流感病毒血凝素基因工程抗体的抗病毒实验效果观察

目的：对昆虫细胞系统表达纯化的中和性流感病毒血凝素基因工程全抗体IgG-IV-2,IgG-IV-6进行体外和体内抗病毒效果的研究。方法：对比抗体应用前后病毒在MDCK细胞中的病毒滴度和动物模型中粘膜用药前后鼠肺内病毒滴度的改变，验证抗体的粘膜抗感染效果。结果：两株基因工程抗体使4．5log10TCID50滴度的病毒下降1／2的剂量分别为0．8μg和0．5μg；动物模型的粘膜给药表明使4．0log10TCID50的病毒下降1／2所需的抗体剂量IgG-IV-2为0．25mg/kg体重，IgG-IV-6为0．1mg/kg体重，联合应用时为0．08mg/kg体重。结论：获得的基因工程抗体具有体内体外的抗病毒效果，能够中和病毒毒力。     

一种朊蛋白错误折叠循环扩增方法的建立

目的建立一种类似于PCR的蛋白质扩增方法-蛋白错误折叠循环扩增技术(PMCA),用于朊病毒病脑组织中PrPSc的检测。方法将不同浓度的羊瘙痒因子263K毒株原液与正常仓鼠脑组织匀浆混合,经反复孵育/超声,共10~15个循环。WesternBlot检测扩增产物中蛋白酶K抗性PrPSc信号。结果在本研究试验体系下,263K毒株可以利用仓鼠脑组织为基质在体外迅速复制。所建立的PrPSc-PMCA技术可检测到10-5稀释的毒株原液中的PrPSc。与常规的脑组织免疫印记方法相比,敏感度提高了105~106倍。研究还显示PrPSc还可利用小脑和脑干为基质进行体外扩增复制。结论成功建立了PrPSc-PMCA技术,为朊病毒病的早期诊断和朊病毒生物学特性的研究提供了一种新的手段。     

耐热可溶性戊型肝炎病毒基因工程抗原的表达

目的 利用硫氧还蛋白融合表达系统表达戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV)结构基因片段，获得耐热，可溶、具有生物活性的HEV基因工程抗原。方法 将HEVORF26964-7126nt基因片段插入硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisA，转化大肠埃希菌BL21，经IPTG诱导，表达融合蛋白。裂解细菌后，离心，取上清置于80℃处理10min，再次离心，取上清用ELISA方法测定表达产物的生物活性。结果 SDS-PAGE分析表明，HEV结构基因获得高效表达，相对分子质量约为20000，耐热，水溶性好，ELISA证实具有HEV特异抗原性。结论 应用硫氧还蛋白融合表达系统成功表达了耐热，可溶，具有生物活性的HEV基因工程抗原。     

不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究

目的 研究不同剂量羊瘙痒因子263 K经颅内注射感染仓鼠后,在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关.方法 以胶质纤维酸性蛋白(glial fibrill aryacidic protein,GFAP)作为星形胶质细胞增生的分子标志物,采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达,经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异.结果与正常对照相比,不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高,但各感染剂量组间无显著差异.结论 不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似,与感染剂量及潜伏期无关联性.     

在中国发现普马拉型汉坦病毒

目的：确定我国是否存在普马拉（Puumala)病毒。方法：从我国东北地区棕背Bing肺标本中用RT－PCR扩增汉坦病毒S片段基因序列，对所扩增序列进行核苷酸序列测定和分析。结果：从我国东北地区棕背Bing肺标本中扩增出长度为926碱基对的cDNA片段，核苷酸序列测定证实为普马拉病毒S片段序列。与不同型别汉坦病毒代表株进行比较表明，此次发现为新的普马拉病毒株，系统发生分析结果表明，此次发现的病毒与普马拉病毒P360、K27、CG－820、CG－17株种系相近，同源性达到99％以上。结论：我国存在普马拉病毒，我国新发现的普马拉病毒核苷酸序列和俄罗斯远东地区普马拉病毒接近。     

诺如病毒酶联免疫检测试剂盒效果的研究

目的 比较RIDASCREEN Norovirus 3rdGeneration kit(R-biopham AG,darmstadt,Germany)(必发试剂盒)与IDEIA NLV kit(DAKOCytomation.,Ely,UK)(dako试剂盒)两试剂盒检测诺如病毒效果.方法 用此两种试剂盒以及RT-PGR方法 对长春和广州两地的308份腹泻患儿粪便标本各检测一遍.对RT-PCR阳性标本进行基因测序、序列对比以确定型别.结果 以RT-PCR方法 为金标准,必发试剂盒的灵敏度和特异度分别是96.10%和93.51%,阳性预测值和阴性预测值是83.14%和98.63%;dako试剂盒的灵敏度和特异度分别是95.83%和95.76%,阳性预测值和阴性预测值是87.34%和98.69%.结论 必发试剂盒因为具有满意的灵敏度和较好的特异度,应该成为ELLSA检测的首选.     

从人分离出两株甲型流感H9N2亚型毒株内部基因特性的研究

目的 了解2株从人分离出的H9N2亚型毒株内部基因特性，并弄清其来源。方法 用RT-PCR扩增目的基因，用P^CEM-T Vector(美国Promega公司)，4℃过夜连接，重组质粒转入dH5a细菌，筛选阳性菌落，酶切鉴定，送六合通公司自动测序。然后进行进化树分析。结果 2株测定毒株内部基因均为G9基因系，它们相互间除PA基因有差异外，其余5个基因均相同。结论 2株测定毒株的基因组均为G9基因系，它们是由携带不同基因特性H9N2毒株的禽群分别直接感染人，而不是来自同一禽的H9N2亚型流感病毒。     

常见呼吸道病毒分子鉴别诊断技术的建立

目的 建立一种常见呼吸道感染病毒的快速检测方法,为尽早诊断、减少疾病的传播以及为临床提供良好的治疗依据.方法 采用液体芯片检测技术结合靶向多重RT-PCR技术建立可以同时检测13种呼吸道病原的检测技术.结果 该方法特异性方面检测13种常见呼吸道病毒没有交叉,标本的检出率为100%;灵敏度方面达到10e2-10e1（pfu/ml）.结论 该分子鉴别诊断可应用常见呼吸道病毒的检测,协助诊断病毒引起的病毒性呼吸道感染.     

人类乳头瘤病毒(H1PV)病毒样颗粒的研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一类具有严格宿主范围和组织特异性的DNA病毒,主要感染人的皮肤或粘膜上皮细胞,引起感染部位发生良性和恶性病变.根据DNA序列的同源性组织特异性等,HPV可分为许多型别.目前发现的人乳头瘤病毒已超过100型[1],其中感染人生殖道的人乳头瘤病毒有35个型别[1],根据其致瘤性不同分为低危型和高危型两大类.高危HPV的感染与宫颈癌的发生有十分密切的关系.约80%的宫颈癌与四个型别的HPV感染有关,分别是HPV16、18、31和45型,其中50%的宫颈癌与HPV16感染有关[1].因此,使用疫苗阻断病毒的感染能有效的减少宫颈癌的发病率.同时还能减少其它一些和HPV相关的肿瘤如:肛门、外阴及扁桃体的肿瘤等.     

诺如病毒研究进展

诺如病毒(Norovirus,NVs) 属于杯状病毒科诺如病毒属,是引起病毒性胃肠炎的重要病原.该病原最初由Kapikian于1972年通过免疫电镜法对1968年美国诺瓦克市一次急性腹泻暴发的患者粪做一日和尚撞一天钟提纯进行抗原体反应得到,当时被命名为诺瓦克病毒.