慢病毒载体介导2次转基因对人胚胎干细胞特性的影响

目的： 研究2次转基因对人胚胎干细胞（hESCs）多能分化特点和保持自我更新能力的影响。方法：构建携带非转录因子外源基因细胞毒性T细胞相关分子4免疫球蛋白 (CTLA4Ig) 、吲哚胺2,3双氧化酶（IDO）和荧光素酶的慢病毒载体,在hESCs先转导外源基因CTLA4Ig或IDO,完成筛选后转导外源基因荧光素酶。检测hESCs中外源基因的表达和功能,免疫组化和RT-PCR以及流式细胞仪方法检测hESCs细胞表面标记物、类胚体（EB）形成和体内畸胎瘤形成能力。结果：转导的外源基因均能表达并表现相应的功能。2次转导慢病毒载体后hESCs细胞表面标记物肿瘤排斥抗原（Tra-1-60） 和Octomer转录因子-4（OCT-4）染色仍为阳性,能形成EB,RT-PCR检测到甲胎蛋白(AFP)、配对盒基因6（Pax6）和MSI1的表达,异种移植后荧光信号逐渐增强。结论：利用慢病毒2次转导非转录因子外源基因不影响hESCs的未分化状态和多能分化能力,这对hESCs的转基因研究具有借鉴价值。     

不同分子遗传学方法用于自然流产绒毛细胞遗传分析的效果

目的 探讨多重连接探针扩增法(MLPA)+荧光原位杂交(FISH)和比较基因组杂交(CGH)+FISH的分子遗传学方法用于自然流产绒毛细胞遗传分析的效果.方法 收集29例自然流产绒毛组织以及6例选择性终止早期妊娠妇女的绒毛组织,采用CGH+FISH、MLPA+FISH方法进行遗传学分析,并与传统的绒毛细胞培养染色体核型分析结果进行比较.结果 MLPA+FISH检测时间为40 h,CGH+FISH检测时问为120 h,绒毛细胞培养染色体核型分析时间为(240±72)h,3者分别比较,差异有统计学意义(P<0.01).CGH、MLPA、FISH和绒毛细胞培养染色体核型分析的标本成功获检率分别为97%(34/35)、100%(35/35)、100%(35/35)和91%(32/35),4者比较,差异无统计学意义(P>0.01).除去CGH获检失败的1份样本外,MLPA+FISH与CGH+FISH的分析结果一致,CGH获检失败的1例标本经MLPA+FISH检测获得了结果.CGH+FISH或MLPA+FISH检测结果与绒毛细胞培养染色体核型分析结果的不一致率分别为13%(4/31)、12%(4/32),两者比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 MLPA+FISH检测耗时短,检测成功率高;MLPA+FISH检测用于自然流产绒毛细胞遗传分析是对绒毛细胞培养染色体核型分析方法的重要补充.     

妊娠期高血压患者外周血中的脂代谢基因差异表达

【目的】 研究妊娠期高血压疾病患者在孕16~20周外周血白细胞的基因表达谱,寻找妊娠期高血压疾病患者中孕早期外周血白细胞的差异表达基因,并选取异常脂代谢基因进行认证。 【方法】 我院2008年8月至2008年12月间在我院产检且经B超确定孕期为16 ~ 20周的初产妇共800例,随访至妊娠结束,将最终发展为子痫前期的6例患者为研究组,40例正常妊娠妇女为对照组,应用人类全基因组cDNA单荧光芯片检测两组孕妇在妊娠16 ~ 20周时外周血白细胞差异基因表达谱;在差异表达基因中选取氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL) 使用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测血浆浓度;血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)及载脂蛋白 A5(APOA5)进行RT-PCR测定。【结果】 研究组和对照组存在差异表达基因,筛选得到983个差异表达基因,其中719个基因表达上调,264个基因表达下调;研究组oxLDL水平、LOX-1水平较正常组明显升高(P < 0.05);研究组APOA5水平较正常组明显降低(P < 0.05);oxLDL水平与LOX-1 mRNA表达水平呈正相关(r为0.91,P < 0.05)。【结论】 妊娠期高血压疾病患者外周血白细胞的脂代谢基因oxLDL、LOX-1及APOA5基因表达在妊娠16 ~ 20 周时与正常妊娠存在明显差异。     

子宫腺肌病治疗——生殖医生之我见

子宫腺肌病是育龄期女性的多发病。虽然尚无子宫腺肌病导致不孕的直接证据,但越来越多的研究表明,子宫腺肌病可能影响女性的生育力。子宫腺肌病合并生育障碍患者的治疗选择及辅助生殖技术的应用近年来备受关注。治疗方案应当是生殖科医生与妇科医生综合多方面因素共同做出的个性化决策。     

体重对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响

目的探讨在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中,女方体重对妊娠结局的影响。方法对中山大学附属第一医院生殖医学中心2005年1月至2008年3月进行2973个IVF周期和1884个卵胞浆内单精子注射(ICSI)周期进行辅助生殖的患者,年龄小于40岁,排除常见的与自然流产有关的疾病,分别进行回顾性分析。按照WHO推荐的亚洲人体重指数(BMI)分级标准,将患者分为体重过低组(BMI<18.5)、体重正常组(BMI18.5~<23.0)、超重组(BMI23.0~<25.0)、肥胖组(BMI≥25.0),分别比较IVF及ICSI患者的基本临床资料、卵子和胚胎情况、妊娠结局。结果IVF及ICSI各组患者的年龄、不孕年限、周期第次、基础内分泌水平差异无统计学意义;卵子和胚胎资料差异无统计学意义;IVF及ICSI各组的周期取消率、种植率、妊娠率差异均无统计学意义;早期流产率在ICSI各组患者中差异无统计学意义,而在IVF患者中,肥胖组早期流产率显著高于体重正常组;无论IVF还是ICSI周期,肥胖组抱婴回家率均显著低于体重正常组。结论女性肥胖增加IVF周期的早期自然流产率;并对IVF及ICSI的妊娠结局均产生负面影响。     

（五）胚胎解冻复苏及移植知情同意书

人类辅助生殖技术的诞生,使得成千上万的不孕不育夫妇实现了生育自己后代的愿望。随着相关学科的发展,人类辅助生殖技术及其衍生技术也得到了迅速发展。相对于其他的医疗技术,该技术的特殊性是采用医学方法在体外对配子和胚胎进行以生殖为目的的操作,因此,所涉及的医学伦理问题复杂,并存在一定的医疗风险。知情同意书是患者表示自愿进行医疗治疗的文件证明。规范的知情同意书必须符合“完全告知”的原则,采用患者能够理解的文字和语言,使患者能够“充分理解”,以配合医生实施适宜的治疗方案。在实施人类辅助生殖技术的过程中需要与不孕不育夫妇进行充分的沟通与讨论,获得不孕不育夫妇的理解和支持,并签署知情同意书。同时,实施人类辅助生殖技术还必须遵守保护后代的伦理原则,遵守相关法律规章制度,不违背公序良俗和社会公德等。为此,中华医学会生殖医学分会充分征求生殖医学、伦理学、管理学、法理学、社会学等各领域专家和群众代表的意见,针对人类辅助生殖技术的特殊性,逐渐制定一套人类辅助生殖技术知情同意书的推荐范本。此期推出《胚胎解冻复苏知情同意书》、《胚胎冷冻保存知情同意书》和《植入前胚胎遗传学诊断知情同意书》。因为,目前人类辅助生殖技术...     

辅助生殖技术中的伦理问题

1978年 7月 2 5日 ,世界上第一例试管婴儿ＬｏｕｉｓｅＢｒｏｗｎ在英国诞生。它标志着辅助生殖技术在临床应用的成功。我国于 1989年诞生了第一例试管婴儿。近年这一领域更获得了飞跃的发展。但随着辅助生殖技术的不断发展、新技术的不断诞生 ,她对社会的影响也是始料未及的。曾有报道 ,母亲替女儿怀孕 ,即将女儿的胚胎植入自己的子宫 ,妊娠并生下了孩子。那么 ,她是孩子的母亲呢 ,还是孩子的“外祖母” ?许许多多的新技术令社会的道德观念和医学、伦理学和法学都面临着巨大的挑战 ,激烈的辩论有可能孕育着深刻的变化。1　ＡＲＴ的内容　　…     

卵巢对超排卵治疗的反应过度与不足

超排卵（ｓｕｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ）又称控制的卵巢刺激（ｃｏｎｔｒｏｌｅｄｏｖａｒｉａｎｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）技术，在概念上有别于一般的诱发排卵（ｉｎｄｕｃｅｄｏｖｕｌａｔｉｏｎ，ｏｖｕｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）。诱发排卵通常是指在有排卵障...     

供卵治疗卵巢早衰妊娠成功（附1例报告）

本文报道了我国首例卵巢早衰患者采用激素替代治疗和供卵获得妊娠成功。供者采用ＧｎＲＨ－ａ／ＨＭＧ／ｈＣＧ控制的超排卵方案。受者使用类固醇激素替代治疗（ＳＣＲＴ）方案，促使子宫具备胚胎植入的条件，并与供者排卵周期同步。受者于月经周期第１７天接受经体外受精移植的胚胎５个。移植后１４天妊娠试验阳性，采用外源性激素维持妊娠直至孕１４周，于１９９４年１月１４日分娩正常的足月活男婴。本文对卵巢早衰的发病、病因、激素替代治疗，供卵的指征及成功因素进行了讨论。