吉林省普马拉病毒的RT—PCR检测与序列分析

目的建立检测普马拉病毒的RT—PCR方法，确认吉林省存在普马拉病毒，并对病毒的基因片段进行分析。方法采用RT—PCR方法，对吉林省抚松地区棕背（[鼠平]）鼠肺标本进行检测。对S片段核蛋白基因编码序列进行序列比较分析，绘制系统发生树。结果研究表明在吉林省抚松地区存在普马拉病毒，采集于2005年和2006年的标本阳性率分别为7．34％和14．29％，呈逐年上升趋势。序列分析表明与其他普马拉病毒核苷酸序列同源性只有81．1％～83．3％。系统发生分析揭示，该病毒与在日本、韩国分离的普马拉病毒亲缘关系相对接近，并且在进化过程中处于更古老的节点。结论在吉林省抚松地区可能存在普马拉病毒的一个新亚型。     

微量板酶免疫斑点法测定麻疹病毒滴度

测定麻疹病毒滴度常用微量板细胞病变法（ＣＰＥ）或蚀斑法。为简化实验结果判定过程，使实验指标判定更客观，我们在ＣＰＥ方法基础上建立了微量板酶免疫斑点法（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔｓ，ＭＥＩＳ）。该方法通过酶促底物显色和抗原———抗体特异反应，使培养板上感染病毒造成细胞病变的部位形成可见的染色斑点。经肉眼直接观察，以培养板孔底出现特异性染色斑点为病变阳性，计算半数细胞感染浓度（ＣＣＩＤ５０），免去了显微镜下观察细胞病变的过程。经测定５０批麻疹病毒，ＭＥＩＳ法与ＣＰＥ法比较，结果ＣＣＩＤ５０符合率为９８．０％（４９／５０）；实验共用８００板孔，各孔结果总符合率为９９．８８％（７９９／８００），敏感性１００％（５１０／５１０），特异性９９．６６％（２８９／２９０）。本实验方法是敏感、特异的滴定麻疹病毒的新方法，尤其适用于多份病毒的滴定。     

12省市人群中微小病毒B19IgG抗体水平调查

用ＥＬＩＳＡ方法对全国１２省部分地区人群共７６０份血清Ｂ１９ＩｇＧ水平进行了调查。２８３份健康人血清抗体阳性率为３０．２％～９０．５％，平均４５．６％；病人血清４４５份，其中表现出与Ｂ１９感染所致疾病相似症状者（３３２份）Ｂ１９ＩｇＧ阳性率为３８．８％，水平高于患其它疾病人群（１１３份血清，阳性率２５．７％，ｕ＝２．５３３，０．０２＞Ｐ＞０．０１）；另外调查孕妇３２例，阳性率４０．６％。说明微小病毒Ｂ１９在中国人群中存在着广泛的感染     

丙型肝炎病毒感染的血清学检测

目的了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染及病毒血症存在情况。方法用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）对不同人群的血清标本做了抗－ＨＣＶ、抗－ＨＣＶＩｇＭ和ＨＣＶＲＮＡ的检测，并对三项指标间的关系进行了对比分析。结果抗－ＨＣＶ在普通成年人、献血员、急性肝炎和肝硬化患者中的检出率分别是３５７％，８５８％，６２５％和４８３８％；与ＨＣＶＲＮＡ的符合率分别是１１４３％，６１１１％，８００％和７３３３％。相同人群抗－ＨＣＶＩｇＭ与ＨＣＶＲＮＡ的符合率分别是７５％，９０９％，８１８１％和１００％。结论抗－ＨＣＶＩｇＭ比抗－ＨＣＶ能更客观地反映ＨＣＶ病毒血症的情况，个别抗－ＨＣＶ阴性血清检测到了抗－ＨＣＶＩｇＭ和ＨＣＶＲＮＡ。     

在中国发现普马拉型汉坦病毒

目的：确定我国是否存在普马拉（Puumala)病毒。方法：从我国东北地区棕背Bing肺标本中用RT－PCR扩增汉坦病毒S片段基因序列，对所扩增序列进行核苷酸序列测定和分析。结果：从我国东北地区棕背Bing肺标本中扩增出长度为926碱基对的cDNA片段，核苷酸序列测定证实为普马拉病毒S片段序列。与不同型别汉坦病毒代表株进行比较表明，此次发现为新的普马拉病毒株，系统发生分析结果表明，此次发现的病毒与普马拉病毒P360、K27、CG－820、CG－17株种系相近，同源性达到99％以上。结论：我国存在普马拉病毒，我国新发现的普马拉病毒核苷酸序列和俄罗斯远东地区普马拉病毒接近。     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用（简报）

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2／0融合，获得4A5，4C2，5C0．6B6四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA)，测知培养上清抗体滴度为1：16—1：128，接种同系小鼠腹腔诱生的腹水，     

吉林省汉城型汉坦病毒基因分型研究

目的 查明吉林省褐家鼠中汉城型汉坦病毒的基因亚型及其分布情况。方法 在吉林省的主要疫区采集啮齿类宿主动物，用免疫荧光法检测鼠肺标本，对汉坦病毒抗原阳性标本以RT-PCR法扩增部分M和S基因片段上的核苷酸序列并测序，将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒序列进行系统发生分析并分型。结果 褐家鼠携带的汉坦病毒均为汉城病毒。序列分析发现在吉林省主要疫区褐家鼠流行的汉城病毒均为S3亚型，与辽宁、黑龙江省褐家鼠中的病毒株同源性较高，进化关系较近。结论 吉林省褐家鼠主要携带S3亚型的汉城型汉坦病毒。     

东北三省部分地区人血清恙虫病立克次体抗体调查

自１９９２～１９９４年发现辽宁、吉林、黑龙江三省存在恙虫病自然疫源地之后,了解恙虫病流行范围,则是恙虫病工作者关注的问题。１９９７年以来,在东北三省的２７个市、县进行了血清学调查,加上前几年的调查,共３８个市、县,阳性的市、县２８个,给出了一个东北三...     

普马拉病毒核蛋白基因片段原核表达及产物纯化

目的通过原核表达获得普马拉病毒重组核蛋白。方法采用RT-PCR方法,从感染普马拉病毒的鼠肺标本中扩增得到编码核蛋白1-117 aa的基因片段。将截短的核蛋白基因片段插入原核表达载体PQE30构建重组质粒,转化至大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,利用N i-NTA Agarose对表达产物进行纯化。结果重组蛋白得到了高效表达。表达产物分子量15 000,在菌体中主要以可溶性蛋白形式存在。通过亲和层析,得到了纯化的重组蛋白。结论普马拉病毒重组核蛋白基因片段得到了有效表达。     

吉林省发现普马拉型出血热疫源地

~~吉林省发现普马拉型出血热疫源地@扈光伟$吉林省疾病预防控制中心!长春130012 @黄飚$吉林省疾病预防控制中心!长春130012 @吴燕平$吉林省疾病预防控制中心!长春130012 @姚来顺$吉林省疾病预防控制中心!长春130012 @苟伟民$延边州疾病预防控制中心 @冯国栋$白山市疾病预防控制中心 @金龙哲$珲春市疾病预防控制中心 @崔庆进$延边州疾病预防控制中心 @马力$抚松县疾病预防控制中心 @张强5