土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣皮损microRNA表达的影响

目的:探讨土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣(CA)皮损标本中micro RNA分子表达谱的影响。方法:以39例CA患者为观察组,使用土龙祛疣洗剂熏洗治疗,6周后观察疗效。以同期自本院外科就诊的10例行包皮环切患者为对照组,取其正常包皮组织。采用q RT-PCR检测2组5个炎症相关micro RNA(mi R-21、mi R-203、mi R-125b、mi R-146a和mi R-155)的表达情况。结果:39例CA患者治疗6周后27例皮损消退明显,症状减轻,总有效率为69.2%;观察组mi R-203与正常对照组相比呈现低表达,土龙祛疣洗剂治疗后呈现明显上调,差异有统计学意义(P0.01);mi R-21治疗后表达量与治疗前相比则下调明显(P0.05);而mi R-155、mi R-125b、mi R-146a分子在治疗前后无明显变化。结论:土龙祛疣洗剂治疗尖锐湿疣疗效肯定,可能通过下调mi R-21和上调mi R-203分子来发挥抗病毒的治疗作用。     

p14ARF、ARF-BP1及c-myc mRNA在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨肝细胞癌组织中p14ARF、ARF-BP1 及c-myc的mRNA表达及其与临床参数关系.方法:采用半定量逆转录.聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对52例HCC组织及其中45例相应癌旁组织p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达丰度进行检测并分析他们之间的关系及其与临床参数的关系.结果:在52例HCC组织中p14ARF、ARF-BP1c-myc的mRNA各表达77.0%、77.0%和75.0%,与45例相应癌旁组织(11.1%、20.O%、53.3%)比较,呈高表达.p14ARF、ARF-BP1 mRNA的表达与肿瘤大小有关(t=2.169,2.087,均P＜0.05);而c-myc mRNA表达与肿瘤大小无关.p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达在性别、年龄、AFP、临床病理分级、浸润转移、HBV、包膜等无统计学差异.p14ARF与ARF-BP1、p14ARF与c-myc及ARF-BP1与c-myc的mRNA表达两两成正相关(r=0.565,0.436,0.584,均P＜0.01).结论:p14ARF、ARF-BP1、c-myc过度表达可能是HCC发生的早期指标;ARF-BP1过度表达可能是影响HCC发生、发展的关键,干预ARF-BP1可能是治疗HCC的新途径.     

益髓灸对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆及氧化应激水平的影响

目的:观察益髓灸对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆和血清及脑、肾组织的8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHd G)、总抗氧化能力(T-AOC)的影响,比较2组穴位(足三里配悬钟、百会配关元)延缓脑衰老疗效,探讨其作用机制。方法:75只SPF级3月龄体质量为(30±2)g雄性昆明小鼠,水迷宫检测后随机分为5组,每组15只,即生理组、造模组、艾灸1组(足三里+悬钟穴)、艾灸2组(百会+关元穴),艾灸3组(非穴位)。造模组和各艾灸观察组予D-半乳糖按1 000 mg/(kg·d)颈背部皮下注射,同时生理组以同法注射等量的生理盐水,连续56 d。3组艾灸观察组于造模第13 d起开始艾灸,每次每穴3壮,灸单侧(或2穴),共6壮。生理组和造模组不做治疗性干预,但给予与各观察组同时间、程度的捉抓刺激。造模、治疗结束后,再次进行水迷宫测试,将小鼠眼球取血,断头取脑,开腹取肾,制备脑、肾组织匀浆,用酶联免疫法(ELISA)检测血清及脑、肾组织8-OHd G、T-AOC水平。结果:1)水迷宫结果显示:造模、治疗前各组小鼠水迷宫各项指标及学习能力比较,差异无统计学意义(P0.05);造模及治疗后,5组间比较差异有统计学意义(P0.05)。其中两两比较:a.造模及治疗后,造模组与生理组、艾灸1组、艾灸2组比较,"潜伏期、平台象比、停留时间、寻求次数、原平台象限百分比、跨越次数"6项指标比较,差异均有统计学意义(P0.05);b.生理组与艾灸3组比较,差异有统计学意义(P0.05);艾灸3组与艾灸1、2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。2)血清及脑、肾组织ELISA结果示:a.造模组血清和脑、肾组织8-OHd G含量显著升高,与生理组、艾灸1组和艾灸2组3组比较,差异有统计学意义(P0.05);生理组与艾灸3组比较,差异有统计学意义(P0.05),艾灸3组与艾灸1、2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。b.造模组血清和脑、肾组织T-AOC水平显著降低,与生理组、艾灸1组和艾灸2组3组比较,差异有统计学意义(P0.05);生理组与艾灸3组比较,差异有统计学意义(P0.05);艾灸3组与艾灸1、2组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:益髓灸防治脑衰老的作用机制可能是通过降低D-半乳糖诱导的8-OHd G表达,抑制细胞的DNA损伤,提高机体总抗氧化能力T-AOC,发挥抗氧化应激损伤的作用。     

不同证型特应性皮炎患者皮损microRNAs表达谱的研究

目的?探讨特应性皮炎（AD）患者皮损中炎症相关microRNAs及趋化因子的表达水平与其中医证型的关联。方法?AD患者79例辨证分型（湿热内蕴、脾虚湿盛、血虚风燥）后,分别采用qPCR和免疫组化法检测皮损标本中的5个炎症相关microRNAs及趋化因子的表达情况,并对不同证型皮损中microRNAs差异表达的免疫调节作用进行分析。结果?湿热内蕴组中miR-21相对表达量上调而miR-125b下降明显,两者与血虚风燥组及正常对照组相比差异均有显著性意义（P<0.01）;此时TARC/CCL17表达量较高,阳性颗粒主要分布于基底层和真皮层。脾虚湿盛组中miR-155表达量较高,明显高于其他2组和正常对照组（P<0.01）,miR-203虽有所下调,但与其他几组相比差异均不具有统计学意义（P>0.05）;此时皮损中表达最高的是CTACK/CCL27分子,散在分布于表皮与真皮,RANTES/CCL5与湿热内蕴组相比亦表达上调。血虚风燥组中miR-146a的表达水平有所上调,与湿热内蕴组及正常对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）;RANTES/CCL5表达增高,明显高于湿热内蕴组（P<0.01）;TARC/CCL17分子与脾虚湿盛组相比亦有所上调。结论?microRNAs分子表达谱在AD不同证型患者皮损中存在差异表达,其介导的不同免疫炎症组织损伤可能是AD不同临床表现的物质基础。      

p14ARF、ARF-BP1、c-myc在肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)组织及其癌旁肝组织中p14ARF、ARF-BP1、c-myc的表达及意义.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、免疫组化技术对45例HCC组织及其癌旁肝组织中p14ARF、ARF-BP1、c-myc的mRNA表达和p14ARF、c-myc蛋白表达情况进行检测.结果:p14ARF、ARF-BP1、c-myc的mRNA在HCC组织中阳性表达分别为80.00%、86.67%、84.44%,在癌旁肝组织中分别为11.11%、20.00%、53.33%,三者的mRNA在癌组织中呈过表达,明显高于癌旁肝组织(P＜0.01).p14ARF、c-myc蛋白在HCC组织中表达分别为78.38%、75.68%,明显高于癌旁肝组织的13.51%(P＜0.01)和51.35%(P＜0.05).结论:p14ARF、ARF-BP1、c-myc在HCC组织中高表达,这种高表达可能与HCC的发生有相关性.     

尿激酶型纤溶酶原激活物、基质金属蛋白酶在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)、基质金属蛋白酶(MMP-9)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法用RT-PCR和免疫组织化学法检测45例肝细胞癌及其癌旁组织u-PA和MMP-9的mRNA及蛋白表达,7例肝血管瘤旁肝组织作为对照组。结果肝癌组织中u-PA和MMP-9mRNA阳性率均为100%(45/45);其对应的癌旁组和对照组的阳性率分别为84.44%(38/45)、28.57%(2/7)和86.67%(39/45)、57.14%(4/7);三组比较差异均有显著性(P<0.05)。免疫组化显示,u-PA和MMP-9在肝癌组中阳性率分别为75.56%(34/45)、66.67%(30/45),癌旁组分别为26.67%(12/45)、22.22%(10/45),对照组分别为28.57%(2/7)、14.29%(1/7),三组比较差异有显著性(P<0.05)。此外,在肝癌组织中u-PA、MMP-9的mRNA和蛋白的阳性率均与静脉癌栓形成、肝内外转移有关(P<0.01),与乙型肝炎、病理分级、血清AFP水平以及肿瘤直径无明显关系(P>0.05)。结论肝细胞癌中的u-PA和MMP-9mRNA及蛋白的高表达与肝癌的侵袭转移有关;检测u-PA和MMP-9有助于判断肝细胞癌的预后。     

红花逍遥片对血虚风燥型特应性皮炎患者免疫因子影响的研究

目的:观察红花逍遥片治疗血虚风燥型特应性皮炎(AD)的临床效果及对患者血液中免疫因子水平的影响。方法:85例血虚风燥型AD患者随机分为治疗组和对照组,两组均采用甘草润肤洗剂外用治疗,治疗组43例加用红花逍遥片治疗,对照组42例加用氯雷他定颗粒治疗。应用ELISA法检测两组血清TNF-a、IL-17A、IL-23、TGF-β1水平;应用q RT-PCR方法检测外周血浆趋化因子MDC/CCL22、TARC/CCL17、CTACK/CCL27、RANTES/CCL5和CXCL10/IP-10 m RNA的表达。结果:6周后治疗组临床基本治愈26例,显效10例,好转5例,无效2例,总有效率83.7%,对照组临床基本治愈5例,显效19例,好转10例,无效8例,总有效率为57.1%,两组相比差异具有显著性意义(u=4.1731)。治疗组治疗前血清IL-17A为(68.32±13.47)pg/ml,治疗后为(20.56±15.51)pg/ml,其表达水平下调明显,且与CXCL10/IP-10分子呈正直线相关(r=0.5218,P0.05);IL-23、TARC/CCL17治疗后表达水平明显下调,但与IL-17A及CXCL10/IP-10无明显相关性;而TNF-a、TGF-β1和其他趋化因子治疗前后变化不明显。结论:红花逍遥片联合甘草润肤洗剂可以负向调控CXCL10/IP-10和IL-17A的表达从而影响表皮角化过程,这可能在其对特应性皮炎患者的治疗中起重要作用。     

RNAi技术抑制HepG2细胞中DcR3的表达

目的探讨特异性DcR3-siRNA对人肝细胞癌细胞系HepG2的DcR3基因表达的影响。方法设计并合成带FAM荧光标记的针对DcR3的siRNA4条和非特异性siRNA1条,用脂质体转染HepG2细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪判断转染效果;应用半定量RT-PCR和免疫细胞化学检测特异性DcR3-siRNA的对HepG2细胞中DcR3表达的抑制作用。结果各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3 mRNA表达(P<0.05),其中以siRNA4的作用更明显,干扰作用达62.9%;将siRNA4转染HepG2细胞,免疫细胞化学结果显示,siRNA4能明显抑制HepG2细胞中DcR3蛋白的表达(P<0.01)。结论特异性DcR3-siRNA在体外实验能抑制目的基因的表达。     

益髓灸对D-半乳糖衰老小鼠脑组织SOD2、GADD45蛋白及mRNA水平的影响

目的观察益髓灸对D-半乳糖衰老小鼠脑组织锰超氧化歧化酶(SOD2)、GADD45蛋白及其m RNA表达的影响。方法 60只SPF级雄性昆明小鼠,随机分为生理组、模型组、艾灸1组、艾灸2组和非穴位组,每组12只。采用D-半乳糖颈背部皮下注射,建立亚急性衰老小鼠模型。造模第13天艾灸1组、艾灸2组和非穴位组开始艾灸治疗,共治疗58 d。生理组及模型组不做任何治疗性干预,给予与各治疗组相同时间、程度的刺激。采用免疫组化检测海马和大脑皮质SOD2、GADD45蛋白水平,RT-PCR检测SOD2、GADD45的m RNA表达情况。结果与生理组比较,模型组海马和大脑皮质SOD2、GADD45蛋白的表达显著降低,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,艾灸1组和艾灸2组SOD2、GADD45的蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。与生理组比较,模型组海马和大脑皮质SOD2、GADD45 m RNA的表达显著降低,差异具有统计学意义(P0.05);与模型组比较,艾灸1组和艾灸2组SOD2、GADD45 m RNA的表达显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论益髓灸能够提高D-半乳糖衰老小鼠脑组织SOD2、GADD45蛋白及m RNA的表达,有提高神经细胞的抗氧化能力、修复力的作用。     

艾炷灸对衰老小鼠学习记忆力及胰岛素水平的影响

目的:观察艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠学习记忆及血清、脑组织胰岛素(INS)水平的影响。方法:将75只小鼠随机分为对照组、造模组、艾灸1组、艾灸2组、艾灸3组,每组15只。艾灸1组艾炷灸足三里穴+悬钟穴,艾灸2组艾炷灸百会穴+关元穴,艾灸3组艾炷灸腕背关节上1mm与膝髌正中上沿上2mm。用Morris水迷宫测试学习记忆力,用酶联免疫法检测血清及脑组织INS水平。结果:治疗前各组小鼠水迷宫各项指标及学习记忆能力比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后,造模组与对照组、艾灸1组、艾灸2组比较,各项指标差异均有统计学意义(P0.01或P0.05);对照组、艾灸1组、艾灸2组与艾灸3组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。造模组血清和脑组织INS水平较对照组、艾灸1组和艾灸2组升高或降低,差异均有统计学意义(P0.01或P0.05);对照组、艾灸1组、艾灸2组与艾灸3组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:艾炷灸足三里穴+悬钟穴、关元穴+百会穴均能显著提高D-半乳糖衰老小鼠学习记忆能力,与降低外周循环胰岛素水平、提高脑组织的胰岛素浓度有关,具有延缓脑衰老作用。