在我国发现普马拉(Puumala)型汉坦病毒

普马拉病毒 (ｐｕｕｍａｌａｖｉｒｕｓ,ＰＵＵＶ)引起人类肾综合征出血热 (ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒｗｉｔｈｒｅｎａｌｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＨＦＲＳ) ,是流行性肾病(ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｉａｅｐｉｄｅｍｉｃａ,ＮＥ)的病原体 ,ＮＥ的病死率一般低于由汉滩型、汉城型和Ｄｏｂｒａｖａ型病毒引起的ＨＦＲＳ。ＰＵＵＶ的主要宿主动物是棕背 ,欧洲棕背ＰＵＵＶ的感染率可以高达4 7%。多年来 ,一般认为ＰＵＵＶ主要在欧洲流行 ,但是近年在日本和韩国均发现了ＰＵＵＶ。我们在我国东北地区捕获了棕背 ,取动物肺组织作冰冻切片 ,…     

普马拉型汉坦病毒

汉坦病毒可以引起两种临床表现不完全相同的人类疾病 :肾综合征出血热 (hemorrhagicfeverwithrenalsyndrome,HFRS)和汉坦病毒肺综合征 (Hantaviruspulmonarysyndrome,HPS) [1 ] 。HFRS主要在亚欧大陆流行 ,病例数占汉坦病毒感染的绝大多数 ,而HPS主要在美洲流行 ,病例数较少[2 ] 。汉坦病毒的型别较多 ,引起HFRS的病毒主要有汉滩病毒(Hantaanvirus ,HTN)、汉城病毒 (Seoulvirus,SEO)、普马拉病毒 (Puumalavirus ,PUU)和杜布罗瓦病毒 (Dobravavirus,DOB) [1 ] 。我国以往对汉坦病毒的研究主要集中在HTN和SEO[3] ,对PUU病毒…     

汉坦病毒A9株L片段部分核苷酸序列分析

目的 测定我国分离的汉坦病毒Ａ９株Ｌ片段的部分核苷酸序列。方法 用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增我国分离的汉坦病毒Ａ９株部分Ｌ片段ｃＤＮＡ,测定ＰＣＲ产物的核苷酸序列。结果 ＰＣＲ扩增产物为Ｌ片段４００６ｎｔ－４４５４１ｎｔ（根据７６－１１８株序列）,和已发表的汉坦病毒Ｌ片段序列比较,Ａ９株和汉滩病毒７６－１１８株同源性最高,为８５．２％,和其他不同型别汉坦病毒代表株ＨＲ８０－３９、     

汉城病毒新亚型的发现

目的 至今为止,汉城病毒间核苷酸序列的同源性均在９５％以上,而氨基酸序列显示出更高的保守性。本研究对一株分离子褐家鼠的汉城病毒Ｇｏｕ３株的Ｍ、Ｓ片段进行了部分核苷酸序列测定,观察其与已知汉城病毒的差异。方法 采用逆转录－ＰＣＲ方法对Ｇｏｕ３病毒进行了扩增鉴定,并对其部分Ｍ和Ｓ基因组片段进行了碱基序列测定。结果 表明Ｇｏｕ３与其他ＳＥＯ病毒有不同的ＰＣＲ扩增特点。序列测定也显示其是一个差异较大的汉城病毒株,与基佗汉城型病毒的同源性却只有８５％左右。但由其推导出的Ｇｏｕ３的部分糖蛋白的氨基酸序列与其他汉城型病毒相比却高度保守。系统发生树分析表明Ｇｏｕ３是介于汉城病毒与汉滩病毒之间,但其亲缘关系较近于已知汉城病毒。结论 Ｇｏｕ３病毒为汉城病毒,是属于汉城病毒一个新亚型。     

汉坦病毒基因工程技术及其应用

利用基因工程技术表达汉坦病毒包膜糖蛋白和核衣壳蛋白，用于汉坦病毒基因工程疫苗的研制，而表达重组核衣壳蛋白或多肽为制备诊断抗原提供了易于生产和纯化的抗原材料。本文就此方面进展作一综述。     

汉坦病毒分子生物学研究进展

本文对汉坦病毒分子生物学，包括汉坦病毒基因结构、复制转录、结构蛋白特性以及汉坦病毒的变异性和进化等诸方面的最新研究进展进行了综述。     

汉坦病毒的研究进展

本文重点介绍汉坦病毒中间宿主，引起的主要疾病及其诊断的最新进展。     

天津地区汉坦病毒分离株TJJ16S基因片段克隆和序列分析

目的 了解天津地区汉坦病毒分离株TJJ16S基因的分子特征。方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒，命名为TJJ106，提取TJJ16感染Vero-E6细胞的总RNA，经逆转录扩增病毒cDNA，继而进行PCR扩增S基因片段，纯化后兜隆于pMD-18T载体，测定核苷酸序列并进行分析。结果天津地区首次从社鼠中分离出汉坦病毒TJJ16，其S基因片段全序列长为1701nt。只有1个编码N蛋白的开放读码框架（ORF），起始密码子为第37nt，终止于1326nt，推导其编码的蛋白长为429个氨基酸。经核苷酸系统发生树分析，TJJ16株应归属为汉坦病毒的汉滩型（HTN型）毒株，与HTN型新亚型A16株同属一个亚型。结论TJJ16病毒株的分离与S基因片段序列分析，证实在天津市鼠间存在HTN型汉坦病毒感染，对临床和流行病学的研究具有重要意义。     

肠道病毒71型中国分离株基因组3区的分析

目的 测定我国分离的肠道病毒71型(EV71)SHZH98株3C基因的核苷酸序列，进行遗传进化途径的分析。方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增我国分离的EV71-SHZH98株3C基因cDNA，测定PCR产物的核苷酸序列。结果 SHZH98株3C基因为549bp，和已发表的肠道病毒71型3C基因序列比较，SHZH98株与MS株同源性为78．7％，与BrCr株的同源性为76．7％，与台湾分离株POLY、NCKU、TW2086、TW2272株的同源性分别为74．0％、73．8％、71．9％、69．8％。由其核苷酸序列推导的氨基酸序列同源性比较显示与MS的同源性为93．45％，与BrCr、POLY、NCKU、TW2086、TW2272株的同源性分别为89．1％、90．7％、90．2％、84．2％、82．5％。遗传进化分析显示SHZH98株3C片段在亲缘关系上与Coxsackievirus A16 G-10株及欧美分离株MS、BrCr株较密切，而与台湾分离株相差较远。结论 推测EV71病毒中国分离株非结构蛋白的进化途径可能与台湾流行株不同。     

汉坦病毒Q32株L和M片段全基因序列分析

目的测定汉坦病毒Q32株L、M片段的全长序列,了解其分子基础。方法设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增Q32株全长L、M片段,PCR产物纯化后直接测序,或用T-A克隆方法进行PCR产物克隆,然后进行遗传进化分析。结果Q32株L片段的全基因序列共6533个核苷酸,GC含量为37·38%,AT含量为62·62%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),该读码框架从38到6493,由6456个核苷酸组成,编码2151个氨基酸,可以合成相对分子质量为2·46×105的蛋白。M片段全基因序列共3616个核苷酸,GC含量为39·44%,AT含量为60·56%,包含一个单一的开放读码框架(ORF),其读码框架从41到3448,由3408个核苷酸组成,编码1135个氨基酸,可以合成相对分子质量为1·26×105的蛋白。Q32编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域。结论汉坦病毒Q32株M和L片段具有和其他汉坦病毒糖蛋白和RNA聚合酶相似的核苷酸一级结构,核苷酸序列虽有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍很高。     

2001年中国新分离维多利亚系乙型流感病毒的抗原性及基因特性分析

目的：研究2001年中国新分离维多利亚（Victoria)系乙型流感病毒的抗原性及基因特性。方法：鸡胚传代流感病毒，从尿囊液中提取流感病毒的RNA，进行逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR），扩增产物用纯化试剂盒纯化后测序，然后用MegAlign软件进行基因种系发生树分析。结果：B／Sichuan/63/2001和B／Zhejiang/2/2001毒株的抗原性与B／Shandong/7/97毒株间存在有差异，编码血凝素重链区基因已发生了突变并导致了HA1蛋白抗原性表位两个位点（197和199）氨基酸不同于B／Shandong/7/97毒株，基因种系发生树分析同样也证明了它们的HA1基因不同于B／Shandong/7/97病毒。然而，B／Sichuan/63/2001与B／Zhejiang/2/2001毒株间无论抗原性还是HA1基因特性均很相似。结论：2001年我国人群中流行的乙型流感病毒维多利亚毒株系的抗原性已发生进一步的漂移。     

A组轮状病毒广州地方株VP7基因序列的比较分析

目的 了解我国轮状病毒G1型广州地方株与标准株及北京G1型地方株VP7基因序列的差异，为我国轮状病毒疫苗的研制提供资料。方法 通过逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)获得了轮状病毒广州地方株R97—196 VP7全基因的cDNA片段，将其克隆入T—A克隆质粒pUCm—T中，构建成重组质粒pUCmT—VP7，对克隆的VP7基因进行序列测定。结果 该地方株的基因核苷酸全长为1062nt，读码框架和以往的研究一致，和北京G1型地方株173的VP7氨基酸序列具有高度同源性(98％)，而与不同血清型标准株间则变异较大(73％—81％)，氨基酸序列中存在的一些高变区和保守功能区与已报道的研究结果一致。从进化角度分析，与轮状病毒标准株Wa株，相距较远。结论 轮状病毒广州地方株R97—196 VP7基因片段属G1型，轮状病毒VP7基因的变异与地域有一定关系。     

肾综合征出血热山东分离株鲁宁-84刘株的分子特征分析

目的 分析肾综合征出血热山东分离株鲁宁—84刘株的分子特征。方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)扩增鲁宁—84刘株M和S片段全基因，克隆于T载体，纯化后测定序列，应用DNA STAR软件比较分析。结果 鲁宁—84刘株(JNL株)的M片段的全基因序列共3615个核苷酸，编码1135个氨基酸，S片段的全基因序列共1698个核苷酸，编码429个氨基酸，为HTN型毒株。JNL株与HTN型毒株M和S全基因序列差异分别高达20．0％-20．6％和15．5％-16．0％，基于核苷酸序列的种系发生分析结果也可以看到，鲁宁—84刘株不同于国内外其他的分离株，处于独立的分支。结论 山东地区鲁宁—84刘株流行株是与国内外HTN型毒株不同的新的HTN亚型病毒。     

Hantavirus cardiopulmonary syndrome due to Puumala virus in Germany

In Germany Puumala virus (PUUV), known to cause mild forms of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS), is the predominating endemic hantavirus. We herein describe an unusually severe case of a PUUV infection that occurred in summer 2015 in South Eastern Germany in a region known to be endemic for PUUV since over ten years. A 54-year-old female gardener was admitted to hospital with fever, cough and dyspnea. Within 48 hours the patient developed a rapid progressive adult respiratory distress syndrome (ARDS) with circulatory failure and required ECMO (extracorporeal membrane oxygenation) treatment. Serological and molecular biological examinations of serum samples confirmed an infection with PUUV. Partial sequences of the S- and M-segment clustered to a strain previously described in South Eastern Germany. Our reported case highlights, that in rare incidents PUUV can cause hantavirus cardiopulmonary syndrome, a syndrome that is usually found after infections with New World hantaviruses, and neurological symptoms.     

呼吸道合胞病毒分离株N蛋白编码基因特征分析

目的 阐明人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)A和B亚型病毒分离株的核蛋白(nucleoprotein,N)编码基因特征.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(revelrse transciptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)对北京2004年分离的HRSV代表株(2株A亚型和2株B亚型)进行N基因全长序列扩增、测序,并和GenBank下载的所有HRSV病毒的N基因全长序列进行对比和分析.结果 2株HRSV A亚型分离株与A亚型Long株(标准株)的N蛋白的核苷酸和氨基酸差异分别为36～40个(3.1%～3.4%)和4个(1.0%);2株HRSV B亚型分离株与B亚型CH18537株(标准株)的N蛋白之间的核苷酸和氨基酸差异分别为17(1.4%)和1(0.3%)个.4株HRSV代表株和从GenBank下载的HRSV的N蛋白之间的核苷酸和氨基酸差异分别为3～172个(0.25%～14.63%)和0-18个(0～4.6%).结论 N基因在HRSV基因组中是较为保守的基因,A或B亚型的型内差异相对较小;但A和B亚型之间N基因序列有较大变异,变异平均分配于整个N基因中;本研究为HRSV基因快速诊断试剂的研制提供了基因信息学数据.     

西安地区汉坦病毒L及S部分片段的编码序列分析

应用巢氏PCR法从陕西西安地区间接免疫荧光抗原初检为阳性的黑线姬鼠标本中扩增汉坦病毒的L和S片段部分序列。序列分析显示：不同标本来源的汉坦病毒均为汉滩型病毒,彼此之间L和S部分片段序列同源性较高,与贵州地区优势汉滩型病毒S2／L4群毒株同源性最高,分别为95．0％～97．0％和97．7％～99．3％,但与该地区已报道的汉坦病毒同源性较低。系统发育树显示：所有来自西安的病毒株处在同一个进化分支上,但可分成两个较小的分支。证实目前检测到的西安地区流行的汉坦病毒株与贵州地区汉滩型病毒株亲缘关系最近,而与当地既往流行毒株的差异较大,究竟是西安地区汉坦病毒流行株发生了变化还是当地同时流行多种毒株还有待于进一步研究证实。     

青岛地区2000-2003年HFRS患者汉坦病毒部分M基因的检测及其分型研究

目的　调查山东省青岛地区 2 0 0 0 - 2 0 0 3年汉坦病毒的流行情况 ,研究病毒在该地区的分子流行病学特征。方法　采集肾综合征出血热 (HFRS)急性期患者血清标本 6 4份 ,提取血清中病毒RNA作为模板 ,根据GenBank中汉坦病毒基因序列 ,设计HTN型和SEO型的通用外套引物 ,同时分别设计HTN和SEO型的特异性引物作为内套引物 ,RT nest PCR扩增汉坦病毒基因组M片段G1区基因并测序。利用DNAStar软件进行核苷酸序列分析。结果　在 6 4份标本中 ,用HTN型特异性引物扩增出 6份 ,占 9% ;用SEO型特异性引物扩增出 2 5份 ,占 39% ;总阳性率为 4 8%。总体看来青岛地区流行的毒株以SEO为主。SEO型汉坦病毒间核苷酸序列的差异相对较小 ,其基因的离散率为0.3%～ 8.9%。HTN型汉坦病毒的变异率较高 ,其基因的离散率为 2.6 %～ 11.2 %。结论　青岛地区是以SEO型汉坦病毒的流行为主 ,HTN型并存的混合疫区 ;其中HTN型主要发现在胶南市     

通用型病毒检测芯片在三种人类致病病毒属检测中的应用

目的 研究制备对人类有致病作用的38个属的病毒寡核苷酸（oligo）基因芯片对三种人类致病病毒的检测能力。方法 应用生物信息学软件设计70-mer oligo探针，固定于玻片载体制备成基因芯片。以痘苗病毒天坛株、甲肝病毒、乙肝病毒作为检测样本，提取病毒核酸，经随机引物扩增、荧光标记，用于芯片杂交，清洗和干燥后对芯片进行扫描和数据分析。结果 芯片上oligo探针能与相应病毒的PCR扩增样品杂交，呈现阳性荧光信号。结论 建立的病毒寡核苷酸基因芯片能够检出和区分三种检测病毒，为进行未知病毒的基因芯片筛查方法的建立奠定了基础。     

中国狂犬病高发地区狂犬病毒磷蛋白基因特点分析

目的 调查研究中国狂犬病高发地区狂犬病毒磷蛋白P基因遗传变异情况,分析其结构特点.方法 测定广西、贵州、湖南的人、犬脑组织标本狂犬病毒P基因核苷酸序列,进行序列的同源性比较和种系发生分析.结果 P基因核苷酸和推导氨基酸序列同源性分别为82.1%~100%和87.5%~100%;三省区毒株明显区别于其他国家地区分离株;PP主要功能位点未发生影响P基因生物学功能的变异.结论 三省区狂犬病毒同属于基因1型,具有共同的进化途径和基因结构特点;病毒分布具有独特的中国地域性特征;中国湖南省个别毒株可能和泰国毒株来源于共同的狂犬病毒.