银杏二萜内酯葡胺注射液及其银杏二萜内酯成分抗人脐静脉内皮细胞氧糖剥夺损伤的转录组学研究

目的 研究银杏二萜内酯葡胺注射液（Diterpene Ginkgolides Meglumine Injection,DGMI）及其银杏二萜内酯成分抗人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells-T1,HUVEC-T1）氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）损伤的潜在作用通路。方法 采用CCK-8法分别测定不同浓度银杏内酯A（ginkgolide A,GA）、银杏内酯B（ginkgolide B,GB）、银杏内酯K（ginkgolide K,GK）和DGMI对HUVEC-T1细胞的毒性,明确药物处理细胞浓度;采用转录组测序技术对溶剂对照组（二甲基亚砜）、模型组（OGD/R 4 h/24 h）及给药组（造模＋不同剂量DGMI、GA、GB、GK处理）的细胞样本分别进行转录组测序;通过生物信息学分析方法,以GEO数据库中缺血性脑卒中患者转录组数据为参考,采用基因集富集分析（gene set enrichment analysis,GSEA）、差异基因富集等分析方法完成对HUVEC-T1 OGD模型及不同浓度药物抗OGD损伤能力的评价,阐明DGMI及其功效成分的潜在作用机制。结果 GSEA分析显示,临床缺血性脑卒中患者血液转录组数据分析获得的疾病富集通路与本实验细胞模型测序结果获得的富集通路相似度为55.6%;DGMI、GA、GB、GK处理组与模型组相比,显著富集的主要信号通路包括FcεRI、NOD样受体、有丝分裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）等。差异基因分析显示,与对照组相比,模型组共筛选出439个差异基因,差异基因的基因本体（gene ontology,GO）分析主要富集在应激反应过程,京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）分析主要富集在磷脂酶D、FcεRI、NOD样受体和血小板活化等信号通路;与模型组相比,给药组差异基因的GO分析主要富集在造血和代谢过程,KEGG分析主要富集在血小板活化、磷脂酶D等信号通路。结论 HUVEC-T1 OGD模型模拟了部分缺血性脑卒中的病理特征;DGMI、GA、GB、GK均具有抗OGD损伤作用,发挥抗OGD损伤作用的关键基因及信号通路主要集中在抗炎、抗凋亡、调控血小板活化等生物学过程,可能通过下调FcεRI、NOD样受体、MAPK和VEGF信号通路,干预血小板活化、磷脂酶D等信号通路发挥作用。     

银杏内酯软胶囊毒理学研究

目的：观察动物ig银杏内酯软胶囊的急性毒性和长期毒性，确定无毒反应的剂量，以评估银杏内酯软胶囊长期用药的安全性。方法：以最大浓度，最大体积的银杏内酯软胶囊ig昆明种小鼠一次，测定最大耐受量。以高、中、低3个剂量对大鼠进行连续灌胃给药26周，于用药13、26周分别各处死1／3动物观察大鼠的生长发育，摄食量，血液细胞学及生化学指征，脏器系数及组织病理学检查，停药观察4周后再处死剩余1／3动物作相应检查。结果表明：小鼠1d内1次ig银杏内酯软胶囊最大耐受量≥2997mg/kg，各给药组与对照组检查指标结果统计分析均无明显差异（P≥0．05），结论：ig银杏内酯软胶囊对小鼠、大鼠均无明显的毒性反应。     

银杏内酯对培养皮层神经细胞的抗缺氧效应及其机制

目的　探讨银杏内酯 (Gin)对培养的皮层神经细胞的抗缺氧效应及其机制。方法　对原代培养的小鼠皮层神经细胞 ,进行随机分组 ,每个实验均分为正常对照组、缺氧组和 Gin组 ,每组做 8份重复测试。通过电镜观察神经细胞形态结构变化、利用甲基四唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性、速率法测定乳酸脱氢酶 (L DH)释放量、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶 (SOD)活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛 (MDA )含量、硝酸还原酶比色法测定一氧化氮 (NO)含量 ,观察 Gin对缺氧神经细胞的影响。结果　 (1)电镜观察显示 ,缺氧组神经细胞呈变性至坏死等不同程度的损伤 ;Gin组神经细胞细胞膜完整 ,微绒毛清晰可见 ,线粒体结构保存较好 ,与未缺氧的对照组相似。 (2 )缺氧后神经细胞活性 (0 .6 0 6±0 .0 35 )较正常对照组 (0 .6 77± 0 .0 2 8)降低 ,L DH释放量 (5 9.333± 9.5 2 1) U· ml- 1 · min- 1 较正常对照组 (38.5 0 0± 11.82 8) U· ml- 1 · min- 1 升高 ,其差异均有显著性意义 ;而预先给予 Gin的神经细胞活性(0 .6 4 5± 0 .0 2 7)明显高于缺氧组 ,L DH释放量 (40 .0 0 0± 6 .812 ) U· m l- 1 · m in- 1 显著低于缺氧组。 (3)缺氧后神经细胞 SOD活性 (46 .4 73± 7.4 72 ) NU / mg蛋白明显低于正常对照组 (5 5     

银杏内酯对实验性小动物脑缺血的保护作用

目的 :研究银杏内酯对实验性小动物脑缺血的保护作用。方法 :采用小鼠断头模型和大鼠急性不完全性脑缺血模型 ,测定小鼠断头后喘息时间和大鼠脑指数及脑含水量、脑毛细血管通透性以及血液流变学指标 ,观察银杏内酯对实验性脑缺血的保护作用。结果 :银杏内酯可延长小鼠断头后喘息时间 ;降低大鼠脑指数及脑含水量 ,抑制其脑毛细血管通透性升高 ,明显改善血液流变学指标 ,降低血液粘度。结论 :银杏内酯可预防实验性脑缺血损伤。     

银杏内酯对体外PC12细胞拟缺血缺氧损伤及缺血继发性凋亡的作用

目的：研究银杏内酯对缺血缺氧损伤情况下体外培养PC12细胞的保护作用及其对该细胞凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法：在离体培养的PC12细胞，用NaCN无糖培养造成拟缺血损伤模型，用H2O2模拟氧自由基损伤，分别通过形态学观察、MTT微量比色等方法研究药物对上述模型的保护作用。另将PC12细胞在无血清条件下培养96h，通过琼脂糖凝胶电泳检测其凋亡情况，并用流式细胞术检测细胞的凋亡程度及凋亡相关基因bcl-2在其中的作用。结果：银杏内酯终浓度10^-5、10^-6、10^-7mol/L能抑制NaCN无糖和H2O2培养造成的细胞损伤，明显增强细胞活力。凝胶电泳可见到明显的梯型条带，流式细胞术检测凋亡情况发现模型组凋亡率为10．40％，银杏内酯10^-5mol/L组的凋亡率为3．96％。同时发现药物组和模型组细胞中的bcl-2基因表达没有显著差异。结论：银杏内酯具有神经保护作用，且该作用与药物的抗凋亡能力有关，但这种抗凋亡作用似乎并不是通过bcl-2基因的调控实现的。     

银杏二萜内酯葡胺注射液对急性缺血性脑卒中再通成功患者预后的影响

目的 观察银杏二萜内酯葡胺注射液（DGMI）对急性缺血性脑卒中（AIS）再通成功患者预后的影响。方法 回顾性选取南京大学医学院附属鼓楼医院和南京医科大学第一附属医院2016年6月-2021年12月收治的AIS再通治疗患者为研究对象,共纳入颈内动脉或大脑中动脉闭塞者206例。根据再通治疗后3 d头颅磁共振血管造影（MRA）检查结果,将206例患者分为开通成功患者（n=157,其中61例接受DGMI治疗）和开通失败患者（n=49,其中21接例受DGMI治疗）;以患者是否接受过DGMI治疗为依据,将接受DGMI治疗≥7 d的患者设为试验组（n=82）,未接受DGMI治疗的为对照组（n=124）。收集的临床资料包括年龄、性别、发病至干预时间、干预方式、不良事件（症状性脑出血、死亡）、发病时和90 d的美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分和改良Rankin评分量表（mRS）评分。分别比较开通成功患者和开通失败患者中对照组和试验组间不良事件发生率和预后的差异,包括症状性脑出血率、死亡率,以及90 d后的NIHSS改善率和mRS评分。结果 开通成功患者中,试验组90 d NIHSS改善率和mRS评分均明显优于对照组（P＜0.05）;而在开通失败患者中两组间90 d NIHSS改善率和mRS评分比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;对照组和试验组的症状性脑出血率和死亡率在两亚组中均无明显差异（P＞0.05）。结论 对于接受再通治疗的AIS患者,DGMI有利于再通成功患者的神经功能改善,且不增加不良事件发生风险。     

银杏黄酮减轻大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿和神经元损伤

目的探讨银杏黄酮对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后脑水肿、海马神经元超微结构及凋亡基因Fas配体（FasL）表达的影响。方法 成年雄性Wistar大鼠80只随机分为5组：正常对照组、SAH组、SAH＋生理盐水组、SAH＋50mg/kg银杏黄酮组（Gf50组）、SAH＋200mg/kg银杏黄酮组（Gf200组）。采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立大鼠SAH模型。于SAH模型建立后,24h和72h测定脑组织含水率;72h后用透射电镜观察神经元超微结构;免疫荧光法检测FasL蛋白的表达。结果 SAH组脑组织含水率较正常对照组增加。与SAH组比较,脑组织含水率在银杏内酯不同剂量组均明显降低,其中200mg/kg银杏黄酮组脑组织含水率降低最为显著（P〈0.01）。与正常对照组比较,其余4组大鼠神经元超微结构均有不同程度的损伤,其中SAH组损伤最为严重。SAH组FasL蛋白的表达较正常对照组增多（P〈0.01）,两个银杏黄酮剂量组较SAH有不同程度减少（P〈0.05）。结论 银杏黄酮可降低SAH大鼠的脑组织含水率,对海马神经元具有保护作用。银杏黄酮可抑制SAH后大鼠FasL表达水平增高,高剂量组效果更明显。     

银杏内酯防治四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用观察

目的研究银杏内酯对肝硬化大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法随机将30只大鼠分为正常对照组10只、四氯化碳（CCL4）诱导的肝纤维化模型组10只和银杏内酯防治组10只。采用CCL4腹腔注射法制造大鼠肝纤维化模型,观察银杏内酯对大鼠肝组织纤维化、肝功能指标及血清和肝组织匀浆血小板活化因子、肿瘤坏死因子和内皮素-1的变化。结果银杏内酯治疗组大鼠的血清肝功能指标和肝纤维化病理分级与模型组比较都有显著的改善（P〈0.01）;治疗组大鼠肝组织细胞因子水平与模型组比较也显著降低（P〈0.01）。结论银杏内酯对肝纤维化大鼠有良好的治疗作用,可能与降低细胞因子水平有关。     

The therapeutic effects of ginkgolides in Guillain-Barré syndrome and experimental autoimmune neuritis

BackgroundGuillain-Barré syndrome (GBS) is an acquired immune-mediated inflammatory peripheral neuropathy. The immune regulation of ginkgolides have been revealed in recent years. We herein investigate the potential therapeutic effects of ginkgolides both on GBS and its animal model, experimental autoimmune neuritis (EAN).MethodsEAN in C57BL/6 mice induced by subcutaneous injection with peripheral nerve myelin P0 protein peptide 180–199 (P0 peptide) were treated with ginkgolides at three different doses. GBS patients were randomly divided into two groups, the experimental group and the control group. The experimental group were treated with ginkgolides as soon as diagnosed.ResultsOur data indicated that ginkgolides administration daily ameliorated the score of EAN and delayed the peak of disease in EAN mice. Ginkgolides also down-regulated the proportions of T helper (Th) 17 cells in EAN spleens. Furthermore, we also found that administration of ginkgolides significantly decreased the levels of interferon (IFN)-γ and interleukin-12 (IL)-12 in GBS patients.ConclusionsOur results suggested that ginkgolides ameliorated the clinical score of EAN through down-regulating the proportions of Th 17 cells. Ginkgolides also suppressed inflammation response by decreasing pro-inflammatory cytokines IFN-γ and IL-12, suggesting ginkgolides had potential therapeutic effects on GBS patients and EAN in the future.     

银杏内酯注射液联合多巴丝肼和普拉克索对帕金森病患者的临床疗效

目的 探讨银杏内酯注射液联合多巴丝肼和普拉克索对帕金森病患者的临床疗效.方法 80例患者随机分为观察组和对照组,每组40例,对照组给予多巴丝肼和普拉克索,观察组在对照组基础上加用银杏内酯注射液,疗程3个月.检测临床疗效、血清软骨糖蛋白39(YKL-40)、肝X受体β(LXRβ)、人帕金森蛋白7(PARK7)、统一帕金森氏病评分量表(UPDRS)、Hoehn-Yahr分期、不良反应发生率变化.结果 观察组总有效率高于对照组(P<0.05).治疗后,观察组YKL-40、PARK7、UPDRS评分、Hoehn-Yahr分期低于对照组(P<0.05),LXRβ水平更高(P<0.05).2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 银杏内酯注射液联合多巴丝肼和普拉克索可有效调节帕金森病患者血清YKL-40、LXRβ、PARK7水平,促进疾病恢复,值得临床应用和推广.