人类凋亡相关新基因HDDC2功能的初步研究

利用NCBI数据库分析得到人类基因HDDC2的DNA序列,通过聚合酶链式反应克隆得到该功能基因,运用生物信息学分析该蛋白的特性,同时利用细胞生长曲线检测HDDC2促进HEK293细胞凋亡作用;使用流式细胞术检测HDDC2对HEK293细胞的作用以及HDDC2引起HEK293细胞线粒体膜的影响;运用Western blot检测HDDC2引起细胞凋亡相关基因PARP的作用。生物信息学预测HDDC2基因位于6q22.31,全长1615bp,从205到819有一个编码204个氨基酸的开放阅读框,编码一个分子量约23.4kd的蛋白。HDDC2基因含有6个外显子和5个内含子,定位于线粒体,且在人类正常组织中普遍表达,同时HDDC2基因能够明显引起HEK293细胞的程序性死亡,能够引起其磷脂酰丝氨酸的外翻和线粒体膜电位的下降,同时该基因能够引起细胞凋亡相关基因PARP的活化。人类基因HDDC2是一个可能参与到程序性细胞死亡相关的新基因,它的发现有助于发现新的药物作用靶点或者新的基因治疗药物。     

免疫检查点阻断剂治疗血液肿瘤的研究进展

免疫检查点阻断剂(ICB)通过阻断异常活化的免疫抑制通路,重新激活T细胞免疫效能,恢复并增强全身抗肿瘤免疫反应,从而控制和清除肿瘤,在众多实体肿瘤和血液肿瘤中已取得肯定的疗效。血液肿瘤中,程序性细胞死亡受体1(PD-1)阻断剂nivolumab在复发/难治经典型霍奇金淋巴瘤中取得显著成效,激发了研究者对ICB治疗能否取得良好效果产生了浓厚兴趣。近年来,PD-1及其配体1和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4成为研究热点,许多与两者相关的阻断剂治疗血液肿瘤的临床试验得到开展,形式多样,主要包括单药和联合治疗,初步结果良好。     

七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤及其机制

目的：观察吸入麻醉药七氟醚对HT22小鼠海马神经元细胞DNA的损伤,阐明七氟醚诱导脑神经毒性的可能机制。方法：HT22小鼠海马神经元细胞随机分为空白对照组、2%七氟醚组（2%Sevo 6 h组、2%Sevo 12 h组和2%Sevo 24 h组）、4%七氟醚组（4%Sevo 6 h组、4%Sevo 12 h组和4%Sevo 24 h组）和8%七氟醚组（8%Sevo 6 h组、8%Sevo 12 h组和8%Sevo 24 h组）,应用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法和乳酸脱氢酶（LDH）法分别检测各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率。根据实验结果将细胞分为生理盐水组、生理盐水+4%Sevo 12 h组、生理盐水+8%Sevo 12 h组、N-乙酰半胱氨酸组（NAC组）、NAC+4%Sevo 12 h组和NAC+8%Sevo 12 h组。采用MTT法和LDH法分别检测NAC预处理后各组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率;应用单细胞凝胶电泳检测各组HT22小鼠海马神经元细胞DNA双链断裂情况;Western blotting法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量;DCFH-DA法检测各组HT22小鼠海马神经元细胞中活性氧（ROS）水平。结果：与空白对照组比较,2%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率和死亡率差异无统计学意义（P>0.05）;4%Sevo组和8%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.01）,死亡率升高（P<0.01）。与4%Sevo组比较,同一时间8%Sevo组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与4%Sevo 6 h组比较,4%Sevo 12 h组和4%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）;与4%Sevo 12 h组比较,4%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与8%Sevo 6 h组比较,8%Sevo 12 h组和8%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）;与8%Sevo 12 h组比较,8%Sevo 24 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率降低（P<0.05）,死亡率升高（P<0.05）。与生理盐水组比较,生理盐水+4%Sevo 12 h组和生理盐水+8%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞内DNA双链断裂增多,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量增加、ROS水平升高（P<0.05）。与生理盐水+4%Sevo 12 h组比较,NAC+4%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高（P<0.01）,死亡率降低（P<0.01）,细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）;与生理盐水+8%Sevo 12 h组比较,NAC+8%Sevo 12 h组HT22小鼠海马神经元细胞存活率升高（P<0.01）,死亡率降低（P<0.01）,细胞中DNA双链断裂减少,DNA损伤相关蛋白8-OHdG、ATM、p-ATM和γ-H2AX表达量减少,海马神经元细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）。结论：七氟醚能够通过诱导DNA损伤导致HT22小鼠海马神经元细胞死亡,其机制可能与诱导海马神经元细胞中ROS积聚有关。     

顺铂诱导的自噬在口腔鳞癌Tca83细胞中的作用

目的:探讨顺铂诱导的自噬在口腔鳞癌Tca83细胞中的作用。方法:利用顺铂作用于口腔鳞癌Tca83细胞,不同时间后MTT法检测细胞生存率的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞胞浆中自噬体的形成情况,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:顺铂作用于Tca83细胞2h即可出现明显的自噬性变化。细胞凋亡率随顺铂作用时间的延长而逐渐增加。结论:顺铂可以诱导口腔鳞癌Tca83细胞发生自噬,过度激活的自噬作为细胞的一种死亡程序,可以与凋亡一起促进细胞死亡。     

How does ethanol induce apoptotic cell death of SK-N-SH neuroblastoma cells？

A body of evidence suggests that ethanol can lead to damage of neuronal cells. However, the mechanism underlying the ethanol-induced damage of neuronal cells remains unclear. The role of mitogen-activated protein kinases in ethanol-induced damage was investigated in SK-N-SH neuroblastoma cells. 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide cell viability assay, DNA fragmentation detection, and flow cytometric analysis showed that ethanol induced apoptotic cell death and cell cycle arrest, characterized by increased caspase-3 activity, DNA fragmentation, nuclear disruption, and G1 arrest of cell cycle of the SK-N-SH neuroblastoma cells. In addition, western blot analysis indicated that ethanol induced a lasting increase in c-Jun N-terminal protein kinase activity and a transient increase in p38 kinase activity of the neuroblastoma cells. c-Jun N-terminal protein kinase or p38 kinase inhibitors significantly reduced the ethanol-induced cell death. Ethanol also increased p53 phosphorylation, followed by an increase in p21 tumor suppressor protein and a decrease in phospho-Rb （retinoblastoma） protein, leading to alterations in the expressions and activity of cyclin dependent protein kinases. Our results suggest that ethanol mediates apoptosis of SK-N-SH neuroblastoma cells by activating p53-related cell cycle arrest possibly through activation of the c-Jun N-terminal protein kinase-related cell death pathway.     

七氟醚后处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞胀亡的影响:与线粒体通透性转换孔的关系

目的 评价七氟醚后处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞胀亡的影响及线粒体通透性转换孔(MPTP)在其中的作用.方法 雄性SD大鼠60只,3月龄,体重280 ～ 360 g,采用随机数字表法,将其分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚后处理组(SP组)、七氟醚后处理+苍术苷组(SP+ ATR组)和苍术苷组(ATR组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min后再灌注的方法制备心肌缺血再灌注模型.SP组和SP+ ATR组于缺血27 min到再灌注开始后2 min吸入2.5％七氟醚,共5 min,其余组吸入氧浓度33％的空气.SP+ ATR组和ATR组于缺血前15 min经颈静脉注射MPTP开放剂苍术苷5 mg/kg.记录心率和收缩压,计算二者乘积(RPP);于再灌注2h时取心肌组织,测定心肌梗死范围;电镜下观察心肌超微结构;采用Western blot法测定诱导膜损伤的前胀亡受体(Porimin)表达水平;采用分光光度法测定心肌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)含量.结果 与S组比较,其余4组心肌梗死范围扩大,Porimin表达上调,NAD+含量和RPP降低(P＜0.05);与I/R组和SP+ATR组比较,SP组心肌梗死范围缩小,Porimin表达下调,NAD+含量升高(P＜0.05),ATR组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟醚后处理可通过抑制MPTP开放,减少心肌细胞胀亡,对大鼠缺血再灌注心肌起到保护作用.     

程序性细胞死亡的分子机制及其与干性年龄相关性黄斑变性的关系

干性年龄相关性黄斑变性 (AMD) 是一种与年龄高度相关的退行性眼底病变,视网膜色素上皮细胞死亡是AMD致病的主要原因。程序性细胞死亡是一类由特定基因介导并调控的细胞死亡过程,在人体生长发育和疾病发病过程中起着重要的作用。越来越多的研究表明,程序性细胞死亡在AMD的发生发展中起着关键的作用。本文对当前5种常见的程序性细胞死亡的分子机制及其与干性AMD的关系进行综述。