D-半乳糖联合染铝大鼠海马结构Aβ及相关蛋白的表达

目的:探讨D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ及其相关蛋白的表达及其分布。方法:30只雄性SD大鼠随机分为2组,即:对照组和模型组(n=15)。模型组每日腹腔注射D-半乳糖60 mg/kg和灌胃三氯化铝500 mg/kg,连用60 d;对照组给予等量生理盐水进行腹腔注射和灌胃。铃木镀银法观察神经原纤维缠结的形成,确定模型是否成功。免疫组织化学法观察海马结构三个亚区的Aβ、β分泌酶(BACE)和早老素-1(PS-1)蛋白的表达。结果:铃木镀银染色可见模型组大鼠颞叶、顶叶皮层及海马神经元内的神经原纤维缠结。模型组大鼠海马CA1、CA3区及齿状回Aβ表达较强,与对照组相比差异显著(P<0.01);模型组海马CA3区神经元的BACE和PS-1蛋白表达量较对照组明显增加(P<0.01)。结论:D-半乳糖联合染铝的阿尔茨海默病大鼠海马结构Aβ、BACE及PS-1表达均明显上调,可能是导致AD大鼠功能障碍的主要原因。     

当归多糖对衰老模型大鼠脾脏结构与功能的影响

目的 探讨当归多糖（ASP）对衰老模型大鼠脾脏结构与功能影响及其机制。 方法 SD大鼠随机分为正常对照组,ASP对照组,衰老模型组,ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组皮下注射D-半乳糖（120mg/kg）qd×42d;ASP衰老模型组注射D-半乳糖的剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射ASP (100 mg/kg) qd×28d;正常对照组皮下注射等量生理盐水qd×42d;ASP对照组注射等量生理盐水qd×14d,第15天起腹腔注射ASP（同ASP衰老模型组)。药物注射完成后第2天,取脾脏测定脾指数,石蜡切片观察脾脏显微形态学;衰老β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察脾细胞百分率,CCK8测定脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力;流式细胞术检测脾细胞周期与活性氧簇（ROS）含量; ELISA检测脾细胞分泌TNF-α、GM-CSF能力与丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western blotting 检测衰老相关蛋白P53、P21、RB蛋白表达。 结果 与正常对照组比较,D-半乳糖致衰老模型组大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例及TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显降低;脾细胞的SA-β-Gal阳性率,G₁期与G₂/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达显著增高。与衰老模型组比较,ASP使D-半乳糖致衰老模型大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例与TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显提高;脾细胞SA-β-Gal阳性率,G₁期及G₂/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达有显著抑制作用。
结论 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠脾脏结构与功能损伤明显,当归多糖对其致衰损伤有明确的保护作用。     

褪黑素对衰老小鼠肺炎时心肌的保护作用

目的了解褪黑素(MT)对衰老小鼠肺炎时心肌的保护作用.方法将雄性NIH小鼠100只随机分为两组:一组以D-半乳糖制作人工老化模型(D-gal组),另一组以生理盐水作对照(NS组).每组分别分为4个亚组(12只)进行实验:生理盐水对照组(NSN,D-galN)、肺部感染组(NSP,D-galP)、褪黑素 肺部感染组(NSM,D-galM)、溶媒 肺部感染组(NSV,D-galV).制模后72h观察心肌线粒体形态改变,检测血浆中TNF-α、心肌组织中丙二醛(MDA)、TNF-α、ATP含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和铜、锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)活性.结果肺部感染后小鼠心肌组织中MDA、TNF-a含量增加(NSN vs NSP,D-galN vs D-galP;P＜0.05)T-SOD和Cu,Zn-SOD活性、ATP含量降低(P＜0.05),心肌组织线粒体损伤较多.MT干预可部分抑制上述改变、减少线粒体变性(NSM vs NSP,D-galM vs D-galP;P＜0.05).结论MT通过改善心脏抗氧化功能、降低心肌脂质过氧化、降低血浆和心肌炎性因子含量等作用保护肺炎对人工老化小鼠心脏功能的损害.     

D-半乳糖诱导衰老动物模型的机制及其在中医药方面的应用

利用D-半乳糖特殊的代谢机制,诱导衰老动物模型是常用的揭示衰老机制的实验工具。造模方法上,D-半乳糖诱导剂量具有靶向器官的选择性,比较合适的诱导剂量是100mg·kg^-1·d^-1;其作用机制与氧化应激损伤、钙稳态失调、线粒体老化、非酶糖基化反应、端粒短缩及端粒酶的活性下降,以及免疫功能减退有关。D-半乳糖诱导衰老的动物模型体现了现代系统生物学的观点,有特定的应用价值,然而对该模型衰老机制的整体研究还不够全面。中医药具有整体治疗的优势,在抗衰老多脏器、多靶点研究方面有积极的作用,因而中药对D-半乳糖诱导衰老治疗作用影响的研究越来越多,占所有报道的2／3;但中医药作用可重复性低,未来应集中于全面合理的实验设计,并应用标准化中药干预模型,以及充分考虑诱导衰老与自然衰老的差异。     

益髓灸对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆及氧化应激水平的影响

目的:观察益髓灸对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆和血清及脑、肾组织的8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHd G)、总抗氧化能力(T-AOC)的影响,比较2组穴位(足三里配悬钟、百会配关元)延缓脑衰老疗效,探讨其作用机制。方法:75只SPF级3月龄体质量为(30±2)g雄性昆明小鼠,水迷宫检测后随机分为5组,每组15只,即生理组、造模组、艾灸1组(足三里+悬钟穴)、艾灸2组(百会+关元穴),艾灸3组(非穴位)。造模组和各艾灸观察组予D-半乳糖按1 000 mg/(kg·d)颈背部皮下注射,同时生理组以同法注射等量的生理盐水,连续56 d。3组艾灸观察组于造模第13 d起开始艾灸,每次每穴3壮,灸单侧(或2穴),共6壮。生理组和造模组不做治疗性干预,但给予与各观察组同时间、程度的捉抓刺激。造模、治疗结束后,再次进行水迷宫测试,将小鼠眼球取血,断头取脑,开腹取肾,制备脑、肾组织匀浆,用酶联免疫法(ELISA)检测血清及脑、肾组织8-OHd G、T-AOC水平。结果:1)水迷宫结果显示:造模、治疗前各组小鼠水迷宫各项指标及学习能力比较,差异无统计学意义(P0.05);造模及治疗后,5组间比较差异有统计学意义(P0.05)。其中两两比较:a.造模及治疗后,造模组与生理组、艾灸1组、艾灸2组比较,"潜伏期、平台象比、停留时间、寻求次数、原平台象限百分比、跨越次数"6项指标比较,差异均有统计学意义(P0.05);b.生理组与艾灸3组比较,差异有统计学意义(P0.05);艾灸3组与艾灸1、2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。2)血清及脑、肾组织ELISA结果示:a.造模组血清和脑、肾组织8-OHd G含量显著升高,与生理组、艾灸1组和艾灸2组3组比较,差异有统计学意义(P0.05);生理组与艾灸3组比较,差异有统计学意义(P0.05),艾灸3组与艾灸1、2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。b.造模组血清和脑、肾组织T-AOC水平显著降低,与生理组、艾灸1组和艾灸2组3组比较,差异有统计学意义(P0.05);生理组与艾灸3组比较,差异有统计学意义(P0.05);艾灸3组与艾灸1、2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:益髓灸防治脑衰老的作用机制可能是通过降低D-半乳糖诱导的8-OHd G表达,抑制细胞的DNA损伤,提高机体总抗氧化能力T-AOC,发挥抗氧化应激损伤的作用。     

脂肪源性干细胞对内源性皮肤老化的治疗作用

目的 研究脂肪源性干细胞(ADSCs)对内源性皮肤老化的抗衰老作用及机制。 方法 分离培养小鼠皮肤成纤维细胞(MSFCs)及人ADSCs。将MSFCs 分为对照组、模型组、ADSCs条件培养基组。D-半乳糖(D-gal)制备MSFCs衰老模型,ADSCs条件培养基培养。镜下及流式检测ROS、β-半乳糖苷酶活性的变化,RT-PCR 检测caspase3、p53、sirt1基因的表达情况,Western blotting检测Sirt1蛋白表达。 结果 模型组较对照组ROS水平上升(P<0.001)、β-半乳糖苷酶着色增深,而ADSCs条件培养基组较模型组ROS水平降低(P<0.001)、β-半乳糖苷酶着色变浅。RT-PCR检测结果显示模型组较对照组caspase3(P<0.001)、p53(P=0.001)表达升高,sirt1表达下降(P<0.001);而ADSCs条件培养基组较模型组caspase3(P<0.001)、p53(P=0.001)表达下降,sirt1表达升高(P<0.001)。 Western blotting结果显示模型组较对照组Sirt1表达下降(P<0.001),而ADSCs条件培养基组较模型组Sirt1表达升高(P=0.006)。 结论 ADSCs可通过Sirt1通路改善D-gal引起的内源性皮肤老化。     

金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠脑组织动态抗氧化作用研究

目的：研究金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖(D-galactose,D-gal）致衰老小鼠脑组织抗氧化酶活性的动态影响,寻找荭草苷和牡荆苷对脑组织抗氧化酶系活性作用的时效关系。方法：采用D-gal腹腔注射（intraperitoneal injection, ip）致亚急性衰老小鼠为模型,8周造模成功后,分成正常组,模型组,荭草苷和牡荆苷各三个剂量组（40,20,10 mg·kg^-1）,维生素E对照组。各治疗组从第9周开始每日上午分别口服灌胃(intragastric perfusion, ig)给药,每日一次。给药第2,4,6,8周时,分别断头处死小鼠,用预冷的生理盐水制成10％的脑组织匀浆,8000 r离心得上清液,检测超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶以及脑脂褐素含量。结果：与模型组相比,给药2、4周后,各治疗组抗氧化酶系虽有提高但无统计学意义,给药6、8周后,各治疗组在提高抗氧化酶系活性以及降低脑脂褐素含量上差异有显著性。荭草苷和牡荆苷相比,给药2、4周后,各剂量组在提高抗氧化酶活性及降低脑脂褐素含量上无统计学意义,给药6周后,荭草苷40 mg·kg^-1,20 mg·kg^-1,10 mg·kg^-1三个剂量组在提高抗氧化酶活性及降低脑脂褐素含量上优于同等剂量的牡荆苷,给药8周后,荭草苷20 mg·kg^-1和10 mg·kg^-1剂量组在提高抗氧化酶系的活性及降低脑脂褐素含量上高于同等剂量的牡荆苷,而40 mg·kg^-1剂量组差异无显著性。与维生素E相比,给药8周后,荭草苷和牡荆苷20 mg·kg^-1,10 mg·kg^-1两个剂量组在提高脑组织抗氧化酶系活性及降低脑脂褐素含量上低于维生素E,40 mg·kg^-1剂量组差异无显著性。结论：D-gal致衰老小鼠脑组织抗氧化酶活性的作用,随给药时间和给药剂量的增加,其提高抗氧酶活性的作用增强。高剂量的荭草苷和牡荆苷抗氧作用与维生素E相当。荭草苷和牡荆苷具有提高     

玉竹提取物对D-半乳糖衰老小鼠模型学习记忆的影响

目的：观察玉竹提取物对D-半乳糖（D-gal）衰老模型小鼠学习记忆能力及抗氧化能力的影响；方法：5％D-gal皮下注射建立衰老小鼠模型，同时灌胃给予玉竹提取物（extract of Polygonatum odoratum,E-PAOA），正常对照组和模型组给予等体积生理盐水。用Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力，生化法检测小鼠脑组织超氧化物歧化酶SOD活力及丙二醛MDA含量；结果：与正常对照组相比，模型组小鼠学习记忆能力降低，脑组织SOD活力下降，MDA含量增加。灌胃给予E-PAOA后，小鼠上述变化明显改善；结论：E-PAOA可改善D-gal衰老模型小鼠的学习记忆能力，具有促进智力和延缓衰老的作用，其机制可能E-PAOA与具有抗氧化能力有关。     

小鼠衰老模型研究

采用D-半乳糖0.12 mg/g给3个月龄ICR小鼠眼球后注射一个月,与同龄鼠比较,发现脑中B型单胺氧化酶活力增高42.8%,Na~ /K~ -ATP酶活力下降28.6%;在其脑、心、肝组织中脂褐质含量分别增加46%、38%和16%;在血清中脂质过氧化物增高39%,超氧化物歧化酶活力下降8.6%;此外,胸腺重量明显下降,这些变化与21月龄鼠接近,表明该方法可造成一个较好的动物衰老模型。     

番茄红素对D-半乳糖诱导衰老大鼠椎间盘的影响

目的 观察D-半乳糖诱导衰老大鼠模型椎间盘等的变化及番茄红素对其影响.方法 将30只SD大鼠随机分成对照组、模型组和干预组.模型组和干预组每天颈部皮下注射D-半乳糖,对照组用等量生理盐水替代,干预组每天用番茄红素灌胃.各组每周称体重,12周后处死并取椎间盘及血清观测.结果 与对照组相比,模型组椎间盘明显退变,干预组椎间盘轻微退变;模型组体重减轻(P<0.05)、抗氧化水平下降明显(P<0.05.P<0.01).而干预组较模型组体重及抗氧化水平有所升高(P<0.05·P<0.01).结论 D-半乳糖在诱导大鼠衰老的过程中可诱发椎间盘退变.而番茄红素可延缓椎间盘退变的进展.