2009-2010年湖南省哨点医院婴幼儿病毒性腹泻病原学研究

目的了解湖南省哨点医院2009-2010年常见腹泻病毒的病原学特征,为病毒性腹泻的综合防治提供科学依据。方法收集湖南省哨点医院2009-2010年5岁以下住院腹泻患儿的粪便标本,采用Dako公司酶免疫试剂盒检测轮状病毒,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)进行分型鉴定;采用聚合酶链反应(PCR)检测腺病毒;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测星状病毒和杯状病毒,对部分PCR阳性标本进行测序加以验证。结果检测2009-2010年湖南省哨点医院婴幼儿腹泻标本759份,其中轮状病毒占22.79%(173/759)、杯状病毒占9.22%(70/759)、腺病毒占4.61%(35/759)、星状病毒占0.79%(6/759)、混合感染占2.50%(19/759)。173份轮状病毒G血清型与P基因型以G1、G3、P[4]型为优势株。四种病毒主要是感染2岁以下婴幼儿,且有明显的季节特征。测序结果证实12份阳性标本的PCR产物均为其所对应的病毒。结论轮状病毒是2009-2010年湖南省婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原,杯状病毒、腺病毒和星状病毒也是本省婴幼儿病毒性腹泻的重要病原。     

湖南省手足口病重症病例流行病学分析

目的分析湖南省手足口病重症病例的流行特征,为有效降低手足口重症病例的发生提供科学依据。方法现场调查2009年1月-2010年10月湖南省手足口病重症、死亡病例,进行描述性流行病学研究分析。结果湖南省2010年手足口病重症病例数明显多于2009年,占两年重症总数的59.32%,并于4月进入高发期;病例集中在湘北、湘西南,占67.83%;多为农村散居儿童,92.74%为3岁及以下幼儿;患者发病到初诊平均间隔为0d,46.38%的初诊机构为县级以下医疗机构,初诊正确诊断率占50.42%;转诊平均间隔为2d;临床表现多样,其中手、足、口三部位均出现皮疹者占57.71%;80.45%的重症病例为EV71感染。结论除了早期科学识别外,采取加强农村地区、3岁以内幼儿为主为重点的监测控制,提升基层医务人员防控能力,加强病原学监测并就此及时预测预警等综合防控措施,将有助于减少和控制今后该地区手足口病重症病例的发生、发展。     

2009-2018年湖南省手足口病病原学特征分析

目的 分析2009-2018年湖南省手足口病（HFMD）病原学变化趋势，为制定HFMD防控策略提供依据。方法 收集湖南省各级CDC病原学监测结果，使用实时荧光定量PCR方法对手足口监测病例标本进行肠道病毒核酸检测，采用描述性流行病学方法进行分析。结果 2009-2018年共采集HFMD标本78856份，总体阳性率为70.0%。EV-A71、CV-A16和其他肠道病毒所占比例分别是29.3%、21.3%和49.4%。湖南省病原谱的构成:2009年优势病原为其他肠道病毒，2010和2012年优势病原为EV-A71（54.1%和56.8%），2011年EV-A71、CV-A16和其他肠道病毒比例相当（分别占34.4%、34.3%、31.3%），2013-2018年均以其他肠道病毒为主（分别为67.3%、41.4%、70.7%、42.5%、71.2%和65.2%）。轻症病例中，2009-2012年优势病原依次为其他肠道病毒、EV-A71、CV-A16、EV-A71，2013-2018年均以其他肠道病毒为主。重症病例中，除了2013、2015、2017和2018年优势病原为其他肠道病毒外，其他年份均以EV-A71为主。EV-A71是死亡病例的优势病原。各年龄组（x2=1190.6，P＜0.001）、不同性别（x2=7.6，P＜0.023）病原谱差异有统计学意义。粪便阳性率最高（77.3%），其次为多部位采样（75.8%）、疱疹液（71.2%）、肛拭子（64.8%）、（鼻）咽拭子（55.8%）、其他标本（31.1%）。结论 手足口病由肠道病毒多种血清型共同循环引起，2009-2018年湖南省手足口病的优势病原不断变化，2013年以后其他肠道病毒成为优势病原体，EV-A71仍是重症和死亡病例的主要优势病原。建议优先采集粪便标本。     

pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB双价疫苗的构建及其免疫效果观察

目的构建日本血吸虫天然分子疫苗相关靶基因的双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB,并观察其免疫保护效果。方法分别以pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB为模板,设计引物扩增SjRPS4、SjCB,重叠PCR法将SjRPS4、SjCB拼接,扩增,经双酶切后与真核质粒载体pVAX1、pcDNA3.0连接,转化DH5α细胞,筛选阳性克隆;提取双价重组质粒、空质粒及pVAX1/SjRPS4,经左腿股四头肌注射昆明小鼠,14d后取肌肉组织切片进行间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色,证实双价重组质粒的表达;提取pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB及相应空载体,100μg/只或等量PBS经左腿股四头肌注射昆明小鼠,4周后以（20±1）条尾蚴贴腹感染,6周后检测减虫率、减卵率。结果PCR、EcoRI/XhoI双酶切及测序证实双价疫苗pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB构建成功;肌肉组织间接免疫荧光及酶免疫组织化学染色证实重组质粒能够在小鼠肌肉细胞内成功表达;与PBS组相比,pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4、pcDNA3.0/SjCB免疫小鼠各组间差异均有统计学意义（P〈0.05）,各组与相应的空质粒组相比各指标差异亦具有统计学意义（P〈0.05）;两种不同载体构建的双价疫苗之间比较差异则无统计学意义（P〉0.05）。结论成功构建真核双价重组质粒pVAX1/SjRPS4·CB、pcDNA3.0/SjRPS4·CB,二者免疫昆明小鼠均可以产生比单价疫苗更好的免疫保护效果。     

湖南省2008～2010年手足口病的流行病学分析

目的 探讨湖南省手足口病(HFMD)的流行病学特征,为科学防治HFMD提供依据.方法 对2008～2010年湖南省HFMD疫情资料进行分析.结果 湖南省2008～2010年共报告HFMD病例174 027例,重症1 999例,死亡154例,发病水平及疫情严峻性逐年升高；各市州均有病例报告,以长沙、娄底、岳阳、益阳、常德较为高发；发病以散居儿童为主,占77.12％,病例集中在0～4岁组,占90.90％;流行时间曲线成双峰变化:4～7月为主峰,9～11月为次峰；聚集性疫情集中在托幼机构；检测9226例,阳性病例占65.49％,病原体以EV71、CoxA16为主.结论 湖南省为手足口病疫情高发省份,病原体以EV71为主,需要在4～7月对重点地区、重点人群采取综合防控措施,以遏制手足口病的暴发和流行.     

2010-2013年湖南省手足口病病原学监测结果分析

摘要:目的　分析2010-2013年湖南省手足口病（HFMD）病原学监测结果,为HFMD防控提供科学依据。方法　在湖南省所有县（市、区）连续收集手足口病病例的咽拭子、粪便等标本,应用RT-PCR技术检测肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）、非EV71和CoxA16的其他肠道病毒（EV）。结果　2010-2013年共收集HFMD标本31 341份,检出阳性19 423份,阳性率为62.0%,EV71、CoxA16、其他EV和混合感染所占比例依次为40.7%、18.8%、39.4%和1.1%。湖南省HFMD病原谱的构成2010年和2012年以EV71为主（52.4%和55.9%）,2011年EV71、CoxA16和其他EV所占比例相当,分别占34.3%、34.2%和31.4%,2013年以其他EV为主（67.3%）。多部位采样的阳性率最高（83.8%）,单一部位采样的阳性率从大到小依次为粪便（78.3%）、疱疹液（70.8%）、肛拭子（67.6%）和（鼻）咽拭子（55.0%）。轻症、重症和死亡病例的标本阳性率依次为59.8%、73.4%和91.2%,其中EV71的构成比依次为34.8%、66.2%和89.1%。不同性别病例的病原谱构成差异无统计学意义。结论　湖南省手足口病的主要病原体在2010-2013年间发生了改变,EV71是引起手足口病重症和死亡病例的主要毒株类型。为提高手足口病实验室诊断率,提倡对病例多部位联合采样。     

2019-2020年湖南省手足口病流行特征和病原学特征研究

目的 分析2019-2020年湖南省手足口病的监测数据,掌握手足口病流行特征及病原变化情况,为手足口病防控策略的制定提供依据.方法 对中国疾病预防控制信息系统中2019-2020年湖南省手足口病监测资料进行描述性流行病学分析,应用实时荧光聚合酶链式反应检测手足口病临床诊断病例标本中的肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病...     

2009年湖南省哨点医院手足口病病原学检测与分析

目的 针对2009年湖南省哨点医院手足口病(HFMD)实验室检查结果进行分析,为湖南省HFMD的综合防治提供参考资料. 方法 收集湖南省2009年4～12月份监测哨点医院HFMD病例送检的咽拭子、粪便、疱疹液等标本,用RD、Hep-2细胞进行病毒分离,应用RT-PCR技术检测肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)、非EV71和CVA16的其它肠道病毒(EV). 结果 374例HFMD患者的551份各类样本中EV71病毒、CVA16病毒、EV71和CVA16病毒以及EV的检出率分别为:35.02%、12.30%、0.27%、25.40%.三种不同型别肠道病毒的在全年中交替变更;病例人群男性高于女性(1.99∶1),其中1～2岁儿童是病例数和重症病例数最多年龄段;52例HFMD重症病例中,EV71的检出率高于CVA16(P<0.01);对不同类型的阳性标本进行病毒分离,共获67份阳性毒株,包括EV71型43株,CVA16型5株,EV型16株,混合毒株3株(EV71+CVA16型1株,EV71+EV型1株,CVA16+EV型1株).不同类型标本的肠道病毒阳性检出率和阳性检出构成差异均有显著性(P<0.05),粪便标本的检测阳性率和分离率最高. 结论 EV71型是2009年湖南省HFMD流行的主要致病病毒,同时也是引起手足口重症病例和死亡病例的主要毒株类型.     

日本血吸虫生殖相关抗原31～32kDa分子的质谱分析与鉴定

目的利用蛋白质组学技术分离、鉴定日本血吸虫天然分子31～32kDa抗原组分。方法收集感染后32d的日本血吸虫成虫，制备成虫蛋白，经一维电泳、固相pH梯度双向凝胶电泳分离，选取31-32kDa附近的蛋白点进行质谱分析鉴定，通过凝胶图像分析软件进行结果比较。结果二维电泳结果显示31～32kDa附近有13个蛋白点，经MALDI-TOF-MS鉴定及分析，发现3个蛋白分子分别与曼氏血吸虫Actine-2、日本血吸虫3-磷酸甘油脱氢酶、曼氏血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶有高度的同源性。结论31-32kDa组分中含有这3个蛋白点，它们与日本血吸虫31～32kDa天然分子中起保护性的有效分子密切相关。同时，它们的发现也为天然分子疫苗向基因工程疫苗的推进奠定了基础。