SNP-9对Aβ25-35导致bEnd.3细胞损伤的作用及其机制

为了研究来源于丝素蛋白水解物的神经保护活性多肽SNP-9对于阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)中血脑屏障损伤的作用，使用Aβ_25-35损伤脑微血管内皮细胞bEnd. 3建立AD损伤模型，并给药干预。通过MTT实验检测SNP-9和Aβ_25-35对细胞活力的影响；RT-qPCR法检测SNP-9和Aβ_25-35对细胞紧密连接(tight junctions,TJs)相关的ZO-1、occludin和claudin-5mRNA水平的影响；Western blot检测SNP-9和Aβ_25-35对细胞TNF-α、磷酸化NF-κB、NF-κB、IκBα和RAGE蛋白水平的影响。实验结果显示，SNP-9给药减少了Aβ_25-35诱导的bEnd. 3细胞损伤，改善了模型细胞中ZO-1、occludin和claudin-5 mRNA水平的异常情况，缓解了Aβ_25-35导致的TNF-α、磷酸化NF-κB、IκBα和RAGE蛋白水平异常。研究结果表明，SN...     

含对硝基苯丙氨酸HER2疫苗的免疫原性研究

为了打破HER2自身蛋白的免疫耐受,产生高效的免疫应答,利用遗传密码扩充技术,将免疫原性氨基酸对硝基苯丙氨酸定点引入到HER2片段的第5、26、79位,获得了含有对硝基苯丙氨酸的HER2突变体。通过镍亲和色谱柱,获得纯度达95%以上的原型和突变体HER2分子。对HER2疫苗的免疫原性进行分析,结果显示,pNO₂Phe⁷⁹HER2能够在C57BL/6小鼠体内产生高滴度的交叉性抗体。免疫小鼠的抗血清能够识别具有完整HER2受体胞外区的SKBR-3细胞,并通过ADCC效应裂解HER2高表达的HER2+B16F10细胞。这些研究结果提示,定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO₂Phe⁷⁹HER2可以作为靶向HER2的肿瘤疫苗候选分子。     

TAT-FGF21融合蛋白的构建表达纯化及神经保护活性

为了提高成纤维细胞生长因子21(FGF21)的脑内分布而设计TAT-FGF21融合蛋白并探讨其神经保护活性。通过构建pET28a-TAT-FGF21重组质粒,并转化至E.coli BL-21(DE3)感受态细菌,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后通过镍离子金属鳌合亲和层析介质(Ni-NTA)亲和色谱柱分离纯化获得TAT-FGF21融合蛋白。随后利用Aβ_25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,并以TAT-FGF21融合蛋白进行干预。MTT法检测TAT-FGF21对Aβ_25-35致SH-SY5Y细胞活性下降的干预作用;DCFH-DA荧光探针法检测TAT-FGF21对Aβ_25-35致SH-SY5Y细胞内活性氧生成增加的干预作用;JC-1荧光探针法检测TAT-FGF21对Aβ_25-35致SH-SY5Y细胞线粒体膜电位异常下降的干预作用。结果显示,TAT-FGF21能够提高SH-SY5Y细胞活性、降低SH-SY5Y细胞内ROS生成水平、提高SH-SY5Y细胞线粒体膜电位,提示TAT-FGF21可以通过缓解氧化损伤发挥神经保护作用。     

VHL抑制剂对鱼藤酮所致帕金森病秀丽隐杆线虫模型的影响

为了研究VHL（von Hippel-Lindau）抑制剂对帕金森病（Parkinson′s disease,PD）秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans,C. elegans,简称线虫）模型的影响,采用鱼藤酮诱导PD线虫模型,并使用VHL抑制剂VH298进行干预。以不同浓度的鱼藤酮对转基因线虫zcIs9; otIs181进行诱导损伤,考察线虫死亡、多巴胺能神经元退化和线粒体未折叠蛋白反应（mitochondrial unfolded protein response,mito-UPR）情况;采用不同浓度的VH298干预PD线虫模型,考察线虫死亡和多巴胺能神经元退化情况,同时对线虫运动行为如头部摆动频率、身体弯曲频率以及觅食行为进行分析。结果显示：不同浓度的鱼藤酮对转基因线虫zcIs9; otIs181具有不同程度的致死毒性和神经毒性,并且引起线虫mito-UPR异常;VH298能够减少鱼藤酮所致PD线虫模型的异常死亡和多巴胺能神经元退化情况,同时能够缓解线虫模型头部摆动频率、身体弯曲频率和觅食行为异常情况。实验结果提示,鱼藤酮可通过诱导转基因线虫zcIs9; otIs181线粒体损伤,破坏线粒体稳态,进而导致多巴胺能神经元退化及线虫死亡;VHL抑制剂VH298能改善鱼藤酮所致PD线虫模型死亡现象,并且VHL抑制剂VH298通过减少多巴胺能神经元退化,进而缓解PD线虫模型运动行为异常情况。     

FGF21对Aβ25-35导致星形胶质细胞损伤的保护作用及机制研究

以Aβ_25-35诱导星形胶质细胞建立损伤模型,探讨阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)样病变中成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)对星形胶质细胞的作用及机制。采用Aβ_25-35诱导C6星形胶质细胞株及原代星形胶质细胞损伤建立细胞模型;以不同浓度的FGF21对Aβ_25-35诱导细胞损伤模型干预,MTT法检测细胞活性;采用DCFH-DA探针结合流式细胞仪检测FGF21及Aβ_25-35对C6细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的作用;Western blot检测FGF21及Aβ_25-35对C6细胞中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)活性的影响。结果显示:FGF21能够减少Aβ_25-35导致C6细胞及原代星形胶质细胞的损伤,下调C6细胞内异常ROS水平,同时缓解Aβ_25-35引起的C6细胞MEK1/2、ERK1/2、p38磷酸化水平的异常,提示FGF21可能通过调控ROS途径及MAPKs信号通路进而缓解Aβ_25-35导致的星形胶质细胞损伤。     

硝基化通用T细胞表位疫苗CD47-NitraTh的设计与抑瘤活性

利用遗传密码扩充技术,将免疫原性氨基酸对硝基苯丙氨酸定点引入到通用T细胞表位,并将其与免疫检查点分子CD47分子胞外区19-140片段融合表达,构建了靶向免疫检查点CD47的疫苗CD47-NitraTh。CD47-NitraTh能够在BALB/c小鼠体内诱导产生高滴度抗体,并可显著抑制CT26结肠癌肿瘤生长,提高脾脏CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的比例,同时可促进naïve T细胞向Th1细胞极化。值得关注的是,CD47-NitraTh不仅提高了肿瘤浸润淋巴细胞的比例,同时还降低了肿瘤组织中Treg细胞比例,意味着CD47-NitraTh疫苗能够重塑肿瘤免疫抑制性微环境。本研究结果提示,CD47-NitraTh 可以作为有效的肿瘤疫苗候选分子。     

突变型NDUFS7质粒的构建及其对神经细胞的影响

为了研究NDUFS7基因突变对神经元的影响,通过构建pcDNA3.1（+）-NDUFS7 Q208STOP突变质粒,并将其转入分化后SH-SY5Y细胞。采用MTT法检测转染突变质粒对多巴胺能神经细胞活力的影响;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测转染突变质粒对细胞凋亡情况的影响;Western blot法检测转染突变质粒后细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平的变化;采用JC-1探针检测转染突变质粒对分化后SH-SY5Y细胞内线粒体膜电位的影响及抗氧化剂Trolox的干预作用;最后PI/Hoechst双染检测Trolox对转染突变质粒的分化后SH-SY5Y细胞凋亡情况的干预作用。结果显示,多巴胺能神经细胞内线粒体复合体Ⅰ亚基突变能够导致神经细胞活力下降,凋亡增多,而抗氧化剂能够缓解转染突变质粒导致的线粒体膜电位异常和细胞凋亡,提示转染NDUFS7基因突变质粒能通过引起多巴胺能神经细胞内线粒体功能异常从而导致细胞凋亡。     

FGF21对鱼藤酮导致神经细胞损伤的作用及其机制

采用鱼藤酮诱导SH-SY5Y细胞损伤建立帕金森病样病变细胞模型，探讨成纤维细胞生长因子21（fibroblast growth factor 21，FGF21）对其作用及机制。以不同浓度的FGF21对鱼藤酮诱导的神经细胞损伤模型进行干预，MTT法检测神经细胞活性；采用Annexin V-FITC/PI双染法分析神经细胞凋亡情况；Western blot检测FGF21及鱼藤酮对神经细胞酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）和α-突触核蛋白（α-synuclein，α-syn）表达的影响；采用DCFH-DA荧光探针检测FGF21及鱼藤酮对神经细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平的作用。结果显示：FGF21能够减少鱼藤酮致神经细胞的损伤，抑制神经细胞凋亡，缓解鱼藤酮引起的神经细胞TH和α-syn水平的异常，同时降低神经细胞内异常ROS水平，提示FGF21可能通过调控氧化应激进而缓解鱼藤酮导致的神经细胞损伤。     

生物大分子药物代谢消除途径及体外代谢研究方法进展

由于理化及生物学性质的差异,生物大分子药物与传统小分子药物相比,药代动力学机制更加复杂,在体内表现出不同的吸收、分布、代谢、排泄过程。大分子药物一般不经CYP 450酶代谢,其体内消除途径主要有肾小球滤过、酶水解、受体介导的胞吞消除和抗药物抗体介导的消除。近年来,除了常用的免疫分析法、放射性同位素示踪法、LC-MS/MS等分析方法外,还有计算机模型被开发用于模拟预测大分子药物药代动力学性质的研究并发挥越加重要的作用。本文主要综述了大分子药物主要代谢消除途径及体外研究模型TMDD、PBPK的应用和发展。     

丝素肽对Aβ25-35致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制研究

探讨丝素肽对Aβ_25-35所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其相关机制。建立Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞模型,并以丝素肽干预。MTT法检测丝素肽对Aβ_25-35致SH-SY5Y细胞损伤的干预作用;Western blot检测丝素肽对Aβ_25-35致神经元Tau蛋白多位点过度磷酸化的影响及其作用机制;DCFH-DA探针法检测丝素肽对Aβ_25-35致SH-SY5Y细胞胞内活性氧(ROS)异常升高的影响。结果表明,丝素肽可改善Aβ_25-35致SH-SY5Y细胞损伤。丝素肽可通过抑制GSK-3β活性、增强PP2A活性,改善Aβ_25-35引起的神经元Tau蛋白异常磷酸化水平,提示丝素肽可通过调节Tau蛋白的磷酸化发挥神经保护作用。同时,丝素肽可降低Aβ_25-35引起的SH-SY5Y细胞胞内升高的ROS水平,提示丝素肽还可通过调节氧化应激反应途径保护神经元。