影响。方法采用去乙酰化酶抑制剂制滴菌素A(TSA)和尼克酰胺(NAM)刺激HBV复制细胞模型Hep G2.2.15和Hep AD38,并检测细胞内的HBV复制指标。采用Western Blot检测广谱乙酰化蛋白和乙酰化组蛋白H3的表达水平。结果 TSA和NAM刺激细胞会引起细胞内蛋白质的乙酰化水平升高,且乙酰化修饰水平增高呈时间和浓度依赖的变化趋势。两种细胞受TSA和NAM刺激的影响,培养上清中的HBs Ag水平降低,而HBV DNA水平升高,且呈时间和浓度依赖关系,而两种细胞培养上清中的HBe Ag和细胞内核心颗粒DNA的表达水平变化趋势不明显。结论宿主蛋白质的乙酰化可能参与和影响了细胞内HBV的复制过程,进一步深入分析和鉴定影响HBV胞内复制的宿主乙酰化蛋白质将有助于加深对HBV复制调控的认识,为开发特异性抗病毒策略提供新思路。     

柯萨奇B组病毒3型VP1基因疫苗免疫效果的研究

目的 为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。 方法 以带有ＣＶＢ３Ｐ１、Ｐ２区核酸序列的ｐＧＥＭ质粒为模板，用ＰＣＲ方法克隆ＣＶＢ３ＶＰ１基因ｃＤＮＡ，插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中的ＨｉｎｄⅢ和ＸｂａＩ位点之间，构建成重组质粒。经大量扩增纯化后，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３次，用ＣＶＢ３毒株攻击小鼠，取血及脾细胞检测其免疫效果。 结果 小鼠经３次免疫后，虽未测出明显免疫应答指标，但诱导了Ｔ     

肠道病毒71型快速培养鉴定方法的建立和应用

目的:建立肠道病毒71型(EV71)快速培养鉴定方法,并应用于EV71感染的早期诊断。方法:1.以不同滴度的EV71临床分离株,低速离心接种于人横纹肌肉瘤细胞(RD)96孔板内,设定时间梯度培养后用间接免疫荧光技术检测EV71早期抗原,以优化快速培养鉴定方法的条件。2.采集上海地区2010年手足口病例患者的咽拭子、大便标本50份,以EV71快速培养鉴定方法检测,并与病毒分离培养比较。结果:病毒滴度为106TCID50/0.1 ml的EV71临床分离株系列稀释后培养3 d,至最高稀释度10-10能100%检测到病毒抗原。检测咽拭子标本5份、大便标本45份,病毒分离检测阳性26份,出现CPE平均时间为9.8d±2.098,阳性率为52.0%;快速培养鉴定方法3 d检出阳性30份,阳性率为60.0%。结论:在96孔板上开展离心培养结合免疫荧光技术应用于EV71感染的早期诊断,缩短了病原体检出时间、敏感性高、特异性强,操作更为简便,是快速诊断EV71感染的可靠方法。     

逆转录聚合酶链反应、间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验检测严重急性呼吸综合征相关冠状病毒感染的探讨

严重急性呼吸综合征(SARS)是2002年底首先在我国南部地区爆发流行的一种新型传染病，2003年4月经世界卫生组织(WHO)组织的国际多中心合作网络研究确定，该病由新发现的SARS相关冠状病毒(SARSCOV)所致。目前虽已初步建立了包括逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫荧光试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)的特异性检测方法，对SARS的诊断起到重要作用，     

质谱在免疫学中的应用及研究进展

质谱 (massspectrometer,MS)分析是分析化学中进行物质成分和结构分析的主要技术之一 ,其基本原理是将分析样品在特定的条件下转变为高速运动的离子 ,这些离子根据质量、电荷比的不同在静电场和磁场的作用下得到分离 ,然后用特定的检测器记录各种离子的相对强度并形成质谱图。质谱仪的核心是离子源和分析器。目前分析器的类型主要有四极杆 (quadrupole)、离子阱 (iontrap)、飞行时间 (timeofflight,TOF)、离子回旋共振 (ionconvolutionresonance ,ICR)等。离子源也多种多样 ,有工作在真空状态下的如电子轰击源 (electronbombardment,EB)…     

乙型肝炎病毒细胞培养模型中人白蛋白的研究

本文建立了用ＥＬＩＳＡ法测定ＨｅｐＧ２ ２２１５细胞培养液中人白蛋白的方法，其线性测定为０．１６～４０ｎｇ／ｍｌ，各种阴性对照Ｐ／Ｎ值均小于２．１。批内变异系数为３．４％，批间变系数为８．５％。本实验结果说明，在利用Ｈｅｐｇ２ ２２１５细胞系研究抗乙肝病毒药物和免疫因子的作用时，应注意这些药物或因对细胞代谢有无毒性作用，细胞培养液中人白蛋白的测定可作为检测细胞毒性的一项指标。     

CpG DNA预防小鼠哮喘模型的形成

目的　研究含胞嘧啶鸟嘌呤核苷酸的免疫刺激元件 (CpGDNA)能否预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成。方法　将 18只BALB/c小鼠均分为 3组 ,其中卵蛋白致敏哮喘组 (OVA组 )和CpG预防组 (CpG组 )皮下注射卵蛋白致敏制作哮喘模型 ,然后用卵蛋白激发 2次 ;阴性对照组 (NS组 )皮下注射生理盐水 ,然后生理盐水激发 2次。CpG组在致敏前腹腔注射CpGDNA 10 0 μg/ 10 0 μL ,其他两组不作干预。 3组分别在第 2次激发后 2 4h测外周血OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a,并处死小鼠测肺泡灌洗液 (BALF)中的细胞总数及嗜酸性粒细胞 (EOS)计数 ,肺组织病理切片观察形态学改变 ,并测定脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ。结果　CpG组BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞明显低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组肺组织炎症反应较OVA组明显减轻 ;CpG组脾细胞培养上清液中OVA特异性IFN γ的浓度明显高于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组外周血OVA特异性IgE和IgG1均低于OVA组 ,P <0 .0 5 ;CpG组IgG2a较OVA组为高 ,P <0 .0 5。结论　CpGDNA能预防卵蛋白致敏小鼠哮喘模型的形成     

CpG寡脱氧核苷酸对慢性哮喘小鼠模型气道炎症的预防作用

目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）寡脱氧核苷酸（CpG-oligodeoxynueleotides,CpG- ODN）能否预防或减轻慢性哮喘小鼠气道炎症的发生。方法40只雌性C57BL／6小鼠随机均分为4组,A组（慢性哮喘组）、B组（CpG-ODN干预组）和C组（GpC-ODN对照组）分别腹腔注射卵蛋白致敏,然后用卵蛋白雾化吸入激发以制作慢性哮喘模型,D组（生理盐水对照组）用生理盐水进行致敏和激发。B组在致敏同时（d1, d14）和激发阶段（每2周1次）分别给予60μg／mLCpG-ODN腹腔注射,共6次。C组将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶（GpC）作为对照。在末次激发24 h后,取血测嗜酸粒细胞（eosinophil,EOS）数,血清IgE、IgG1和IgG2α;收集支气管肺泡灌洗液（bronehoalveolar lavage fluid,BALF）作细胞分类计数;测定肺组织中白介素-4 （interleukin-4,IL-4）、白介素-13（interleukin-13,IL-13）和γ-干扰素的mRNA（interferon-γ,IFN-γ）表达量;以及肺组织病理学检查。结果A组外周血EOS数[（89±10）×10^4／mL]、血清IgE值[（279±53）ng／mL）、IgG1（A值2．151±0．628）、IgG2α（A值0．772±0．245）、BALF中EPS（6．3±1．3）]×10^5／mL）及百分比[（18．1±3．0）％]较D组明显增高（P〈0．01）;且肺组织中IL-4、IL-13和IFN-γ等细胞因子mRNA表达量[（分别为（5．72±3．89）×10^-2、（9．45±5．91）×10^-2和（3．23±1．69）×10^-2）]也明显高于D组（P〈0．05）。用CpG-ODN干预后（B组）,除IgG2α（A值1．186±0．414）和IFNγmRNA表达量[（18．91±9．85）×10^-2]增高外（P〈0．05）,其余指标均低于A组（P〈0．05）。C组的上述各指标与A组相比差异均无显著性（P〉0．05）。结论CpG- ODN对小剂量OVA反复激发所致的慢性气道炎症有一定的预防作用。     

免疫途径及载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究(摘要)

目的　探讨ＤＮＡ载体结构及接种途径对ＤＮＡ疫苗免疫效果的影响。方法　分别构建插入ＨＢＶ表面抗原编码基因的表达载体ｐｃＤＮＡ１．１／ＳＡ（无抗性基因）和ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ／ＳＡ（含氨苄青霉素抗性基因）,肌注小鼠后比较其诱生特异性免疫应答的能力;同时比...