与临床紧密结合的生物化学教学方法实践与体会

当前,我国现行的医学教育基本上是采用基础、临床、实习三段式教学[1].这种传统的医学教育教学模式由于过度地强调课程知识的系统性和完整性,而忽略了课程的交叉渗透与融合,从而导致基础与临床脱节,理论与实践脱节,这是现行医学教育教学过程中遇到的最主要问题.     

乳酸脱氢酶C4在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)在邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织的表达水平及其意义。方法采用Affy-metrix Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array及其方法检测乳酸转运和氧化相关基因在H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异,芯片重复两次;并采用实时荧光定量PCR对两种高乳酸亲和力的脱氢酶基因Ldhb和Ldhc在各种证候中的表达量进行检测。结果乳酸转运相关基因的表达要高于氧化相关基因,尤其以H22接种后早期最明显;Ldhb基因的表达在H22接种后早期、中期和晚期变化不明显,而Ldhc基因在H22接种后早期气虚、中期和晚期的表达也不明显,且与Ldhb表达量相近,但它在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中表达量显著升高。结论在荷瘤小鼠肿瘤组织中,尤其是H22接种后早期,肿瘤细胞产生的乳酸作用不仅在于氧化产能;LDH-C4可能代替LDH-B4参与了早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织缺氧肿瘤细胞的代谢拯救途径。     

细胞色素超家族基因在DEN诱发大鼠肝癌过程中的表达特征

[目的]探讨细胞色素基因在肝癌发生过程中表达的特征。[方法]对正常大鼠肝组织以及DEN诱癌后大鼠第4周、8周、16周、20周（肝癌形成）含肝癌组织Affymetrix Rat 230A GeneChip芯片所检测数据标准化处理后，进行差异分析。[结果]从芯片中共筛选出与细胞色素有关的基因81个，其中已知的细胞色素超家族成员58个，包括40个细胞色素P450（Cyp）基因家族成员和11个细胞色素C氧化酶（cytochrome c oxidase，Cox）基因家族成员，以及7个其它成员；其次，在整个DEN诱癌过程中，表达有显著性变化的细胞色素基因有19个，包括9个明显上调的基因和10个明显下调的基因。[结论]细胞色素、尤其是细胞色素P450家族成员可能在大鼠肝癌发生过程发挥重要作用，值得注意的是Cypla1、Cypla2、Cyp3a3、Cyp4bl和Cyp27bl等人类癌症相关基因．以及Cyp26al、Cyba和CoxVa等人类共有基因．变化显著．可能有助于对人类肝癌发生过程的研究及肝癌的诊治。     

不同证候H22荷瘤小鼠垂体一致上调或下调的基因

目的：观察常见不同证候荷瘤小鼠垂体基因表达的特征。方法：采用H22荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个证候及正常小鼠垂体基因的表达,筛选出不同证候一致上调或下调的基因。结果：荷瘤小鼠一致上调的基因有Alas2、Ube2l6、Sgk、BC055107、Cdh26、Bhlhb2、Nr1d2、Slc39a14、Serpina3n、Ms4a6c、Lcp1、Dhx8、Il1r1、S100a8、S100a9、Cxcl1、Hp、Csf1r、RIKEN cDNA2610307008gene、Phactr3、Mknk1、Aloxe3、Aqp11等23个;一致下调的基因有2310047A01Rik、Hoxa10、Cryaa、Hspa1a、Dub2a、Mpz、Klk1、Naaladl1、Prph1等9个;其中部分基因在一些证候中的表达有显著的改变。结论：肿瘤发生后,H22荷瘤小鼠垂体存在大量基因表达的差异,其中部分与证候有关。     

阳气虚证H22荷瘤小鼠垂体差异表达的基因

目的:筛选荷瘤小鼠阳气虚证垂体差异表达的基因,并简要分析其功能特征.方法:采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,及GeneChip Mouse Exon1.0 ST Array等技术,检测H122荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因,筛选阳气虚证差异表达的基因.结果:筛选到阳气虚证独特上调的基因14个:LOC669166、Cd8b1、Cd3d、Ly6d、Lat、Orm2、Dntt、1700021K02Rik、A130072A22Rik、IDC669782、Ptpre、Igk-V21-9、Cxcll3、LDC668417,其中多数基因在正常小鼠及其他证候小鼠的垂体表达很低或几乎关闭;独特下调的基因3个:Wfdc1、Spook3、Mfan4.结论:H22荷瘤小鼠阳气虚证垂体基因表达与其他证候存在较大差异,其中部分可能是阳气虚证的标志基因.     

医学基础总论整合课程在教改班教学的探索与实践

医学基础总论整合课程是将无法整合到“器官系统”的基础医学内容通过新的组合方式进行整理与合并,形成内容冗余度少、结构性好和整体协调的一门课程,涵盖细胞生物学、生物化学、解剖学、遗传学、组织胚胎学、生理学、病理学、病理生理学、免疫学、微生物学、寄生虫学及药理学等12门课程的内容,实现基础医学之间总论部分的整合以及与临床医学学科初步整合。本教学团队在本校2018级教改班中进行教学实践探索,现对实践效果进行了总结分析,旨在为中医药院校临床课程体系建设和课程改革提供参考。     

基于网络药理学探讨健脾益气方治疗DEN肝癌大鼠的分子机制及关键通路的验证

目的 利用网络药理学分析方法探讨健脾益气方治疗肝癌的活性成分与靶点;并在此基础上利用二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌大鼠,对其中筛选出的关键通路白介素-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)进行验证.方法 采用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库、中国知网和Swiss Target Prediction平台获取健脾益气方的活性成分和对应靶点;基于Gene Cards、CTD以及gene数据库获取肝细胞癌(HCC)相关靶点;将疾病相关靶点和药物靶点取交集后得出潜在靶点,导入Cytoscape软件绘制活性成分-靶点网络图;并利用STRING数据库对潜在靶点进行蛋白相互作用(PPI)网络构建与分析,以获取核心靶点.采用腹腔注射DEN[70 mg/(kg·d)]制备肝癌大鼠模型.将大鼠随机分为正常组,模型组,健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g/kg),STAT3抑制组(C188-9,4.5 mg/kg)和糖蛋白130(gp130)抑制组(SC144,4.5 mg/kg),均连续干预4周.采用HE染色法观察大鼠肝脏组织病理形态学变化;采用RT-qPCR法检测大鼠肝脏组织IL-6、gp130、Janus激酶1(JAK1)、Janus激酶2(JAK2)和STAT3的mRNA表达水平;采用ELISA法检测大鼠血清IL-6含量;采用Western Blot法检测大鼠肝脏组织gp130、JAK1、p-JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平.结果 通过网络药理学分析获得64个活性成分和146个潜在靶点,这些分子参与的信号通路主要与IL-6/STAT3有关,且STAT3是其中潜在的核心靶点.动物实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠IL-6和STAT3 mRNA和蛋白质水平,及p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3水平均明显上调(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,健脾益气方中、高剂量组,及STAT3抑制组和gp130抑制组大鼠血清IL-6含量,肝脏组织IL-6、gp130和STAT3 mRNA表达水平,gp130和STAT3蛋白水平,及p-JAK1/JAK1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3水平均降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 健脾益气方可通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗肝细胞癌的作用,而下调IL-6/STAT3炎症信号可能是健脾益气方治疗HCC的重要途径之一.     

神经肽在不同证候H22肝癌小鼠肾上腺组织的表达特征

[目的]揭示神经肽在不同证候肝癌小鼠肾上腺组织的基因表达特征。[方法]采用实验小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1．0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注40个确切的神经肽基因在证候间的表达。[结果]在正常与肝癌小鼠肾上腺中,40个神经肽基因表达呈现3种情形：①生长激素（GH）、催乳素（PRL）、生长介素（SM）,神经肽Y（NPY）、缩胆囊肽（CCK）,阿黑皮素原（POMC）、脑啡肽（ENK）等为高表达基因;②垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）、卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成激素（LH）、促甲状腺激素（TSH）、生长抑素（SS）、生长激素释放激素（GHRH）、神经降压肽（NT）、胰高血糖素样肽（GLP）、胰多肽（PP）、中间叶促皮质样肽（CLIP）、催产素（OT）、肾上腺髓质素（ADM）、P物质（SP）、K物质（SK）、8睡眠诱导肽（DSIP）、甘丙肽（Gal）、血管紧张素Ⅱ（AT-Ⅱ）和血管紧张素原（ATG）等为低表达量基因;③促性腺激素释放激素（GnRH）、胎盘生乳素（PL）、促甲状腺释放激素（TRH）、促皮质激素释放激素（CRH）、血管活性肽（VIP）、胃泌素释放肽（GRP）、神经肽K（NPK）、强啡肽（DYN）、血管加压素（AVP）、降钙素基因相关肽（CGRP）、胰岛淀粉样多肽（IAPP）、尾加压素Ⅱ（UⅡ）、内皮素（ET）、脑钠素（BNP）和心钠素（ANP）等神经肽基因不表达。就证候而言,与正常组比较,总体趋势为下调的基因多,上调的基因少,其中,邪毒壅盛证的LH、ET上调,气虚证中GH和POMC下调,阳气虚证和气阴阳虚证ATG和Gal上调;而FSH在各虚证中均下调,PACAP、CCK、NT基因在各个证候中均显著下调近10倍。[结论]神经肽基因在小?     

STAT3:慢性炎症介导肝癌进程的关键分子

STAT3是信号转导及转录激活因子家族成员,在肝癌等慢性炎症相关性肿瘤中异常激活。作为肝癌炎症微环境中的关键信号分子,STAT3不仅参与肝癌发生过程中的"炎癌转化",而且通过多种方式促进肝癌进展中癌细胞的增殖、侵袭与转移,是一个潜在的肝癌治疗靶标。综述了近几年STAT3与肝癌关系的新进展。     

活血化瘀法调节DEN肝癌大鼠相关基因的生物信息学分析

目的:研究活血化瘀法对DEN大鼠肝癌基因表达谱的影响,初步探讨活血化瘀治疗肝癌的分子机制。方法:利用DAVID、PATHWAY MINER、STRING和pSTIING等在线分析工具,对前期检测的活血化瘀法干预前后DEN大鼠肝癌基因表达谱变化进行生物信息学分析。结果:活血化瘀法调节的差异基因454个,包括上调表达274个和下调表达180个。这些差异基因表达产物主要位于细胞的胞外区域,及细胞突起和突触,主要涉及神经元分化、细胞组分形态、细胞黏附、钙离子结合等生物过程或分子功能;参与多条信号通路,但主要与单核细胞的增殖和分化,及肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)相关。这些差异蛋白的相互作用主要集中在16个蛋白,其中被活血化瘀法下调的Vim和Mtr在更为复杂的转录因子网络图谱中仍处于中心节点位置,结合文献挖掘发现它们在肝癌细胞中发挥了非常重要的作用。结论:活血化瘀法对DEN肝癌大鼠的治疗是多方位的,目前对活血化瘀药抗肿瘤的争议可能与具有很强的活跃基因表达的能力,引起一些基因或信号通路在肿瘤细胞中过度激活或抑制所致;Vim和Mtr基因可能是活血化瘀治疗肝癌的重要靶点,但针对Mtr的干预要防止引起促癌/抑癌基因表达失衡。