应用引物延伸预扩增方法对地中海贫血进行植入前遗传学诊断的初步研究

植入前遗传学诊断 (PGD)由于可检测的材料仅 1～ 2个卵裂球细胞 ,很难进行一个基因的多种突变或多位点基因改变的基因分析。引物延伸预扩增 (PEP)是随机扩增单细胞全基因组的有效方法 ,有望解决这个问题。我们在本研究中探讨PEP在地中海贫血 (珠蛋白生成障碍性贫血 ,地贫 )PGD中的应用。材料和方法1　细胞来源　外周静脉血取自 3例东南亚缺失型α地贫 1杂合子 (- - SEA/αα)患者、5例 β 4 1 4 2 (-TCTT)突变杂合子患者、2例IVS Ⅱ 6 5 4 (C→T)突变杂合子患者。胚胎来自本单位体外受精 胚胎移植过程中由于多精受精或胚胎质量差…     

应用全基因组扩增技术对α地中海贫血进行植入前遗传学诊断的效果分析

目的研究α地中海贫血患者囊胚活检后先进行全基因组扩增后再应用荧光PCR进行诊断的效果。方法回顾分析本中心2015年1月至2016年11月α地中海贫血PGD周期资料,共139个周期,对比分析卵裂球活检后直接应用荧光PCR进行诊断(诊断方法一)与囊胚活检后先进行全基因组扩增后再应用荧光PCR进行诊断(诊断方法二)的结果。结果两组在女方年龄、获卵数、正常受精数均无统计学差异(P0.05),但方法二(7.61±3.05)的平均活检个数显著小于方法一(9.48±3.66)(P0.05)。两种方法的正常胚胎率(35.22%vs.25.87%)、杂合子胚胎率(30.11%vs.50.19%)、异常胚胎率(30.11%vs.23.94%)、诊断失败率(16.21%vs.2.81%)有统计学差异(P0.05),临床妊娠率(50.00%vs.52.17%)无统计学差异(P0.05)。结论囊胚活检后先进行全基因组扩增后再应用荧光PCR进行诊断的效果明显好于卵裂球活检后直接应用荧光PCR进行诊断。     

胚胎实验室关键指标质控专家共识

辅助生殖技术(ART)胚胎实验室涉及的配子及胚胎操作流程多而复杂,如何有效选取并利用关键指标对胚胎实验室进行全面质量管理(TQM)显得尤为关键。因此,中华医学会生殖医学分会制定"胚胎实验室关键指标质控专家共识",为我国各地辅助生殖中心胚胎实验室对其进行有效的质量管理提供参考。     

同杜叮在IVF-ET取卵术镇痛中的应用

目的探讨同杜叮在辅助生殖取卵术中应用的效果。方法分析2010年11月-2011年4月,于本中心行试管婴儿取卵术的1 176例患者资料,按照镇痛药物使用情况,随机分为哌替啶组（573例）和同杜叮组（603例）。收集围术期血压、脉搏、血氧饱和度等数据,记录术中疼痛程度及恶心、呕吐、头晕等不良反应及严重不良反应资料。另外,进行两组间IVF-ET指标比较。结果哌替啶组术后血压及脉搏较同杜叮组低（P均〈0.001）,其余生命体征数据差别不明显（P均〉0.05）。同杜叮组一般不良反应较少（P均〈0.05）。两组间疼痛程度差异无统计学意义（P=0.304）,IVF-ET指标差异亦无统计学意义（P均〉0.05）。同杜叮组术后发生了3例腹腔大出血伴休克。结论在辅助生殖取卵术中使用同杜叮镇痛效果良好,不影响体外受精-胚胎移植结局,但是需要密切注意预防腹腔大出血的发生。     

子宫内膜异位症患者在位和异位内膜组织中 人β防御素-2的表达

 【目的】 检测人β防御素-2(hBD-2)在正常子宫内膜&#65380;子宫内膜异位症(内异症)患者的在位和异位内膜组织中的表达,探讨hBD-2在内异症发病中的作用&#65377;【方法】 选择25例内异症患者的卵巢异位内膜组织(异位内膜组)和相应的在位子宫内膜(在位内膜组),以及25例非子宫内膜异位症的子宫肌瘤患者(对照组)的子宫内膜组织&#65377;采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)和原位杂交技术检测各组内膜组织中hBD-2的基因表达,以及hBD-2在内异症不同临床分期的异位内膜和在位内膜组织中的表达差异&#65377;【结果】 异位内膜组内膜组织中hBD-2的基因表达水平显著高于在位内膜组和对照组(P < 0.05)&#65377;在位内膜组和对照组子宫内膜组织中hBD-2的基因表达水平,差异无统计学意义(P > 0.05)&#65377;异位内膜组中,hBD-2临床分期表达为Ⅰ期高于Ⅲ期和Ⅳ期&#65380;Ⅱ期高于Ⅲ期和Ⅳ期,差异有统计学意义(P < 0.05)&#65377; 【结论】 异位内膜组织中hBD-2的高表达可能参与了内异症的发病&#65377;     

彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用

目的 建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用.为建立新的生殖保护方法奠定基础.方法 通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导人超排获得的小鼠卵子.分别于48 h和72 h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况.结果 彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24 h可见少量DNA泳出,48 h可见大量DNA泳出:通过显微注射导人siRNA 48 h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异.结论 靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法.

Abstract：

Objective To investigate the potential of siRNAs targeting sphingomyelin phosphodiesterase 1 (SMPD1) in protecting the oocytes from apoptosis, and explore new approaches to female fertility preservation. Methods Chemically synthesized siRNA targeting SMPD1 were introduced into mouse oocytes retrieved by hyperstimulation, and the cell apoptosis was analyzed by comic assay 48 and 72 h later. Results In the occytes without any siRNA injection, occyte DNA damage occurred after 24 h, and large amount of DNA fragments migrated from the cells 48 h later. In occytes injected with siRNA003, DNA migration decreased significantly as compared with the control and the other two groups injected with siRNA001 and siRNA002 (P<0.01). Conclusion siRNA targeting SMPD1 may protect the oocytes from apoptosis, and has the potential for use in future female fertility preservation.     

控制性超排卵中卵巢高反应与辅助生殖的安全运行

控制性超排卵是辅助生殖技术的重要步骤,有效的提高了助孕效果,同时也带来了卵巢高反应及卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome,OHSS)。卵巢高反应备受关注,对之具有一定的认识,但仍缺乏统一的判断标准及有效的临床应对策略。卵巢高反应带来了辅助生殖中最严重的并发症,其对亲代健康的影响重大,对子代的影响有待阐明。重视卵巢高反应及其导致的安全问题,是辅助生殖临床中的重要课题。     

人类体外受精与胚胎移植

收治不孕妇女34例,42个治疗周期,采用固定的Fertilin/Pergonal/Profasi超排方案,B超监测卵泡发育并指导经阴道取卵。每周期有6.97±4.1个卵泡发育。获得卵子4.7±4.6个,受精率为71％,卵裂率64％,移植率87.8％。每周期移植的胚胎总分与移植后妊娠率有显著相关性(r=0.8823,P=0.0086),移植胚胎评分高,数量多,妊娠率越高。本组5例妊娠中有3例移植6个胚胎以上。在未建立胚胎冻存技术之前,4个以上的胚胎移植是处理过剩胚胎的权衡方法。本组大部分病人在门诊接受治疗,减轻精神与经济负担。     

精浆弹性蛋白酶水平与精液主要参数和精子功能的相关性分析

目的:探讨精浆弹性蛋白酶与精液主要参数和指标的关系。方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)检测精浆中的弹性蛋白酶,按照WHO人类精液实验室手册要求进行精液常规分析、精子形态分析,检测精子顶体酶活性、精浆抗体(AsAb)、解脲支原体等,分析弹性蛋白酶与男性不育相关因素的关系。结果:209例男性不育患者中,43例患者精浆弹性蛋白酶≥290ng/ml,设为炎症组;166例患者精浆弹性蛋白酶<290ng/ml,设为非炎症组。炎症组的精子密度、精子活动率、a+b级活力精子率、精子顶体酶阳性率均低于非炎症组(P<0.05);而精子畸形率、精浆抗体(AsAb)、解脲支原体阳性率均高于非炎症组(P<0.05)。两组的精液量、PH值和液化时间差异无统计学意义。结论:精浆弹性蛋白酶水平与精液质量有密切的关系,生殖道感染是导致男性不育的重要原因。