健骨颗粒治疗原发性骨质疏松症(肝肾不足证)Ⅲ期临床研究

目的：在Ⅱ期临床试验基础上，进一步评价健骨颗粒治疗原发性骨质疏松症（肝肾不足证）的临床疗效和安全性。方法：96例原发性骨质疏松症（肝肾不足证）患者，采用随机双盲、阳性药物对照的临床试验设计方法。结果：两组治疗后腰椎骨密度值均上升，治疗组股骨颈骨密度值明显高于对照组，两组比较有显著性差异（P＜0．05）。骨质疏松症疗效：治疗组有效率为80．4％，对照组为80．0％，两组比较无明显差异（P〉0．05）；结论：健骨颗粒在口服剂量内能明显改善临床症状，升高骨密度值，用药安全，对于骨质疏松症有较好的治疗效果。     

白细胞介素18对病毒性心肌炎小鼠治疗作用的研究

近年来细胞因子在病毒性心肌炎 (ＶＭＣ)中的作用日益受到重视 ,而白细胞介素 1 8(ＩＬ 1 8)又称干扰素γ(ＩＦＮ γ)诱导因子 ,是新发现的一种多效型细胞因子 ,参与机体的多种炎症反应和免疫应答 ,且动物模型研究表明 ,ＩＬ 1 8具有抗病毒效应[1 ,2 ] 。为此 ,我们使用柯萨奇病毒Ｂ3ｍ(ＣＶＢ3ｍ) ,诱发小鼠急性ＶＭＣ后 ,投入基因重组的小鼠ＩＬ 1 8(ＩＬ 1 8)并观察其效应 ,以探讨ＩＬ 1 8对ＶＭＣ的治疗作用。材料和方法1 .病毒及实验动物 :ＣＶＢ3ｍ嗜心肌株 ,病毒原液效价为1 0 7ＴＣＩＤ50 ;Ｂａｌｂ/Ｃ小鼠 (由湖北省防疫站实验动物…     

胸腺素β4基因沉默对膀胱移行细胞癌上皮间质转化的逆转作用

目的 观察胸腺素β4(Tβ4)基因沉默对膀胱癌细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其在肿瘤侵袭转移中的作用机制.方法 使用针对Tβ4的慢病毒载体(knti-Tβ4)转染膀胱癌细胞株T24.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测Tβ4、整合素连接激酶(ILK)和上皮性标记基因E-cadherin、β-catenin的表达改变;Immunofluorescence法检测ILK、E-cadherin、β-catenin在转染后124细胞中的表达改变;细胞划痕实验、Boyden小室体外侵袭实验、AO/EB荧光染色法反映细胞转移潜能和凋亡的变化.结果 转染后48 h的T24细胞,Tp4、ILK、β-catenin mRNA或蛋白表达开始下降,以转染后96 h明显;而上皮标记基因E-cadherin在转染96h后,表达显著增加(P<0.05);Immunofluorescence显示ILK和β-catenin在细胞质、细胞核中表达减弱,而E-cadherin在胞膜中表达增强,细胞形态向正常上皮细胞转化;转染后的324细胞体外迁移能力与侵袭力下降[(10.4±1.2)%比(73.5±1.4)%],细胞凋亡增多(12.3%比36.6%).结论 肿瘤细胞中的Tβ4表达下调可以逆转肿瘤细胞的间质表型,而向正常上皮表型转化,降低肿瘤转移潜能.     

靶向人肝素酶短发卡状RNA表达载体的构建及其沉默作用

目的 构建靶向人肝素酶(HPSE)的短发卡状RNA(shRNA)表达载体,探讨其基因沉默作用.方法 根据人肝素酶mRNA序列设计shRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pGenesil-1载体,转化扩增后进行测序鉴定;重组质粒在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901、人前列腺癌细胞株PC-3、人膀胱癌细胞株EJ,每种细胞分别设空白对照组、空载体pGenesil-Negative转染组、pGenesil-HPSE shRNA转染组3组,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法检测各种细胞中肝素酶基因表达水平,黏附实验和transwell小室实验检测癌细胞游走、侵袭能力.结果 所构建的shRNA载体插入基因片段与设计序列完全匹配,载体构建成功;重组质粒转染SGC-7901、PC-3、EJ细胞后,肝素酶mRNA表达分别下调78.6%(P<0.01)、82.6%(P<0.01)、81.9%(P<0.01),肝素酶蛋白表达分别下调76.4%(P<0.01)、85.9%(P<0.01)、83.3%(P<0.01),细胞黏附能力分别下降37.7%(P<0.01)、44.6%(P<0.01)、43.8%(P<0.01),细胞侵袭能力分别下降66.8%(P<0.01)、76.6%(P<0.01)、80.5%(P<0.01).结论 成功构建了靶向人肝素酶的shRNA表达载体,沉默肝素酶基因表达后,能抑制多种癌细胞的游走和侵袭能力.     

顺序特异性引物法检测人胰腺癌细胞株PCNA-1的K-ras基因点突变的方式

胰腺癌具有发病隐匿，症状不典型，病情发展快，生物恶性程度高，预后差等特点。胰腺癌的切除率一般只在20％左右，五年生存率低于5％。本研究旨在采用顺序特异性引物法（SSP）对胰腺癌细胞株的K-ras基因点突变方式。     

凋亡抑制因子XIAP在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的检测抗凋亡（IAP）家族中XIAP在膀胱癌组织及癌旁正常组织的表达，探讨XIAP的表达在膀胱癌发生发展中的意义。方法采用免疫组织化学和实时荧光定量逆转录．聚合酶链反应（RT-QPCR）对50例膀胱癌患者中XIAP基因在癌组织和癌旁正常组织中的表达进行检测。结果免疫染色标本中，在空白对照、癌旁正常组织和膀胱癌组织中XIAP的阳性表达率分别为0、20％和60％。RT-QPCR显示XIAP在膀胱癌组织中的-△△CT值是癌旁组织的5．7163（4．3081-7．1245）倍，与分级、分期和有无转移没有相关性，但与是否复发有相关性。结论XIAP在癌旁正常组织中有少量表达，而在膀胱癌组织中的表达量高于癌旁组织，其表达量的多少可提肿瘤是否复发。     

内源性一氧化碳对局灶性脑缺血大鼠神经功能、梗死灶体积、脑含水量的影响

目的研究内源性CO浓度变化对局灶性脑缺血大鼠神经功能及脑组织含水量、梗死灶体积的影响.方法将48只S.D.大鼠随机分为2组(n=24), 一组为梗死灶体积组, 一组为脑含水量组.每一组又分为3小组, 分别为HO诱导剂、 HO抑制剂、生理盐水组(n=8).使用HO诱导剂、 HO抑制剂腹腔注射, 等量生理盐水腹腔注射作为对照组, 1 h后制成MCAO模型.栓塞后24 h观察局灶性脑缺血大鼠神经功能改变, 同时检测CO浓度、梗死灶体积、脑含水量.结果与生理盐水组相比, HO诱导剂组CO浓度明显升高(P＜0.01), 大鼠神经功能明显改善, 梗死灶体积、脑含水量明显降低, 各为(P＜0.01、 P＜0.01、 P＜0.05), 而HO抑制剂组CO浓度明显降低(P＜0.01), 大鼠神经功能缺失加剧, 梗死灶体积、脑含水量明显升高, 各为(P＜0.01、 P＜0.05、 P＜0.05).结论内源性CO是一种信使分子, 浓度升高对局灶性缺血的脑组织具有保护作用.     

稳定高表达Uroplakin Ⅱ基因人膀胱癌细胞株的建立及其意义

目的　建立稳定高表达UroplakinII(UPII)基因的人膀胱癌细胞株。方法　采用分子克隆技术构建含全长UPII结构基因的真核表达载体 ,进行酶切鉴定、核酸序列分析 ,并将其在阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0的介导下转染UPII基因缺陷型膀胱移行细胞癌 (TCC)细胞株EJ ,经G418筛选获得抗性亚克隆细胞株 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblotting方法对亚克隆细胞株进行UPII基因表达鉴定。结果　所获UPII基因真核表达载体pcDNA3 UPII转染EJ细胞后 ,通过G418持续压力筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/UPII ;RT PCR、Westernblotting均未检测到EJ细胞的UPII基因表达 ,而EJ/UPII细胞中UPIImRNA和蛋白表达水平显著增高 (P <0 .0 1)。结论　通过基因转染方法建立了稳定高表达UPII基因的膀胱TCC细胞株 ,为进一步探讨UPII基因在膀胱TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。     

核苷类似物早期病毒学应答慢性乙型肝炎患者血清sTRAIL水平变化及意义

目的:探索核苷类似物早期病毒学应答慢性乙型肝炎患者(CHB)血清sTRAIL水平变化及意义。方法:60例CHB均接受核苷类似物抗病毒药物治疗(拉米夫定或替比夫定),根据治疗24周末HBVDNA水平将患者分为完全病毒学应答组、部分病毒学应答组、无病毒学应答组,设正常对照组。采集治疗前、治疗4、12、24周末患者的血清,检测血清sTRAIL水平,同时检测IFN-γ、ALT水平。结果:患者治疗前sTRAIL、IFN-γ及ALT水平均较正常对照组升高(P0.05或P0.01)。sTRAIL水平在完全应答组治疗4周末、部分应答组治疗12周末下降。与治疗前比,差异均有统计学意义(P0.05),在治疗4周末完全应答组sTRAIL水平低于同期部分应答组(P0.05)。IFN-γ水平在完全应答组治疗4周末、部分应答组治疗12周末升高,与治疗前比差异均有统计学意义(P0.05),但完全应答组IFN-γ水平在治疗4周末与同期部分应答组差异无统计学意义。ALT水平在三组的治疗过程中均逐步下降,各时间点间差异均有统计学意义(p0.05)。完全应答组治疗前sTRAIL水平与IFN-γ水平、ALT水平呈正相关(P0.01),治疗后sTRAIL水平与IFN-γ水平呈负相关(P0.05)。结论:CHB血清sTRAIL水平升高;核苷类似物抗病毒治疗早期病毒学应答者血清sTRAIL水平下降,尤其是完全应答者在疗程的第4周就有明显的变化。sTRAIL在CHB免疫损伤中起重要作用,在其核苷类似物抗病毒治疗免疫恢复中也起重要作用,可作为核苷类似物治疗CHB早期应答指标预测远期疗效。